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單細(xì)胞測序前期常見問題解答2021/09/07: 目前，單細(xì)胞測序這項(xiàng)技術(shù)被應(yīng)用的越來越多，領(lǐng)域包括了神經(jīng)科學(xué)、腫瘤免疫、胚胎發(fā)育等等，您是否也計(jì)劃著開展相關(guān)的研究呢？心中關(guān)于單細(xì)胞的疑惑就讓遠(yuǎn)慕生物帶您從常見問題出發(fā)，逐步撥開迷霧吧。1、為什么要做單細(xì)胞測序？細(xì)胞與細(xì)胞之間的異質(zhì)性，微環(huán)境里的細(xì)微差別，這些我們關(guān)注的信息都會(huì)被常規(guī)Bulk測序所掩蓋，而單細(xì)胞水平可以將細(xì)胞一一分開，找到差異。單細(xì)胞測序shou次將我們的研究拋開上帝視角，深入到細(xì)胞內(nèi)部，觀察每一個(gè)細(xì)胞的差別和相似，除了基因?qū)用妫覀円部梢栽诩?xì)胞層面和細(xì)胞類群層面進(jìn)行多維度的解析

蛋白樣品在跑膠前要如何處理2021/09/07: 一、蛋白樣品制備之前和大家介紹過細(xì)胞和組織蛋白質(zhì)的提取，當(dāng)我們做WB的時(shí)候，需要對(duì)提取好的蛋白樣品進(jìn)行處理：在蛋白樣品中加入SDSloadingbuffer6X（蛋白上樣緩沖液）稀釋至1X（如蛋白樣品有120ul，則加入SDSloadingbuffer6X600ul），混勻，75-95度加熱10-15分鐘，使蛋白變性以充分暴露抗原位點(diǎn)。在加熱結(jié)束后，進(jìn)行離心，使蛋白樣品適當(dāng)降溫，防止PAGE膠被融化。PS：要測量的蛋白如果是磷酸化形式，一般加熱到75度，一般情況可95度加熱。市面上買到的SDSl

影響重組蛋白純化的因素有哪些？2021/09/07: 隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，以蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能為基礎(chǔ)來認(rèn)識(shí)生命現(xiàn)象，已經(jīng)成為當(dāng)代生物醫(yī)藥研發(fā)的關(guān)注點(diǎn)之一。為了研究蛋白質(zhì)，首先需要進(jìn)行蛋白分離和重組蛋白純化，來得到高度純化并且具有生物活性的蛋白質(zhì)。由于每一種蛋白的性質(zhì)都有不同，所以沒有一種通用的蛋白純化方法，但是總的來說，一般影響重組蛋白純化的因素主要有以下幾種：1、蛋白的屬性在進(jìn)行重組蛋白純化時(shí)，需要盡可能多的了解蛋白的屬性。如蛋白的化學(xué)性質(zhì)，是否容易被蛋白酶降解，是否會(huì)和一些金屬離子、化學(xué)成分發(fā)生反應(yīng)。蛋白的物理性質(zhì)，是否對(duì)溫度敏感等。還有

單核細(xì)胞分離原理、方法及要點(diǎn)2021/09/07: 基本原理：本文分離單核細(xì)胞所用方法是Percoll非連續(xù)性密度梯度離心法，主要是根據(jù)不同細(xì)胞間密度的差別進(jìn)行細(xì)胞分離。此法易操作，且使用通常的實(shí)驗(yàn)設(shè)備即可完成。試劑與器材1）外周血單個(gè)核細(xì)胞2）1×PBS和10×PBS（無Ca2+、Mg2+，0.5mMEDTA），胎牛血清（56℃，30分鐘加熱滅活），HCl1mol/L。Percoll分層液（密度=1.130g/ml,商品），4g/L臺(tái)盼藍(lán)染液（溶解在PBS液中)。3）50ml聚丙烯圓錐管，毛細(xì)吸管，移液管（1、2、10ml）。4）CO2孵箱，超

關(guān)于動(dòng)物血清的一些常見問題解答2021/09/06: 血清是細(xì)胞培養(yǎng)中zui重要的元素之一。在實(shí)驗(yàn)室操作中要注意及處理方法：1.血清保存:建議血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過一個(gè)月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。2.解凍血清的方法:建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。3.血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成

化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞的規(guī)范操作方法2021/09/06: 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞是常規(guī)克隆和亞克隆實(shí)驗(yàn)應(yīng)用較為合適的解決方案。經(jīng)氯化鈣處理，促進(jìn)質(zhì)粒DNA黏附于感受態(tài)細(xì)胞膜上。將感受態(tài)細(xì)胞通過水浴熱激，使細(xì)胞膜孔打開，從而質(zhì)粒可以進(jìn)入。操作方法：（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）1、取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。以下實(shí)驗(yàn)以100μl感受態(tài)細(xì)胞為例。2、向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入

單細(xì)胞分離的特點(diǎn)應(yīng)用以及小技巧2021/09/06: 單細(xì)胞分離采用類似噴墨打印機(jī)以及一次性分配分離槽，溫和高效地接種單細(xì)胞，使用明場高分辨率成像或可選熒光分選細(xì)胞，每個(gè)單細(xì)胞分離捕獲5張圖像，單克隆性，提高工作效率，保持并增強(qiáng)細(xì)胞活率，且防止交叉污染。采集單細(xì)胞分離的證據(jù)，在接種細(xì)胞時(shí)記錄5張連續(xù)圖像，以96或384孔板的形式提供直接的單克隆性圖像證據(jù)，提高克隆形成率，與傳統(tǒng)方法相比，在克隆形成率上可實(shí)現(xiàn)高達(dá)8倍的提升。保持細(xì)胞健康和無菌，正如克隆生長實(shí)驗(yàn)所見，通過溫和的分離維持細(xì)胞活性，并使用無菌的一次性單向分離槽防止交叉污染，簡便、快速、可選

黑色素細(xì)胞那些事，你真的了解嗎？2021/09/06: 生活中我們會(huì)發(fā)現(xiàn)，不同物種和個(gè)體的膚色會(huì)表現(xiàn)出區(qū)域特異性。不同長度、厚度，不同身體部位的毛發(fā)色素沉積使我們有了不同的外觀，如：東方人大多是黃皮膚黑頭發(fā)，西方人很多是白皮膚金頭發(fā)。基于黑色素的色素沉積不僅賦予人體皮膚抵御紫外線（UV）輻射的能力，而且還促進(jìn)有害物質(zhì)（如重金屬）從體內(nèi)排出。黑色素細(xì)胞起源于神經(jīng)嵴，通過真皮遷移到表皮，最后遷移到毛囊。當(dāng)黑色素母細(xì)胞歸巢到毛囊凸起區(qū)域時(shí)，分化為黑色素細(xì)胞干細(xì)胞，黑色素細(xì)胞干細(xì)胞向下遷移并分化為毛發(fā)基質(zhì)中的成熟黑色素細(xì)胞。成熟的黑色素細(xì)胞進(jìn)一步分化生成黑色

使用無菌室這些事項(xiàng)必須注意！2021/09/03: 無菌室一般為面積4—5平方米、高2.5米左右的獨(dú)立小房間（與外間隔離），專辟于微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，可以用板材和玻璃建造。無菌室外要設(shè)一個(gè)緩沖間，錯(cuò)開門向，以免氣流帶進(jìn)雜菌。無菌室和緩沖間都必須密閉、室內(nèi)裝備的換氣設(shè)備必須有空氣過濾裝置。在獲得了無菌環(huán)境和無菌材料后，只有保持無菌狀態(tài)，才能對(duì)某種特定的已知微生物進(jìn)行研究。所以控菌能力和控菌穩(wěn)定性是無菌室的核心驗(yàn)收指標(biāo)。業(yè)內(nèi)通行的驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)為100級(jí)潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得超過1個(gè)菌落，10000級(jí)潔凈室平均不得超過3個(gè)菌落。無菌室使用注意事項(xiàng)都有哪些？1

什么是免疫球蛋白？免疫球蛋白測定的意義解答！2021/09/03: 免疫球蛋白是一組具有抗體活性的球蛋白，存在于血清、體液、外分泌液和一些細(xì)胞膜上，免疫球蛋白的英文寫作immunoglobulin，一般常縮寫為Ig，通常可以分為五類，即IgA、IgG、IgM、IgD、IgE。免疫球蛋白測定的目的在于了解機(jī)體的免疫功能，了解人體對(duì)各種病毒、細(xì)菌的抵抗力、機(jī)體對(duì)各種抗原入侵的識(shí)別能力。臨床上常用的是測定免疫球蛋白IgA、IgG、IgM三項(xiàng)。各項(xiàng)免疫球蛋白的參考值和臨床意義如下。IgA參考值：0.7～3.8g/L；IgG參考值：7.0～17.0g/L；IgM參考值：0

霉菌菌落的特點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)人了解一下！2021/09/03: 霉菌菌落的特點(diǎn)你知道嗎？為了更好的完成實(shí)驗(yàn)下面來一起了解下！A、形態(tài)較大，質(zhì)地疏松，外觀干燥，不透明，呈現(xiàn)或松或緊的形狀。B、菌落和培養(yǎng)基間的連接緊密，不易挑取，菌落正面與反面的顏色、構(gòu)造，以及邊緣與中心的顏色、構(gòu)造常不一致。C、霉菌的菌絲有營養(yǎng)菌絲和氣生菌絲的分化，而氣生菌絲沒有毛細(xì)管水，故它們的菌落必然與細(xì)菌或酵母菌的不同，較接近放線菌。霉菌的菌絲。構(gòu)成霉菌營養(yǎng)體的基本單位是菌絲。菌絲是一種管狀的細(xì)絲，把它放在顯微鏡下觀察，很像一根透明膠管，它的直徑一般為3~10微米，比細(xì)菌和放線菌的細(xì)胞約

血液保存液種類、主要成分及作用2021/09/03: 血液保存液常用種類：配方可分為：ACD（A，枸櫞酸；C，枸櫞酸三鈉；D，葡萄糖）與CPD（C，枸櫞酸三鈉；P，磷酸鹽；D，葡萄糖及枸櫞酸）兩大類保存液。在CPD中加腺嘌呤即為CPDA-1。2.血液保存液的主要成分及作用：①枸櫞酸鹽：是所有抗凝保存液中的基本抗凝物質(zhì)。最chang用的是枸櫞酸三鈉，除抗凝作用外，它還能阻止溶血的發(fā)生。②枸櫞酸：避免保存液中的葡萄糖在消毒中焦化。③葡萄糖：是紅細(xì)胞代謝所必需的營養(yǎng)成分，可延長紅細(xì)胞保存時(shí)間，且防止溶血；并減慢細(xì)胞中有機(jī)磷的消失，防止紅細(xì)胞儲(chǔ)存損傷。④腺

細(xì)數(shù)那些實(shí)驗(yàn)室常用的操作方法2021/09/02: 稱量稱量是指測量物體的輕重。將物體和砝碼在天平上進(jìn)行比較以求得物體的重量的過程,也叫稱衡。稱量是分析化學(xué)實(shí)驗(yàn)的重要操作。要取得準(zhǔn)確稱量結(jié)果，操作者必須遵守天平使用規(guī)則。化學(xué)藥品和試樣的稱量都要在專用的容器中進(jìn)行。稱量方法有兩種：①增量法，先將容器(如小皿、稱量紙等)的重量稱出，然后調(diào)整砝碼至所需重量，再將被稱物體加入容器中,調(diào)整天平使處于平衡狀態(tài),即稱得其重量；②減量法，被稱物體置于專用容器稱量瓶中，先稱出總重量，然后取出稱量瓶，按規(guī)定操作傾倒出適量被稱物后再作稱量，通過幾次傾倒，最后稱得一份符

血清的鑒別方法及主要作用2021/09/02: 鑒別方法：血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內(nèi)抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反應(yīng)被激活，血液迅速凝固，形成膠凍。凝xue塊收縮，其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清，也可于凝血后經(jīng)離心取得。在凝血過程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原，這一點(diǎn)是與血漿zui大的區(qū)別。而在凝血反應(yīng)中，血小板釋放出許多物質(zhì)，各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化，如凝血酶原變成凝血酶，并隨血清存放時(shí)間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血

血清試驗(yàn)中常遇的三大問題2021/09/02: 血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞的起到某些保護(hù)作用。1、如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而

超全培養(yǎng)基質(zhì)量控制與保存！2021/09/02: 一、物理性狀的質(zhì)量控制應(yīng)包括20℃-25℃時(shí)的pH,并應(yīng)觀察以下內(nèi)容：加入培養(yǎng)基的量和(或)瓊脂層的厚度、顏色、透明度、是否存在肉眼可見的雜質(zhì)、凝膠穩(wěn)定性/黏稠度(一致性)、濕度。滅菌前后都應(yīng)測定pH,采用連接可滲透陶器型液體接頭的電極測定液體培養(yǎng)基的pH，固體培養(yǎng)基可用平頭電極或者連接微型探頭的電極測定pH,測量時(shí)盡量使培養(yǎng)基溫度降到20℃-25℃，校正通常用接近40g/L的氫氧化鈉或者1mol/L的鹽酸。二、微生物的質(zhì)量控制1.污染檢測在每批制備好的培養(yǎng)基中應(yīng)當(dāng)選取部分樣品進(jìn)行污染測試。2.

液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基檢驗(yàn)原理2021/09/01: 中文名稱：液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基英文名稱：ThiolglycollateMedium產(chǎn)品規(guī)格：250g保質(zhì)期：三年產(chǎn)品用途：用于藥品、生物制品無菌檢測,檢測好氧菌和厭氧菌成分(g/L)：酪胨(胰酶水解)15.0酵母浸出粉5.0葡萄糖5.0硫乙醇酸鈉0.5L-胱氨酸0.5氯化鈉2.5刃天青0.001瓊脂0.75pH值7.1±0.225℃檢驗(yàn)原理：酪胨和酵母浸出粉提供碳氮源、維生素和生長因子；葡萄糖提供可發(fā)酵有糖類更利于生長；氯化鈉維持均衡的滲透壓；硫乙醇酸鈉和L—胱氨酸能有效降低氧化還原電位，防止過

微生物室常用的病原真菌檢查方法2021/09/01: 1、真菌鏡檢是最jian單也是很有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)室診斷方法。其優(yōu)點(diǎn)在于簡便、快速，無菌部位的陽性結(jié)果可直接確定真菌感染。但是由于陽性率較低，陰性結(jié)果亦不能排除診斷。直接鏡檢對(duì)于淺表和皮下真菌感染最有幫助。在皮膚刮屑、毛發(fā)或甲標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)皮膚癬菌、念珠菌和馬拉色菌的成分可提供對(duì)相應(yīng)真菌病的可靠診斷。如在無菌體液的直接鏡檢中發(fā)現(xiàn)真菌成分常可確立深部真菌病的診斷，例如在腦脊液中檢測到帶莢膜的新生隱球菌酵母細(xì)胞，或外周血涂片中檢測到莢膜組織胞漿菌細(xì)胞。但一般在有菌部位則只有發(fā)現(xiàn)大量真菌菌絲方才有意義，通過直接

滅菌和消毒的正確打開方式2021/09/01: 消毒和滅菌兩個(gè)詞在實(shí)際使用中常被混用，其實(shí)它們的含義是有所不同的。消毒是指應(yīng)用消毒劑等方法殺滅物體表面和內(nèi)部的病原菌營養(yǎng)體的方法，而滅菌是指用物理和化學(xué)方法殺死物體表面和內(nèi)部的所有微生物，使之呈無菌狀態(tài)。一、物理方法1、溫度利用溫度進(jìn)行滅菌、消毒或防腐，是常用而又方便有效的方法。高溫可使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和酶類發(fā)生變性而失活，從而起滅菌作用，低溫通常起抑菌作用。１）干熱滅菌法:a.灼燒滅菌法：利用火焰直接把微生物燒死。此法徹-底可-靠，滅菌迅速，但易焚毀物品，所以使用范圍有限，只適合于接種針、

實(shí)驗(yàn)室管理以及儀器使用管理制度2021/09/01: 實(shí)驗(yàn)室儀器使用管理制度：1.實(shí)驗(yàn)室儀器安放合理，貴重儀器由專人保管，建立儀器檔案，并備有操作方法、保養(yǎng)、維修、說明書及使用登記本。2.各儀器做到經(jīng)常維護(hù)、保養(yǎng)和檢查，精密儀器不得隨意移動(dòng)，若有損壞不得私自拆動(dòng)，應(yīng)及時(shí)報(bào)告通知相關(guān)人員，經(jīng)總經(jīng)理同意后送儀器維修部門。3.實(shí)驗(yàn)室所使用的儀器、容器應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)要求，保證準(zhǔn)確可靠，凡計(jì)量器具須經(jīng)計(jì)量部門檢定合格方能使用。4.易被潮濕空氣、酸液或堿液等侵蝕而生銹的儀器，用后應(yīng)及時(shí)擦洗干凈，放通風(fēng)干燥處保存。5.易老化變粘的橡膠制品應(yīng)防止受熱、光照或與有機(jī)溶劑

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