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免疫組化實驗沒有任何著色的解決辦法2024/04/24

良好的免疫組化染色切片是正確判斷染色結果的基礎和前提。由于免疫組化染色過程中存在很多步驟或環節，每一個步驟或環節都可能影響到染色的最終結果，因此，要做好一張高質量的免疫組化切片并不是一件非常容易的事。從染色的結果看，一般可分為兩類：無色片（即無陽性信號）和“雜音”染色片（有陽性信號）。一、無色片染色結束后，切片中見不到任何陽性信號。這是常規工作中比較常見的現象，出現這種現象，有兩種可能：1、真陰性結果：整個染色過程沒有出現問題，組織或細胞確實不表達與抗體相關的抗原。2、假陰性結果：即此陰性結果不

單克隆抗體制備原理與詳細過程2024/04/23

單克隆抗體制備的原理：B淋巴細胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力、B細胞的這種能力和量是有限的,不可能持續分化增殖下去，因此產生免疫球蛋白的能力也是極其微小的、將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞，再進一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤的無限生長的能力，又具有產生特異性抗體的B淋巴細胞的能力，將這種克隆化的雜交瘤細胞進行培養或注入小鼠體內即可獲得大量的高效價、單一的特異性抗體.這種技術即稱為單克隆抗體技術。單克隆抗體制備的過程：免疫

抗A、抗B血型定型試劑（單克隆抗體）操作規程2024/04/22

【簡介】抗A,抗B血型定型試劑(單克隆抗體)用A血型單克隆抗體或B血型單克隆抗體配制而成，用于鑒定人ABO血型。單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。【用途】本試劑盒僅供鑒定人血型用，具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、重復性好等優點。【測定原理】利用單克隆抗A、抗B抗體和相應的紅細胞抗原發

簡述凝膠層析技術的原理和過程2024/04/19

凝膠層析（又叫凝膠過濾或分子篩）凝膠層析是指混和物隨流動相流經固定相的層析柱時，混合物中各組分按其分子大小不同而被分類的技術。1.原理凝膠層析的固定相是凝膠。凝膠是一種不帶電荷的具有三維空間多孔網狀結構的物質，凝膠的每個顆粒內部都具有很多細微的小孔，如同篩子一樣。常用凝膠有瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、葡聚糖凝膠等。葡聚糖凝膠介質是由多聚葡聚糖與環氧綠丙烷交連而成。zui常用的葡聚糖凝膠層析介質是SephadexG系列，不同型號的凝膠用G表示，G代表交聯度，從G10到G100。“G”后面的數字表示

血清和血漿制備方法說明2024/04/18

血清和血漿均是不含細胞（包括血小板）等有形成分的血液液體部分，其主要區別是血清不含凝血因子和血小板，血漿則含有凝血因子，它們的制備方法如下：1、血清的制備：獲得的血液不能抗凝，盛于離心管或可以離心的器皿中，靜置或置37℃環境中促其凝固，待血液凝固后，將其平衡后離心（一般為3000rpm，離心5～10min），得到的上清液即為血清，可小心將上清吸出（注意切勿吸出細胞成分），分裝備用。2、血漿制備：在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝劑（抗凝劑：血液=1：9，將血液加到一定量后顛倒混勻，離心（離心條件

BCA蛋白濃度測定方法和注意事項說明2024/04/17

BCA蛋白定量法是一種快速靈敏、穩定可靠的蛋白定量測定方法，其測定范圍是10－2000ug/ml，是比Lowry法更*的專用于檢測總蛋白質含量的產品。BCA蛋白定量測定方法：（96孔板）1、配制BCA工作液:根據標準品和樣品數量，按50體積試劑A，1體積試劑B配制適量BCA工作液，充分混勻。2、將蛋白標準品按0,1,2,4,6，8,10微升加到96孔板的蛋白標準品孔中，加滅菌雙蒸水補足到10微升；取10微升待測樣品加入96孔板。每個測定要做2-3個平行。3、向帶測樣品孔和蛋白標準品孔中加入200

細胞株生長過程容易被影響的原因2024/04/16

細胞株在體外進行培養，失去了機體的調節和控制，因此，除滿足營養的要求外，還必須使細胞生存環境晝接近活體的環境。外環境的培養條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響細胞的生長。一、溫度：一般哺乳類及禽類細胞體外培養的適宜溫度是37~38℃。溫度過高或過低都會影響到細胞的生長。細胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強，在低溫下，細胞的代謝活力及核分裂降低。溫度低于0℃時，雖影響細胞代謝，但并無傷害作用。把細胞置于23~25℃時，細胞仍能生存和生長，但速度減緩，不過，魚類細胞的適宜培養溫度為23~25℃。若溫度過

原代細胞VS細胞株那種更適合做實驗2024/04/15

細胞實驗主要包括細胞培養、細胞凋亡和增殖、細胞遷移和侵襲、細胞信號轉導和蛋白質表達等內容。這些實驗方法的應用可以幫助科學家們深入了解細胞的結構和功能，推動生命科學的發展。原代細胞：從體內直接分離的細胞。功能、代謝、形態類似體內細胞的特點，因此原代細胞適用于分析單個細胞形態、代謝、功能。原代細胞的缺點是：細胞均一性差，因為從特定組織取下來的原代細胞可能處于不同的發育時期。增殖能力差、培養時間受限、轉染效率低。細胞株：原代細胞經過長期培養和篩選后，功能、代謝、形態趨于均一化的無限增殖細胞。適用于整體

酸堿緩沖溶液的類型及選擇標準2024/04/12

酸堿緩沖溶液有三種類型：1、弱酸和它的鹽（如：HAc---NaAc）的水溶液組成；2、弱堿和它的鹽（如：NH3·H2O---NH4Cl）的水溶液組成；3、多元弱酸的酸式鹽及其對應的次級鹽（如：NaH2PO4---Na2HPO4）的水溶液組成。酸堿緩沖溶液的選型：一般應根據具體情況進行選擇。緩沖酸性可選用堿性緩沖液，緩沖酸性可采用堿性緩沖液。常用作緩沖溶液的酸類由弱酸及其共軛酸鹽組合成的溶液具有緩沖作用。生化實驗室常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、巴bi妥酸、Tris（三羥甲基氨基甲烷）

淺談細胞的基本結構及主要組成部分2024/04/11

一、細胞的基本結構：細胞的基本結構是細胞質、細胞核、細胞膜。細胞分為動物細胞、細菌和真菌和植物細胞。細胞是生物體基本的結構和功能單位。已知除病毒之外的所有生物均由細胞所組成，但病毒生命活動也必須在細胞中才能體現。動物細胞結構：動物細胞有細胞膜、細胞質、細胞核。動物細胞的細胞質包括細胞質基質和細胞器。動物細胞的細胞器包括內質網、線粒體、高爾基體、核糖體、溶酶體、中心體。動物細胞與植物細胞相比較，具有很多相似的地方，如動物細胞也具有細胞膜、細胞質、細胞核等結構。但是動物細胞與植物細胞又有一些重要的區

無血清培養基的優點以及使用方法2024/04/10

細胞培養（cellculture）就是從機體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后在適宜的培養基中，讓這些細胞生長和增殖。體外細胞培養最常見的是合成培養基如DMEM,F12,MEM等混合一定比例的牛血清進行培養；但是大量使用牛血清制品有許多缺陷，如，動物源成分，無法用于臨床研究；成分復雜，批間差大，質量不穩定，重復性差，影響實驗和生產，而且極易引起交叉污染；所以無血清培養正在替代有血清培養；無血清培養基的基本配方:基本成分為基礎培養基及添加組分兩大部分。用于生物制藥和疫苗生產的細胞在體外培養

菌種提純復壯的四種主要方法介紹2024/04/09

菌種提純復壯的幾個主要方法1、純種分離法通過純種分離，可將衰退菌種細胞群體中一部分仍保持原有典型性狀的單細胞分離出來，經擴大培養，就可恢復原菌株的典型性狀。常用的分離純化的方法可歸納成兩類：一類較粗放，只能達到“菌落純”的水平，即從種的水平來說是純的。例如采用稀釋平板法、涂布平板法、平板劃線法等方法獲得單菌落。另一類是較精細的單細胞或單孢子分離方法。它可以達到“細胞純”即“菌株純”的水平。后一類方法應用較廣，種類很多，既有簡單的利用培養皿或凹玻片等作分離室的方法，也有利用復雜的顯微操縱器的純種分

流式細胞術介紹及實驗常見問題2024/04/08

流式細胞術廣泛應用于細胞表面和細胞內分子表達特征的分析，界定不同種類的細胞群，測定分離出的亞類純度，分析細胞的大小和總量，它可以同時分析單個細胞的多個參數。它主要用于檢測標記在抗體上的熒光強度，這些熒光抗體則可以檢測與特定細胞分子結合的蛋白或配體，如與DNA結合的溴化丙啶(PI)等。染色步驟包括：將培養的細胞或組織樣品制成單細胞懸液，然后將細胞放入管子或酶標板中與熒光標記或未標記的抗體孵育。之后將細胞放入流式細胞儀中進行分析。懸浮緩沖液中染色的細胞樣品通過流式細胞儀時，由于鞘液的作用被限制在液流

細胞培養的體內、外細胞的差異和分化2024/04/07

細胞培養的體內、外細胞的差異和分化1、差異：細胞離體后，失去了神經體液的調節和細胞間的相互影響，生活在缺乏動態平衡相對穩定環境中，日久天長，易發生如下變化：分化現象減弱；形態功能趨于單一化或生存一定時間后衰退死亡；或發生轉化獲得不死性，變成可無限生長的連續細胞系或惡性細胞系。因此，培養中的細胞可視為一種在特定的條件下的細胞群體，它們既保持著與體內細胞相同的基本結構和功能，也有一些不同于體內細胞的性狀。實際上從細胞一旦被置于體外培養后，這種差異就開始發生了。2、分化：細胞分化（celldiffer

ELISA實驗細胞處理方法整理！2024/04/03

（酶聯免疫吸附劑測定）是一種快速、靈敏、準確可靠的一種定量分析方法，樣本的處理對于實驗的成功有著舉足輕重的作用。利用進行檢測的樣本類型包括常見的血液（血清、血漿），組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰道分泌物等，這些樣本收集的時間、處理方法和保存都會影響到實驗的結果。下面就常見細胞處理方法的整理，希望對您有所幫助。細胞樣本根據目的物所在部位可選擇細胞裂解液或細胞培養上清作為樣本。需要注意的是：因該類樣本干擾因素較

HE染色的實驗步驟及注意事項2024/04/02

一、實驗步驟：（1）樣品制備：對于貼壁生長細胞，胰酶消化，調整細胞濃度約1×105/ml，滴加于蓋玻片上(置于6孔板中)，培養相應時間后，取出細胞爬片，用PBS洗滌3次。（2）樣品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗滌2次，每次1min。（3）染核：蘇木素染液染色2-3min，自來水洗滌。（4）分色：鏡下觀察，若細胞核染色過深，用1%鹽酸酒精溶液分色數秒，自來水洗滌。（5）染胞質：浸入伊紅染液染色1min，自來水洗滌。（6）吹干或自然晾干細胞爬片后，中性樹膠封片。若細胞用4%多聚甲醛固定，則

細胞死亡的不同類型分析2024/04/01

細胞死亡是所有生物的基本過程，通過不同的機制發生。程序性細胞死亡的三種主要類型是凋亡、焦亡和壞死，每一種途徑都使用復雜的分子和細胞機制。盡管每種途徑都有特定的機制和結果，但它們具有共同的組成部分和特征。凋亡（即I型細胞死亡）是程序性細胞死亡（PCD）的嚴格調控形式，可觸發細胞自我毀滅而不受任何外部影響。它是生命的重要組成部分，特別是對于必須控制細胞的生長、發育和更新以維持體內平衡的多細胞生物而言。凋亡是胚胎正常發育的關鍵，典型例子如手指之間的細胞為了分開手指而凋亡。自噬（即II型細胞死亡）也經常

Western blot檢測的抗體怎么選擇合適的？2024/03/29

WB免疫印跡法，也稱免疫轉移技術IBT(Immunoblotting)，是Towbin將1975年Southern發明的Soutnernblotting技術應用于蛋白-蛋白相互作用建立的免疫學檢測方法。其操作簡便，主要用于未知蛋白檢測及抗原組分、抗原決定簇鑒定，同時也用于未知抗體的檢測和單抗鑒定等，在生物學基礎研究和臨床疾病早期診斷和預后跟蹤分析方面都有應用。WB實驗中使用到的有三種抗體：一抗、二抗和內參抗體。一抗是唯1針對目標抗原的抗體，可以進行制備也可以購買現貨，難度系數較高；二抗直接買就O

抗體和重組蛋白的使用攻略及保存原則2024/03/28

抗體和重組蛋白無論是保存還是運輸，請避免反復凍融。反復凍融，冰晶會破壞抗體和重組蛋白的空間結構，導致蛋白變性形成多聚體和重組蛋白構象改變，從而降低抗體的結合能力，也加快了抗體球蛋白和重組蛋白的降解速度。抗體和重組蛋白保存得當與否，直接決定了抗體和重組蛋白的活性使用效果，如果保存得當，抗體和重組蛋白活性大部分都可以維持數年。1.收到抗體和重組蛋白后的操作收到抗體和重組蛋白后（大部分抗體和重組蛋白是溶液態），請務必在4℃，12000rpm，離心3分鐘，再打開管蓋進行分裝、溶解和保存（如果抗體和重組蛋

PBS緩沖液(溶解保護試劑)配制標準與使用范圍2024/03/27

PBS緩沖液是一種廣泛應用于生物化學實驗中的緩沖溶液，它的全稱是PhosphateBufferSaline(PB)，中文通常稱為"磷酸鹽緩沖鹽溶液"或者"磷酸鹽緩沖生理鹽水"。這種溶液之所以能夠保持穩定的pH值，主要得益于其中的磷酸緩沖對（H2PO4-和HPO42-）。在PBS中，陰離子主要是碳酸氫根離子(HCO3-)，而陽離子則是鈉離子(Na+)或鉀離子(K+)。這些離子共同構成了一個穩定的酸堿平衡體系，使得PBS能夠在一定的范圍內保持穩定的pH值。因此，PBS不僅適用于作為培養基的成分之一，