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浙江聯碩生物科技有限公司
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在PCR反應體系中添加劑DMSO的作用2024/05/16
DMSO主要用于高GC含量的模板擴增,可能的機理是改善GC含量高的DNA的變形情況,降低其二級結構,使得聚合酶在二級結構處延伸。DMSO可以提高PCR的特異性,幫助擴增一些難擴的模板。當體系中加入DMSO時,可適當降低退火溫度。在實踐中,聚合酶鏈式反應可能因各種原因而失敗,通常表現為兩個問題,一是目的模板的擴增量太少,二是非目的基因擴增太多。這種情況研究人員通常會在反應體系中加入合適的添加劑進行解決。通常添加劑的作用主要是降低基因的二級結構或者降低非特異性的啟動。下面是幾種常用的添加劑以及它們的
凍存管的使用注意事項2024/03/14
凍存管保存環境1、未經使用的凍存管可在室溫或2-8℃保存12個月。2、已經接種的凍存管在-20℃保存,12個月內可有良好的菌株保存效果。3、已經接種的凍存管在-80℃保存,24個月內可有良好的菌株保存效果。凍存管保存時間1、未經使用的凍存管可在室溫或2-8℃保存。2、已經接種的凍存管在-20℃或-80℃保存。凍存管的使用步驟1、從細菌純培養物中挑取新鮮培養物配成大約為3-4麥氏比濁度的菌懸液接種與菌種保存管中。2、擰緊保存管,來回顛倒4-5次使細菌乳化,不能旋搖。3、把保存管放入冰箱保存-20℃
酶標板分類與性能判斷2024/02/27
酶標板作為ELISA檢測實驗中的輔材,起著舉足輕重的作用并直接影響最終實驗結果,酶標板的好壞主要取決于其對蛋白吸附的靈敏度、板孔間蛋白吸附能力差異以及所采購酶標板批次間的差異。因此,選擇一款蛋白吸附靈敏度高、對蛋白吸附能力孔間差異小、批次間差異小的酶標板產品,是實驗者獲得可靠、穩定實驗結果的保障。酶標板分類:根據不同的分類標準,酶標板有著不同的分類。一、根據孔數,可分為96孔、48孔等,由于酶標板主要是配合酶標儀用,目前市面上的酶標儀最多為96孔,因此酶標板最為常用的也是96孔。二、根據其底部的
冰凍切片包埋劑的制備方法2024/02/19
冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度,然后進行切片的方法。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便,而多應用于手術中的快速病理診斷。制備步驟:將組織在恒溫冷凍機里面切片。冷凍腔內的溫度一般設置為-18℃至-25℃,根據不同組織調節不同腔溫,平時應將冷凍頭放置在冷凍臺上。冷凍切片機應長期處在冷凍恒溫狀態。1、當冰凍組織提取好之后,在冷凍頭上放少量的OCT或羧田基纖維素(可用普通膠水代替),放上組織,速凍。2、待組織凍結后,將冷凍頭裝刀切片機上。3、粗切,修出切面細切幾張,用毛筆刷去刀上組織片
夾心Elisa和競爭性Elisa的區別2024/01/30
什么是夾心ELISA?夾心ELISA是一種常用于檢測和定量免疫測定中抗原的ELISA。它是一種酶聯免疫吸附測定,使用兩種抗體:捕獲抗體和檢測抗體。在這種技術中,樣品中的抗原在抗體之間結合。ELISA的目的是檢測樣品中靶抗原的存在。因此,在夾心ELISA的情況下,靶抗原在捕獲抗體和檢測抗體之間結合。在程序開始時,捕獲抗體已經固定在表面上。然而,檢測抗體是定量前的最后一步。夾心ELISA中的兩種抗體結合到靶抗原上的不同位置。此外,捕獲抗體和靶標抗體不干擾彼此的結合能力非常重要。夾心ELISA中的步驟
ELISA試劑盒標曲顯色過強無明顯梯度2024/01/23
1、主要懷疑點:洗板不充分:1.1、機器洗版:確保機器設置的針頭能吸干孔中液體,并且加液針頭能加液大于350ul,加液針頭沒有被異物或者結晶鹽堵住。1.2、手動洗板,嚴格按照步驟,使用干凈滅菌的槍頭和加樣槽,使用無氧化劑的吸水紙。加350ul洗液,靜置90秒,在吸水紙上拍干孔中液體后再加入下一步洗液或者試劑。1.3、特別注意,在加入TMB前的洗板步驟極其重要,殘留的HRP酶會直接導致TMB顯色。2、次要懷疑點:2.1、TMB已經污染,檢測TMB是否透明無色,如果偏藍就是污染了。2.2、檢查配制洗
CCK-8 細胞增殖和細胞毒性實驗2024/01/16
實驗步驟:1.種板數:根據你摸索的,或者查閱文獻確定你需要的種板濃度,根據種板濃度對細胞懸液進行稀釋,通常細胞增殖實驗每孔加入約1000-2000個細胞100ul,細胞毒性實驗每孔加入約5000~10000個細胞100ul(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。2.種板:以96孔板為例,96孔板橫向是1-12的數字,縱向是A-H,可做多個實驗組,每組設置4-6個復孔,同時設置空白組,最邊緣孔加入PBS緩沖液減少蒸發帶來的影響,然后將細胞置于37℃5%CO2細胞培
透析的原理和過程2024/01/09
一、透析的原理透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內,將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋內,而鹽和小分子物質不斷擴散透析到袋外,直到袋內外兩邊的濃度達到平衡為止。保留在透析袋內未透析出的樣品溶液稱為“保留液”,袋(膜)外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。透析的動力是擴散壓,擴散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶質在膜內外兩邊的濃度梯度,還正比于膜的面積和溫度,通常是4
ELISA實驗原理2024/01/03
ELISA(酶聯免疫吸附試驗)是一種常用的生物化學分析技術,可用于判斷受檢標本中是否含有待檢測抗原或抗體,是免疫反應的定性和定量檢測方法,也是許多科研人員的日常實驗之一。原理酶標儀的主要操作是使用光電比色計或分光光度計,測量光通過測試樣品前后的能量差。測試物質吸收引起的光能差通常與測試物質的濃度線性相關。酶標儀的波長范圍通常為400nm至750nm,并受濾光片或衍射光柵(納米)限制。光學系統中通過光纖為含有樣品的微孔板孔提供光。穿過樣品的光束直徑范圍為1至3毫米,樣品發出的光由檢測裝置檢測,檢測
冰凍切片包埋劑的制備方法及注意事項2023/12/26
制備步驟:將組織在恒溫冷凍機里面切片。冷凍腔內的溫度一般設置為-18℃至-25℃,根據不同組織調節不同腔溫,平時應將冷凍頭放置在冷凍臺上。冷凍切片機應長期處在冷凍恒溫狀態。1、當冰凍組織提取好之后,在冷凍頭上放少量的OCT或羧田基纖維素(可用普通膠水代替),放上組織,速凍。2、待組織凍結后,將冷凍頭裝刀切片機上。3、粗切,修出切面細切幾張,用毛筆刷去刀上組織片。4、放下抗卷板,開始切片,切片速度一般為5-6微米,切出的片子用載玻片貼附后立即放入甲醇冰醋/酸液(97ml甲醇+3ml冰醋/酸)中固定
PCR常見問題2023/12/21
1.無擴增條帶(1)酶失活或在反應體系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或運輸不當而失活,往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結果。(2)模板含有雜質。特別是對甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸,造成DNA脫嘌呤而影響PCR的結果。(3)變性溫度是否準確:PCR儀指示溫度與實際溫度是否相符,過高酶在前幾個循環就迅速失活;過低則模板變性不好。(4)反應系統中污染了蛋白酶及核酸酶,應在未加Taq酶以前,將反應體系95℃加熱5-10分鐘。(5)引物變質失效。人工合成的引物是否正確。是否純化,或
ELISA 是如何工作的?2023/12/14
ELISA基于特異性抗原抗體反應,通常用到的是固相酶聯免疫吸附方法,這里以*使用的夾心法為例,其基本步驟為:將包被抗體固定在微孔板表面從板上洗去未被結合抗體加入質控抗原或含有目標物的樣本洗去其他雜蛋白,加入標記的檢抗添加酶特異性底物,產生有色產物,使用酶標儀進行比色測定即可辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶是ELISA中常用的酶,而底物包括四甲基聯苯胺(TMB)或2,2'-疊氮基-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)。通常選擇重復或三次采樣,并且使用不同濃度的樣品以確保生物學上可接受的
移液槍校準步驟詳解2023/12/13
需要用到的儀器:電子分析天平(檢測范圍200g,指示值為0mg);一個量杯(50L);一個量杯(100ml);多個小塊定性濾紙;超純水系統80mL。步驟:1、打開電子天平,電子天平調零;2、天平稱指示穩定后,按住歸零鍵歸零。將移液管噴嘴安裝在移液管上,對移液器進行清洗;3、將移液器的體積調整到檢查點。通常選擇具有最小、中等和較大容量值的檢查點。可以是特定的容量點;4、用移液管將檢測到容量的超純水系統轉移到天平的小量杯中;5、天平指示穩定后,立即加載并記錄電子分析天平指示的標準值。記錄的結束會使電
CCK8試劑盒操作指南2023/12/08
制作標準曲線1、計數,按比例依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做5-7個細胞濃度梯度,每組4-6個復孔。2、接種后培養2-4小時使細胞貼壁,然后每100μL培養基加10uLCCK-8(注意不要在孔中生成氣泡,會影響OD值)試劑培養一定時間后測定OD值,在細胞培養箱內繼續培育1-4小時。用酶標儀測定450nm處的吸光度。計算所需培養液可以先轉染再種板在10cm盤轉染,6h后消化,重懸細胞,技術,調細胞密度為20000個/ml,種在96孔板,每孔1000μL。種板時,槍頭吹吸細胞,重懸,
培養皿的使用方式和注意事項2023/11/27
1、注意事項:使用前經過清潔消毒,,培養皿清潔與否對工作影響較大,可影響培養基的酸堿度,若有某些化學藥品的存在,會抑制細菌生長。新購的培養皿應先用熱水沖洗,再置于質量分數為1%或2%的鹽酸溶液中浸泡數小時,使游離堿性物質除去,再用蒸餾水沖洗2次。若要培養細菌,再用高壓蒸氣(一般6.8*10的5次方Pa高壓蒸氣),120°C的溫度下30min滅菌,置室溫干燥,或用干熱滅菌,就是將培養皿置于烘箱內,度控制在120°C左右的情況下維持2h,殺死細菌的胞牙。經過消毒的培養皿才能接種培養使用。2、使用方法
免疫熒光實驗步驟2023/11/23
基本實驗步驟:(1)細胞準備。對單層生長細胞,在傳代培養時,將細胞接種到預先放置有處理過的蓋玻片的培養皿中,待細胞接近長成單層后取出蓋玻片,PBS洗兩次;對懸浮生長細胞,取對數生長細胞,用PBS離心洗滌(1000rpm,5min)2次,用細胞離心甩片機制備細胞片或直接制備細胞涂片。(2)固定。根據需要選擇適當的固定劑固定細胞。固定完畢后的細胞可置于含疊氮納的PBS中4℃保存3個月。PBS洗滌3×5min.(3)通透。使用交聯劑(如多聚甲醛)固定后的細胞,一般需要在加入抗體孵育前,對細胞進行通透處
ELISA中必要的三個試劑2023/11/21
完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);(2)酶標記的抗原或抗體(結合物);(3)酶的底物;(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標準品和控制血清(定量測定中);(5)酶聯物(結合物)及標本的稀釋液;(6)洗滌液;(7)酶反應終止液。免疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)干燥的條件下一般可保存6個月以上。有些不完整的試盒,僅供應包被用抗原或抗體,檢測人員需自行包被。以下簡述固相載體和包被過程。固相載體固相載體在ELISA測定
如何提取、制備胎牛血清?2023/11/16
胎牛血清(FetalBovineSerum,FBS)是在生物醫學研究和細胞培養中廣泛使用的重要生物制品,它含有豐富的生長因子、蛋白質和其他生物分子,對細胞生長和增殖起著至關重要的作用。制備胎牛血清是一個復雜的過程,通常由專業的生物制品公司進行,以確保其質量和純度。在本文中,我們將介紹一般的胎牛血清制備過程的主要步驟。步驟1:采集胎牛血液制備胎牛血清的第一步是采集胎牛的血液。這需要在專業場所進行,確保采集的胎牛來自健康且受監控的牧場。采集血液需要遵循倫理和動物福利的法規和標準。確保供體是5-8月齡
PCR管、EP管和八聯排管的區別2023/11/13
一、PCR管PCR管是生物實驗過程中常用的耗材,例如BBSP的PCR管,主要作用是為PCR(聚合酶鏈式反應)實驗提供容器,可以應用于突變、測序、甲基化、分子克隆、基因表達、基因分型、醫學、法醫學等領域。常見的PCR管由管體、蓋體組成,管體和蓋體連接在一起。最早的PCR儀沒有熱蓋,PCR過程中管底的液體會蒸發到頂部,設計成凸蓋(即圓形頂)便于蒸發的液體凝集后流下。但目前的PCR儀基本為熱蓋式,PCR蓋頂部溫度高,底部溫度低,底部的液體不容易蒸發到頂部,所以大多使用平蓋。二、EP管因為離心管是由Ep
普通干型透析袋,使用前如何預處理?2023/11/07
預處理:1、把透析袋剪成適當長度(10-20cm)的小段。2、在大體積(500mL)的2%(W/V)的碳酸氫鈉和1mmol/LEDTA(pH=8.0)中將透析袋煮沸10min。3、用蒸餾水清洗透析袋。4、放在500mL的1mmol/LEDTA(pH=8.0)中將之煮沸10min。5、冷卻后,用蒸餾水清洗透析袋。6、置于20%的酒精中,放于4℃冰箱,必須確保透析袋始終浸沒在溶液內。從此時起取用透析袋必須戴手套。7、在使用前要用蒸餾水將透析袋里外加以清洗干凈。使用須知1、某些化學物質會破壞透析袋微孔
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