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多重熒光免疫組化Q&A——第三彈2023/05/31

Q：我該如何得到wan美的多色結(jié)果呢？A：首先，您需要有質(zhì)量不錯的樣本和抗體，這就已經(jīng)是成功的一半（樣本、抗體選擇攻略），對于樣本來說，脫片是我們需要預防的“頭號公敵”，多色實驗需要重復熱修復洗脫抗體多次，假如片子脫片，輕則成像模糊，重則組織脫落前功盡棄，可以在開始實驗之前先模擬幾輪熱修復，不加抗體和其他試劑，看看組織是否有脫落的跡象，如果脫落比較嚴重，則需要重新制備切片，如果有輕微脫片，則可以考慮購買抗體洗脫液（abs994），替代熱修復的過程；然后，就可以開始做實驗了，我們建議您*行抗體和染

干細胞和神經(jīng)細胞轉(zhuǎn)染利器--jetOPTIMUS之干細胞應用篇2023/05/24

干細胞被認為是可用于建模和修復細胞功能的強大和最靈活的細胞類型。目前干細胞被廣泛用于藥物篩選、細胞治療、疾病建模、毒理學和基因組編輯研究，可以說幾乎用于任何基礎(chǔ)和轉(zhuǎn)化研究領(lǐng)域。重要的是，其中許多技術(shù)依賴于將基因和/或蛋白質(zhì)成功引入干細胞，例如CRISPR/Cas9基因編輯。然而，干細胞，特別是多能干細胞（即能夠產(chǎn)生任何體細胞類型的細胞）特別難以轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染干細胞時最大的挑戰(zhàn)是細胞死亡，這在非病毒和病毒轉(zhuǎn)染遞送方法之后都有報道。此外，由于對細胞死亡的易感性和快速自我更新，干細胞的轉(zhuǎn)染效率可能低于其他

青少年EVs miRNA的改變與重度抑郁癥、注意力缺陷/多動癥和焦慮癥的關(guān)系2023/05/22

精神健康障礙是全球傷殘調(diào)整生命年（DALYs）的10個主要原因之一，抑郁癥和焦慮癥成為全球10-24歲人群中主要疾病負擔。這些疾病的風險與外周標記物的相關(guān)性強，因此，許多體液中的細胞外囊泡（ev）被越來越多地認為是精神病學分子研究的重要目標，它們足夠小，可以跨越血腦屏障[1]。例如，最近的一項研究表明，ev中較高水平的miRNAmiR-139-5p與MDD（重度抑郁癥）相關(guān)，在小鼠MDD患者中注射含有這種miRNA的ev導致小鼠中隨后的抑郁樣行為[2]。在另一項研究中，MDD患者血漿ev中的mi

雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒——讓您的實驗更Easier！2023/05/18

報告基因是一類使表達產(chǎn)物易于被檢測的基因,其作用原理是將報告基因的編碼序列及其表達調(diào)控序列與目的基因融合形成嵌合基因,在調(diào)控序列的作用下進行表達,通過對報告基因表達產(chǎn)物的檢測來評價目的基因的表達狀況。常見的報告基因包括螢光素酶(Luciferase)、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)、β-半乳糖苷酶(β-gal)、分泌性人胎盤堿性磷酸酶(SEAP)和綠色熒光蛋白(GFP)等。螢光素酶（Luciferase）是一類在生物體內(nèi)能夠催化熒光素或脂肪醛氧化發(fā)光的酶,從自然界能夠發(fā)光的生物體內(nèi)分離獲得。由于特異

多重熒光免疫組化Q&A——第一彈2023/05/17

Q：我想要進行多色實驗，對于我的樣本有什么要求嗎？A：您按照免疫組化的標準對您的樣本進行前處理即可。如果是從歷史切片或者蠟塊中挑選用來做多色，請盡量選取相對較新的樣本（一個月內(nèi)），最長不要選保存超過半年的樣本，可能會有靶點缺失或者強非特異性，導致染色效果欠佳。附上石蠟切片樣本處理推薦：取新鮮組織（理想的取材厚度是0.2cm~0.3cm），如取的組織過大，需要切小后再做固定，以免組織太厚固定液滲透不良，導致后續(xù)染色效果不佳組織離體后（不要超過30分鐘）迅速轉(zhuǎn)移到固定液中（一般選用10%中性福爾馬林

螢火蟲的妙用2023/05/17

夏夜，一切都顯得朦朧、幽暗，似乎連空氣都變得清馥馥的。在豆棚架邊、在林下水邊、在籬前的草叢里，流螢飛起來了，三三兩兩，忽前忽后，時高時低，那么輕悄、飄忽，好像一些看不見的小精靈提著綠幽幽的燈籠，飛來飛去，那美妙的形象和色彩，著實迷人-------這些描寫螢火蟲的景象是否勾起了大家對于童年夏夜的美好回憶？螢火蟲發(fā)光的過程，簡單來說，是螢光素（luciferin）在螢火蟲螢光素酶的催化下發(fā)生的一系列復雜化學反應，而光即是這個過程中所釋放的能量。這一反應非常節(jié)省能量，幾乎所有輸入反應的能量都被轉(zhuǎn)化為光

動物造模專題——脂多糖炎癥模型2023/05/11

一、脂多糖簡介脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）是革蘭氏陰性細菌細胞壁中的一種te有成分，又稱內(nèi)毒素，感染宿主后可導致膿毒癥、膿毒性休克和多器官功能障礙綜合癥。LPS借助信號轉(zhuǎn)導通路誘發(fā)宿主的應答，刺激免疫細胞產(chǎn)生大量具有致熱效應的炎性細胞因子，引起免疫系統(tǒng)的過度活化。二、脂多糖信號通路LPS通過結(jié)合宿主細胞表面受體，激活炎性細胞因子基因表達并引起炎癥反應，啟動細菌感染的致病過程。圖1是LPS信號通路的示意圖[1]。進入血流后，脂多糖首先被血清中的LPS結(jié)合蛋白(LPS2b

Organotial奶牛乳腺類器官培養(yǎng)基試劑盒——新發(fā)上線2023/05/11

奶牛的乳腺分支形態(tài)發(fā)育是完成泌乳功能的基本條件。乳腺分支結(jié)構(gòu)可以通過提高乳腺腺泡組織的數(shù)量和分泌功能來提高奶牛乳產(chǎn)量。3D培養(yǎng)可以在體外誘導組織器官分支形態(tài)的發(fā)生,已經(jīng)是研究乳腺分支形態(tài)普遍使用的方法。類器官（Organoids）是器官特異性細胞類型的3D細胞集合，這些細胞從干細胞或器官祖細胞發(fā)育而來，并能以與體內(nèi)相似的方式經(jīng)細胞分序(cellsortingout)和空間限制性的系別分化而實現(xiàn)自我組建。奶牛乳腺類器官明場圖展示產(chǎn)品信息:?培養(yǎng)簡單?擴增效率高?維持穩(wěn)定傳代?培養(yǎng)成功率80%以上貨

分子克隆技術(shù)——質(zhì)粒介紹篇2023/05/11

上期我們給大家介紹了分子克隆的概念、原理以及通用實驗流程，大家應該對分子克隆技術(shù)應該有了一定的了解吧?本期小愛將為大家?guī)矸肿涌寺〉妮d體——質(zhì)粒的介紹。走！瞅瞅去!分子克隆技術(shù)運用的載體只要是指將DNA片段（目的基因）轉(zhuǎn)移至受體細胞的一種能自我復制的DNA分子工具。常見的載體主要有質(zhì)粒、噬菌體、病毒等。今天咱們要聊的主角是質(zhì)粒。什么是質(zhì)粒？天然質(zhì)粒是可獨立于染色體外可自行復制的環(huán)狀DNA分子，通常帶有一些基因，特別是一些與抗生素耐藥性有關(guān)的基因，可以在不同的細菌細胞之間傳遞。質(zhì)粒主要存在于細胞、

干貨分享 | 給您一雙鑒別支原體污染的慧眼2023/05/06

很多小伙伴都疑惑，細胞被支原體污染后的特征是什么？如何鑒別細胞被支原體污染了？今天，小愛帶大家分享兩個支原體污染的案例，共同探尋一下細胞被支原體污染后的特征。圖1感染支原體的EBTr（牛胚氣管細胞）01牛胚氣管細胞先來觀察一下被支原體污染的牛胚氣管細胞（圖1），由成纖維樣逐漸變得類上皮樣；質(zhì)膜鋪展，潰爛；輪廓不清，邊界模糊。再看右圖，細胞處于邊增殖邊凋亡的狀態(tài)，漂浮凋亡細胞過多。圖2感染支原體的HT1080（人纖維肉瘤細胞）02人纖維肉瘤細胞再觀察一下被支原體污染的人纖維肉瘤細胞HT1080（圖

多色文獻解讀：肝膽多同病——膽汁淤積型肝炎2023/05/06

古語有云“肝膽相照，榮辱與共”，而在生物體中，肝和膽也是一對“榮辱與共”的器官，兩器官位置相鄰，任何一者出現(xiàn)問題，另一者往往不能幸免。在消化系統(tǒng)中，肝主疏泄，分泌膽汁；而膽附于肝，作用則為貯藏、排泄膽汁，當膽汁的分泌和排泄出現(xiàn)障礙時，就會導致膽汁淤積癥，對肝細胞及機體造成損傷，疾病進展后期則可能導致肝纖維化、肝硬變和最終的肝功能衰竭。2021年9月軍醫(yī)大學西南醫(yī)院柴進教授組在EMBOMolecularMedicine(IF:12.137)期刊上在線發(fā)表了題為“AhomozygousR148Wmu

產(chǎn)品專題——百日咳毒素及其應用2023/04/24

百日咳毒素（PertussisToxin，PTX）是鮑特氏菌屬百日咳桿菌所產(chǎn)生的一種主要毒力因子，具有多種生物學活性，能引起百日咳眾多的臨床癥狀，同時也是主要的免疫原。與大多數(shù)哺乳動物培養(yǎng)細胞結(jié)合并特定靶向G蛋白，抑制G蛋白及其在信號通路中的生理功能。正是依賴Gi家族的蛋白偶聯(lián)受體來抑制信號通路的能力，使得PTX成為細胞生物學研究中的一種重要工具。圖1用Gαi抑制劑PTX（50ng/ml）和Gαq抑制劑FR900359（1μM）預處理對HEK293T細胞中QRFP26（1μM）受體介導的Ca2+

細胞染色專題——熒光染料選擇指南2023/04/24

細胞培養(yǎng)后，需要對其生長情況、形態(tài)甚至生物學性狀進行觀察。由于細胞小而復雜，若不借助適當?shù)氖侄危y以觀察其形態(tài)、結(jié)構(gòu)，更難發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)各種組分的分子組成及功能。目前，已有多種研究細胞的技術(shù)，從光學顯微鏡到電子顯微鏡，從一般細胞化學法到免疫化學法。細胞染色是研究細胞生物學特征的一種常用手段，然而，對于細胞實驗新手來說，想要獲得一張漂亮的細胞染色圖并不容易。染色試劑不會選、細胞染色不均勻、染色時切片脫落等都是很常見的問題。今天小愛就為大家整理了幾種常用細胞染色方法及染色劑選擇指南，快來學習！表1幾種常

mRNA質(zhì)量檢測之poly A尾檢測方法2023/04/24

首先我們需要先回顧下3’端polyA尾的功能：保護帽結(jié)構(gòu)不被降解，與polyA結(jié)合蛋白、5’Cap（帽結(jié)構(gòu)）和翻譯起始因子蛋白協(xié)同作用，啟動蛋白質(zhì)的翻譯。多數(shù)mRNA的polyA長度為50–200nt，以維持正常的生物學功能。polyA尾的有無與長度是mRNA藥物的關(guān)鍵質(zhì)量屬性之一。當前polyA尾的檢測分為兩種思路：①與加帽率的分析策略類似，酶切后純化回收3’端polyA尾，隨后通過毛細管電泳（CE）、變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）、高效液相色譜（HPLC）或液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）

“痛到窒息”的子宮內(nèi)膜異位癥2023/04/23

廣大女生朋友對于痛經(jīng)一詞應該十分熟悉甚至感同身受，痛經(jīng)形成的因素有很多，一般就是受涼或者吃了刺激食物所致，熬過頭幾天就好了，但假如非常疼痛甚至到了“呼吸都痛”的地步，就要警惕有可能是子宮內(nèi)膜異位癥！子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis，EM）簡單點來說就是原本應該待在子宮里的內(nèi)膜跑到了別的地方去。最常見的比如子宮內(nèi)膜長到卵巢上，就會變成卵巢巧克力囊腫，或者長到子宮肌層，就會形成子宮腺肌癥。研究表明，EM患者的免疫細胞數(shù)量和功能會發(fā)生改變，特別是巨噬細胞、中性粒細胞、自然殺傷細胞、T細胞和細

使用脂質(zhì)封裝的編碼長效IL-2突變蛋白的mRNA可選擇性激活和擴增調(diào)節(jié)性T細胞2023/04/23

2022年7月5日，Moderna公司的EricHuang等人在NatureCommunications期刊發(fā)表了題為：SelectiveactivationａndexpansionofregulatoryTcellsusinglipidencapsulatedmRNAencodingalong-actingIL-2mutein（使用脂質(zhì)封裝的編碼長效IL-2突變蛋白的mRNA可選擇性激活和擴增調(diào)節(jié)性T細胞）的研究論文。調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）在各種人類自身免疫疾病（如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕性關(guān)

His標簽蛋白純化面面觀——His標簽蛋白純化流程2023/04/20

到His標簽，大家一定都不陌生。His標簽是一個只有6個組氨酸的小標簽，但神通廣大。首先，His標簽比較小，對蛋白結(jié)構(gòu)和功能影響較小，一般純化后也可以無需切除；其次，His標簽可以和其他標簽一起使用，增加純化的純度；此外，His標簽也可以在變性條件下進行蛋白純化，適用于特殊的操作或者包涵體純化；最后，His標簽蛋白的純化方式多樣，純化工藝也非常成熟，可以選擇重力操作和離心操作，也可以選擇AKTA純化系統(tǒng)。His標簽如此好用，各位是不是也躍躍欲試了呢？今天小優(yōu)給大家整理了我們使用頻率很高的重力純化

星型膠質(zhì)細胞在癲癇中的角色：敵人？還是朋友？2023/04/20

癲癇在全球影響著大約5000萬人，盡管它相對普遍，但目前為止還沒有確定某一種特定的細胞類型或通路是產(chǎn)生該疾病的主要原因。星形膠質(zhì)細胞一直是大量癲癇研究中的主要研究對象。然而，關(guān)于星形膠質(zhì)細胞對癲癇是產(chǎn)生正向或反向的作用的仍然沒有明確的答案。最近的研究則表明星形膠質(zhì)細胞與中腦星形膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(MesencephalicAstrocyte-derivedNeurotrophicFactor，MANF)可能具有預防作用。關(guān)于癲癇我們知道些什么？癲癇會影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)，導致大腦發(fā)生

HCPure多模式配體層析——高效去除抗體藥物生產(chǎn)中HCPs 和其他雜質(zhì)2023/04/19

自1986年第一個單克隆抗體（mAb）藥物上市以來，全球已有超過100種單抗藥物獲得了FDA批準。經(jīng)過30多年的研究和發(fā)展，單抗藥物以其高度特異性和療效確切的特點，已被用于多種疾病，包括腫瘤、風濕病、血液和感染性疾病等。隨著全球人口老齡化日益加重、慢性病越來越普遍，單抗藥物及過程開發(fā)變得越來越必要。單克隆抗體（mAb）由中國倉鼠卵巢細胞（CHO），E.coli和HEK等多種不同類型的細胞表達。然而，除了所需的單抗外，這些宿主細胞還會產(chǎn)生其他蛋白質(zhì)，稱為宿主細胞蛋白質(zhì)(HCP)，這些蛋白質(zhì)可能會引

關(guān)于紅細胞裂解液，三分鐘您就懂2023/03/16

紅細胞膜是由磷脂、膽固醇、蛋白質(zhì)等組成的雙層膜結(jié)構(gòu)。在紅細胞裂解液中，主要包含了陰離子表面活性劑(如十二烷基磺酸鈉)和滲透壓調(diào)節(jié)物(如葡萄糖)，這些物質(zhì)可以分解紅細胞膜，使紅細胞釋放出血紅蛋白。作用機制主要有以下幾種：滲透裂解，通過改變細胞內(nèi)外環(huán)境的滲透壓差，使細胞溶解；離子置換，與細胞內(nèi)離子互相置換，從而使細胞發(fā)生溶解；肌動蛋白降解，針對肌動蛋白進行降解，從而實現(xiàn)紅細胞的裂解。紅細胞裂解液的應用：(1)蛋白質(zhì)提取可用于體積小，難以直接提取的組織和細胞類型中的蛋白質(zhì)提取。同時水解的SDS還能夠增