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如何進行CCK-8實驗，操作步驟有哪些？2023/07/06

1）制備細胞懸液，計數。2）在96孔板中接種細胞懸液，每孔約100μl，同樣的樣本可做3個重復。3）將培養板放入培養箱中預培養一段時間（37℃,5%CO2），細胞貼壁需要大約2-4h，如果是懸浮細胞，該步驟可以省去。4）每孔各加入10μlCCK-8溶液，由于加入的CCK-8量比較少，可能會因試劑沾在孔壁上而帶來誤差，建議在加完試劑后輕輕晃動培養板以幫助混勻，或者直接配置含10%CCK-8的培養基，以換液的形式加入。另外注意，加樣的過程中盡量不要產生氣泡。5）將培養板放入培養箱中孵育1-4h。因為

離心管對于細胞復蘇的作用2023/07/05

細胞復蘇和凍存講究“慢凍快溶”，復蘇時一定要將凍存在液氮或-80℃中凝固的細胞凍存液快速融化至37℃，使胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。●打開水浴鍋加熱至37℃。●超凈臺上放好離心管（離心管規格選用15ml的），細胞培養瓶，移液管，紫外滅菌至少20至30分鐘，吹風5至10分鐘除去臭氧。●37℃預熱好要復蘇細胞的培養液，也可以不用預熱培養液，根據細胞情況選擇。●向離心管中加約5至10ml培養液，從液氮罐或-80℃中取出凍存細胞，立即將凍存管放入37℃

細胞免疫熒光實驗2023/07/04

一:細胞培養熒光顯微鏡對于直接用培養皿拍攝都沒有什么壓力，不過依然更建議做爬片，不僅效果更好而且更適合拍共聚焦，不想拍了也可以冷凍保存。爬片的預處理需要用多聚賴氨酸增加細胞粘附性1，用多聚賴氨酸涂在爬片上放置30-120分鐘。2，然后用滅菌的超純水清洗和浸泡,。3，自然干燥了之后放在紫外下照射至少1個小時以上。爬片之前經過高溫滅菌的可以不需要這么久。4，如果用普通蓋玻片而不是專用細胞爬片的話，一般還需要用0.1%Tween-20的PBS洗一下，因為根據我的經驗，幾個牌子的普通蓋玻片都比較臟，不能

瓊脂糖微球的制備2023/07/03

1.制備瓊脂糖微球按照一定的瓊脂糖濃度通過加熱進行溶解（一般為4%或6%，相對較小的濃度制備的微球孔徑較大），攪拌后得到均勻的水相溶液。溫度越高，瓊脂糖的粘度就越低。不同濃度的瓊脂糖黏度不一樣，一般來說濃度越大粘度越高，需要溶解的時間越長；在相同的加熱時間上，一般來說濃度越大所形成的微粒粒徑也越大。加熱時間的長短也會對后續成球造成一定影響，如果時間過短，那么瓊脂糖并未溶解或者是黏度較大，則會形成較大顆粒，且分散系數也不理想；如果時間過長，則因在高溫下瓊脂糖可能會發生一定程度的水解，分子量下降，黏

如何用PBS緩沖液清洗細胞？2023/06/30

一：取材撕取洋蔥鱗莖內表皮2～3mm2置于載玻片上，用吸管加6mmoI的PBS緩沖液兩滴，使材料充分浸入到液體中，處理約5分鐘。二：去垢處理用吸水紙吸凈浸泡材料的PBS緩沖液，加2～3滴37°C預溫的去垢劑1%TritonX-100，使液體充分浸泡材料，并立即放入37C水浴鍋中處理15分鐘。三：沖洗吸去1%Triton，用6mmol的PBS緩沖液輕輕沖洗，反復兩至三次。四：固定用吸水紙吸盡PBS緩沖液，加2滴3%戊/二/q固定約20分鐘。五：沖洗吸去3%戊二/醛固定液，用6mmol的PBS緩沖液

酶活力測定的注意事項2023/06/29

（1）酶促反應過程中，只有最初一段時間內反應速度與酶活性成正比，隨著反應時間的延長，反應速度即逐漸降低。（2）要規定一定的反應條件，如時間、溫度、pH等，并在醫學教育網整理酶測定過程中保持這些反應條件的恒定，如溫度不得超過規定溫度的士1℃，pH應恒定。（3）配制的底物濃度應準確且足夠大，底物液中應加入不抑制該酶活力的防腐劑并保存于冰箱中，以防止底物被分解。（4）標本要新鮮，由于絕大多數酶可因久置而活力降低，標本如無法及時測定，應保存于冰箱中。用血漿時，應考慮到抗凝劑對酶反應的影響。有些酶在血細胞

移液器的操作2023/06/28

第一步，安裝吸頭對于單道移液器來說，移液器末端垂直插入吸頭，輕壓左右微微轉動即可上緊；對于多道移液器來說，將第一通道與最后一個通道的吸嘴與吸頭對齊后，垂直向下安裝吸頭，并左右小幅度搖擺。重點來了，不能反復撞擊移液器來確保吸頭氣密性，長期用這種方式裝配吸頭，會導致吸頭變形，移液器零部件因撞擊而松散，從而影響移液準確性。第二、容量設定正確的容量設定分為兩個步驟，第一個步驟是粗調——通過排放按鈕將容量值迅速調整至接近自己的預想值；第二個步驟是細調——當容量值接近自己的預想值以后，應將移液器橫置，水平放

聚合酶鏈反應2023/06/26

PCR由變性–退火–延伸三個基本反應步驟構成：①模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備;②模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;③引物的延伸：DNA模板–引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留

細胞培養的原理和步驟2023/06/25

細胞培養:體外模擬體內需要的生長條件（溫度，營養等），然后加上一些處理條件，比如做藥物篩選，就可以做抗性基因的表達的篩選，比如還可以測定某個基因敲低或是過表達的產物，這個當然要結合WB來看最后基因的表達產物是否升高哦，細胞培養的應用還有很多，歡迎大家在后臺留言。細胞培養的基本原理：細胞傳代（生存空間和營養不足，長得太密，代謝廢物太多，要洗洗，同時也要分離出一部分細胞，要加入新的培養液），換液（生存空間和營養剩余，但是代謝廢物太多，要洗洗，要吃飯，才能長好，所以要洗和加入新鮮培養基），凍存（太多了

RNA提取實驗的步驟2023/06/21

RNA提取是指從樣品中純化RNA的過程。RNA提取的常規方法稱為硫氰酸胍-苯/酚-氯/仿提取。Guanidiniumthiocyanate使蛋白質變性。此外，它破壞水分子的氫鍵并用作離液劑。RNA提取中使用一種特殊試劑，稱為三試劑。它含有硫氰酸胍、苯/酚和乙酸鈉。RNA提取的基本步驟的目的與DNA提取的目的相似。RNA提取的方案如下所述。1.用冰冷的PBS洗滌細胞以維持細胞的滲透壓。2.吸出細胞并用Tri-reagent勻漿樣品。3.加入氯/仿并搖勻。4.離心可能會出現三層。頂層是透明的水層。中

磷酸緩沖鹽的配置方法及作用2023/06/20

PBS緩沖液，是生物化學研究中使用最為廣泛的一種緩沖液，主要成分為Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl，一般作為溶劑，起溶解保護試劑的作用。由于Na2HPO4和KH2PO4有二級解離，緩沖的pH值范圍很廣，而NaCl和KCl主要作用為增加鹽離子濃度。如有需要PBS還可以補加1mmol/LCaCl2和0.5mmol/LMgCl2，以提供二價陽離子。配制方法稱取8.0gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4、0.24gKH2PO4溶于800mL蒸餾水中，用HCl調節溶液至7.4

離心管作用細胞復蘇轉移2023/06/19

細胞復蘇和凍存講究“慢凍快溶”，復蘇時一定要將凍存在液氮或-80℃中凝固的細胞凍存液快速融化至37℃，使胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。實驗材料：離心管、細胞培養瓶、移液管實驗步驟：●打開水浴鍋加熱至37℃。●超凈臺上放好離心管（離心管規格選用15ml的），細胞培養瓶，移液管，紫外滅菌至少20至30分鐘，吹風5至10分鐘除去臭氧。●37℃預熱好要復蘇細胞的培養液，也可以不用預熱培養液，根據細胞情況選擇。●向離心管中加約5至10ml培養液，從液氮罐或

細胞培養基的類型2023/06/15

經典的培養基有很多種，其中DMEM、RPMI1640、MEM、DMEM/F12都是應用廣泛的培養基。其他如M199、IMDM、L15培養基等也用于某些細胞的培養。其具體的特征及應用如下：1、BME細胞培養基基礎Eagle培養基(BME)是一種廣泛使用的合成基礎培養基，可支持很多種類的哺乳動物細胞生長。BME最初1955年由HarryEagle針對HeLa細胞和小鼠成纖維細胞開發，其發現了體外細胞生長的要求。此后BME已用于其他人細胞系，包括WI-38和MRC-5。BME含有八種B族維生素、十種必

ELISA實驗注意事項2023/06/14

1、固相載體選擇聚苯乙/烯：具有較強的吸附蛋白質的性能，抗體或抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學活性。聚氯乙/烯：聚氯乙/烯對蛋白質的吸附性能比聚苯乙/烯高，但空白值也略高。良好的ELISA板應該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間、同一板各孔之間性能相近。2、包被①板孔的選擇：ELIS級別的微孔板②抗體選擇：選擇支持ELISA實驗的抗體，根據推薦濃度稀釋或摸索最適濃度③包被緩沖液：pH9.6碳酸鹽緩沖液或pH7.2磷酸鹽緩沖液④包被溫度：2-8℃過夜包被或室溫（37℃）包被2h⑤包被濃

養好的細胞如何凍存？2023/06/12

在不附加任何保護劑下直接凍存細胞時，細胞內和外環境中的水都會形成冰晶，能導致細胞內發生機械損傷、電解質升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細胞死亡。如向培養液加入保護劑，可使冰點降低。在緩慢的凍結條件下，能使細胞內水份在凍結前透出細胞。貯存在﹣130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。細胞凍存時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，待復蘇時重新進入生長分裂周期。實驗開始前，將凍存管、15毫升離心管、移液管、移液槍、槍頭等放入無菌超凈工作臺，以紫外線照射30分鐘。采用通風機通風3分鐘。以

培養微生物時為何培養皿要倒置？2023/06/07

1．減緩蒸發：倒置培養皿可以減緩培養皿內培養基水分的蒸發；2．方便取用：培養皿蓋子大而底小，如果正著放，取用時容易只拿到蓋子，從而造成平皿內培養基的暴露，可能會因此導致培養基產生污染或者出現平皿掉落等情況。3．便于觀察：培養皿倒置，可控制培養皿內的菌落蔓延，有利于形成單菌落，便于實驗觀察；4．避免污染：倒置可以防止在實驗過程中，培養皿內的水汽在皿蓋上冷凝成水珠滴落到培養基上，將雜菌引入培養基，造成污染，從而影響到培養基中微生物的生長。5．方便收集：有時候培養的目標是收集細菌的代謝物，然而代謝物有

如何選擇適合的細胞凋亡試劑盒？2023/06/06

細胞調亡是細胞主動死亡的過程，并出現一系列特征變化。包括核固縮、核碎裂、凋亡小體形成，以及DNA特征性片段化、新的基因表達和特定的生物大分子合成等。流式細胞儀可以對不同細胞凋亡的過程進行定性和定量檢測，通過檢測細胞膜完整性來反應細胞凋亡是常用的流式檢測細胞凋亡常用方法之一。其原理是：①用AnnexinV檢測早期凋亡細胞：AnnexinV可以結合細胞膜上的磷酯酰絲氨酸，磷酯酰絲氨酸位于正常細胞膜內側，不會被檢測到，凋亡時外翻到細胞膜外表面，可以被檢測到。②用PI或者7AAD檢測晚期凋亡細胞：早期凋

酶聯免疫吸附實驗怎么做？2023/06/01

1.原理：免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發生的高選擇性高特異性識別和結合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法，酶聯免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別，信號輸出和數據處理。2.步驟：免疫識別是在聚苯乙/烯制成的96孔板上包被抗體，而后利用抗體識別待測的抗原（通常是疾病的蛋白質生物標記物，病毒，細菌等等，從復雜待測液中將抗原吸附到96孔板表面。接著用帶有辣根過氧化酶（HorseradishPeroxidase,HRP）、熒光或放射性標記的抗體通過

離心管與EP管的區別是什么？2023/05/30

1.EP管是一種小型的離心管，主要是1.5毫升容量的離心管，可與微型離心機一起使用，主要用于微量試劑的分離。EP管為離心管，而離心管不一定是EP管，所含離心管范圍較大，有較多的規格。EP管覆蓋范圍更大，規格也更多。按大小可分為大量離心管、普通離心管和微量離心管。2.塑料離心管通常是一次性實驗用具，不建議多次重復使用。為了節約成本，可以根據需要對離心管進行再利用，但要保證實驗結果的科學性，需要通過高溫高壓消毒。PE材料離心管，不能高溫高壓消毒。3.離心式管道，英文名稱：centrifugaltub

脂質體包裹技術是什么？2023/05/29

1.脂質體包裹技術的起源起初，它是一種運用于醫藥學領域的載藥手段，主要用于增強藥物的透皮吸收能力。但隨著消費者對化妝品功效性要求的提高，這項技術也逐漸應用到化妝品領域。2.脂質體的結構及作用機理脂質體是由磷脂為膜材包合而成，磷脂是形成脂質體雙分子層的基礎物質，具有良好的生物相容性。脂質體與細胞膜（生物膜）結構相似，主要成份磷脂等類脂物是細胞膜的主要成份，所以脂質體與細胞膜之間有很強的親合力。脂質體的膜與生物膜融合，脂質體所包含的活性成份被釋放而進入細胞內，或者整個脂質體被細胞吞噬，活性成份在細胞