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His-tag蛋白純化六邊形戰士---諾獎得主愛用好物2022/11/04

2022年諾貝爾化學獎授予CarolynR.Bertozzi,MortenMeldal和K.BarrySharpless，"以表彰點擊化學和生物正交化學的發展"。今天我們一起來認領下諾獎得主的愛用周邊~his標簽蛋白純化系列top榜。CarolynR.Bertozzi最早在1998年發表在《Chemistry&Biology》上的“IdentificationofanN-acetylglucosamine-6-0-sulfotransferaseactivityspecifictolymphoi

PI細胞周期可能有四種命運2022/10/22

PI細胞周期指細胞一個世代所經歷的時間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個周期。細胞周期反應了細胞增殖速度。細胞周期是一個重要的檢測參數，研究細胞周期變化的影響對于腫瘤的發展及藥物研發有著重要的作用。例如，已知抑制有絲分裂的化合物大都用來減緩腫瘤細胞的生長。PI細胞周期檢測步驟：1.細胞樣品的準備：收集細胞，用1ml預冷PBS洗1遍，輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。2.細胞固定：加入1ml預冷的70%乙醇中，輕輕吹打混勻，4度固定2小時或更長時間(固定12-24小時可能效果更

疼痛研究有困難？離子通道來救你！2022/10/21

疼痛是由背根神經節(DRG)神經元感知并傳遞到中樞神經系統的，DRG在功能上可分為三個亞細胞區室。1.痛覺外周末梢感知到疼痛從而引起的刺激（機械感覺、熱感覺和痛覺）。2.傳導痛覺信號的軸突。3.突觸前末端，它將信號轉發到下一個神經元并向上傳遞到大腦，在那里信號被解釋為疼痛(如下圖所示)。圖1.疼痛信號的傳播途徑疼痛的類型主要有兩種：神經性（神經）疼痛和痛覺性（組織）疼痛。神經性疼痛是由神經系統的原發病變或功能障礙引起的。根據病變或功能障礙發生的部位，可細分為外周神經痛和中樞神經痛。外周神經痛可能

磷酸化抑制劑的使用可以對磷酸化狀態進行有效保護2022/10/19

磷酸化抑制劑指直接作用ATP酶抑制磷酸化作用的試劑，如二環己基碳二亞胺(DCCD)、對氯汞基苯(PCMB)作用于CF1，寡霉素作用于CF0(CF0下標的o就是表明其對寡霉素oligomycin敏感)。它們都抑制了ATP酶活性從而阻斷光合磷酸化。磷酸化抑制劑詳細介紹：(1)電子傳遞鏈傳遞過程是：P680→pheo→Q→PQ→Fe-S-Cytb6→Cytf→PC→P700。其中P700和P680分別為光系統Ⅰ和光系統Ⅱ的作用中心色素，pheo為去鎂葉綠素(2)電子傳遞抑制劑指抑制光合電子傳遞的試劑，

微孔板夾心雜交法工作原理？2022/10/14

ELISA，即酶聯免疫吸附實驗，其基本原理是將一定濃度的抗原或者抗體通過物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入待檢標本，通過酶標物顯色的深淺間接反映被檢抗原或者抗體的存在與否或者量的多少。ELISA技術作為免疫標記技術（包含免疫熒光技術，免疫放射技術，免疫酶技術和免疫膠體金技術）中的一種，已廣泛應用于科研和臨床實驗中，具有快速，定性或者定量甚至定位的特點。在ELISA實驗方法中，比較常見的方法有雙抗體夾心法，競爭法，間接法，雙抗原夾心法，捕獲法，下面對此一一詳述。1.雙抗體夾心法雙抗體夾心

蛋白質印跡法實驗指南：凝膠電泳分離蛋白2022/09/27

Westernbotting實驗中，樣品一旦準備好，樣品蛋白質通過PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）分離，這可以在天然或變性條件下進行。蛋白質印跡指南的這一部分詳細介紹了您在分離蛋白質時可能需要考慮的事項。本文主要涉及以下幾個方面：·聚丙烯酰胺凝膠·緩沖液pH值·用分子量標記確定蛋白質大小·陰性組織對照·上樣對照SDS-PAGE通常用于WB實驗，其中蛋白質被變性及還原以獲得它們的初級結構。用SDS分子（Sodiumdodecylsulfate）包被會產生與其分子量成正比的相對負電荷，從而允許僅按大小

密度梯度離心法分離淋巴細胞的原理2022/09/21

密度梯度離心法分離淋巴細胞的原理是：常用來分離人外周血單個核細胞（PBMC）的分層液比重是1.077±0.001的聚蔗糖（Ficoll)-泛影葡胺（Urografin)(F／H)分層液。Ficoll是蔗糖的多聚體，呈中性，_W水性高，平均分子量為400,000，當密度為1.2g／ml仍未超出正常生理性滲透壓，也不穿過生物膜。紅細胞、粒細胞比重大，離心后沉于管底；淋巴細胞和單核細胞的比重小于或等于分層液比重，離心后漂浮于分層液的液面上，也可有少部分細胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細胞，就可從外

absin恒溫搖床的正確使用方法2022/09/20

absin恒溫搖床屬于實驗室常規的實驗設備和輔助設備，與光譜儀、質譜儀、粘度計、旋光儀、發酵裝置、旋轉蒸發儀等聯用；主要是通過循環泵功能，將冷卻水導入分析設備中。在加水時注意離上蓋板不低于8cm，用軟水，電光分析天平用蒸餾水，切勿使用井水、河水、泉水等硬水，以防加熱管爆裂及影響恒溫靈敏度。absin恒溫搖床的正確使用方法：1、開啟電源，約一分鐘自檢結束。若顯示“000”則說明傳感器開路或輸入信號超過測量范圍。2、按SET鍵可設定溫度，按SET鍵至斂碼管下排數據閃動，表示儀表進入溫度設定狀態，按△

臨床病毒載體生產專用轉染試劑--加速治療商業化2022/09/20

新冠疫情爆發以來，細胞與基因治療行業蓬勃發展，而細胞與基因治療CDMO行業的底層工藝路線主要包括質粒、病毒載體和細胞工廠三個方面。其中，病毒載體的生產是細胞和基因治療產品生產過程中一個重要的環節，穩健的瞬時轉染是保證高產量和可靠的病毒載體大規模商業化生產的關鍵。目前，用于細胞、基因治療的病毒載體主要是慢病毒，AAV。Polyplus-transfection®提供GMP級轉染試劑，可用于臨床病毒載體的生產。接下來，小編給您介紹一下，用于細胞和基因治療領域的轉染試劑-PEIpro·用于AAV和LV

銅死亡——細胞死亡研究新方向2022/09/16

2012年鐵死亡被發現后，它的相關研究經歷了指數級的增長，也是近幾年熱門中的“熱門”。小優曾用3篇文章詳細的剖析過它，從研究歷程到正式命名，再到通路研究，都有詳細解讀，不清楚的同學可以戳鏈接再了解。在今年的3月17日，美國Broad研究所ToddR.Golub研究組與PeterTsvetkov合作在Science上發表了題為“CopperinducescelldeathbytargetinglipoylatedTCAcycleproteins”的研究文章。文章一經發布，“銅死亡”一詞迅速霸屏。可

人elisa試劑盒顯色溫育反應的重要性！2022/09/13

人elisa試劑盒的顯色是ELISA中的一步溫育反應，此時酶催化無色的底物生成有色的產物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中，加入底物后的反應溫度和時間應按規定力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行，時間一般不需要嚴格控制，有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應時間，及時判斷。OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30分鐘后即不再加深，再延長反應時間，可使本底

帕金森綜合征與溶酶體離子通道關系大揭秘，即刻了解！2022/09/08

作為細胞中的“回收站”，溶酶體在維持細胞穩態上發揮著至關重要的作用，小優曾經為大家介紹過溶酶體降解（自噬）與神經退行性疾病的關系，感興趣的小伙伴們請戳這兒了解。本文想帶大家將焦點從溶酶體降解轉移到溶酶體膜上，在溶酶體膜上也存在多種不同類型的蛋白質，包括離子通道、轉運體、結構蛋白、酶等,其中離子通道蛋白由于他們在溶酶體離子動態平衡和跨膜轉運、溶酶體膜電位和pH以及細胞營養代謝水平的調控中的重要作用,受到越來越多的關注。圖1.溶酶體膜上的部分相關蛋白質早在2013年，賓夕法尼亞大學DejianRen

多標實驗的實驗技巧2022/09/02

多重免疫分析具有許多優點，如可以從每個樣本中獲取更多的生物信息，更高的通量以及（在許多情況下）降低成本。多標實驗還通過在相同的實驗條件下同時測量所有分析物來消除其他變量的影響，例如測定溫度，緩沖液系統和操作員。開發多重免疫測定的主要挑戰是不同分析物的濃度和表達模式可能會有很大差異。這可以通過仔細的實驗設計來解決。1.了解樣本信息為了使多重免疫測定生成可靠的數據，必須對其進行配置以確保準確檢測所討論的每種分析物。分析物的豐度和表達位置可能不同；雖然有些分析物是細胞內的，但其他分析物在細胞表面表達或

His標簽抗體在WB和ELISA中的應用2022/09/02

His標簽是一種流行的重組蛋白的添加物，以促進蛋白質的純化和檢測。His標簽的使用通常優先于其他標簽，因為可使用相對便宜的樹脂進行純化，如NiNTA。Anti-HisTag抗體能夠檢測標記的蛋白，從而篩選表達。多聚his標簽通常由6個組氨酸殘基組成，但也可能在3-10個組氨酸殘基之間，通常位于重組蛋白的C端或n端。在這里，我們給大家介紹JacksonImmunoResearch公司的Anti-HisTag抗體對his標記蛋白的WB和ELISA中的應用。使用WB在細胞裂解液中篩選his標記的蛋白從

蛋白質印跡法實驗指南：第1部分，實驗原理和樣品準備2022/09/02

蛋白質印跡法（WesternBlotting）的6個基礎步驟：1.樣品制備2.通過凝膠電泳分離蛋白質3.蛋白質轉移（電印跡）到膜上4.膜封閉5.免疫檢測6.靶蛋白顯印WB法可用于檢測天然和合成來源的蛋白質。來自表達系統的重組蛋白和來自生物樣品的內源蛋白都可以用蛋白質印跡法檢測。對于要通過WB分析的蛋白質，首先必須要處理含有目標蛋白的樣品，以使目標蛋白質可用于分析。例如，在篩選表達時，通過裂解細胞來釋放蛋白質，使其進入分離基質。蛋白質提取之后可以進行變性和還原，目的是將蛋白質分解成一級結構，因此蛋

膠質瘤腫瘤微環境相關抗體推薦2022/09/01

腫瘤細胞與周圍腫瘤微環境（TumorMicroenvironment，TME）之間的動態相互作用在膠質瘤的持續生長、增殖和侵襲、存活、逃避細胞死亡、代謝、遷移和轉移等過程中發揮著至關重要的作用。膠質瘤TME具有高度異質性，由多種癌細胞和非癌細胞組成，包括內皮細胞(EC)、免疫細胞、膠質瘤干細胞(GSC)和星形膠質細胞，以及非細胞成分，例如作為細胞外基質(ECM)。已經記錄了神經膠質瘤腫瘤細胞和TME之間的幾種細胞間通訊方式。在膠質瘤TME中，細胞通過內皮細胞、生長因子、細胞因子、趨化因子、單核細

膠質瘤的分類及其關鍵研究靶點2022/08/31

膠質瘤是中樞神經系統（CNS）的實體瘤。它們來自膠質細胞的腫瘤性轉化，即星形膠質細胞、少突膠質細胞和室管膜細胞。腦腫瘤約占所有成人癌癥的2%，但在兒童腫瘤組中占較大比例。膠質瘤約占所有惡性腦腫瘤的80%，根據細胞起源、分化和惡性程度分類。膠質瘤在發病年齡、嚴重程度、組織學特征、進展和轉移能力方面表現出相當大的差異。膠質瘤診斷后的生存時間因級別而異。根據世界衛生組織（WHO）的分類，膠質瘤分為四個等級。1、2和3級被歸類為低級別膠質瘤，而4級被歸類為高級別膠質瘤。不幸的是，由于治愈性治療的可能性有

看！心血管疾病研究--HTRF技術怎么做？2022/08/31

本文涉及應用技術：均相時間分辨熒光（HTRF&TR-FRET）。來看研究人員是如何利用HTRF技術助推心血管疾病的研究的吧。Comeon~一氧化氮信號通路研究一氧化氮（NO）是自分泌和旁分泌的信號通路分子，可以擴散進入生物膜。發揮作用時間很短，促進血管動態平衡。能夠抑制平滑肌收縮生長，阻止血小板凝聚以及防止白細胞-內皮細胞粘附。另外它還參與免疫防御系統，神經傳遞，血管生成等過程。研究表明，這種配體/受體長期低表達可能是高血壓、心力衰竭、心肌梗死、中風和死亡的發病的關鍵。因此，NO-sGC信號通路

外泌體來源長鏈非編碼RNA H19促進成骨和血管生成2022/08/30

骨質疏松癥是一種常見的代謝性骨病，其表現為骨量低和骨組織微觀結構惡化。這會導致骨脆性和骨折的風險增加。研究數據表明胱硫氨酸β合成酶(CBS)缺乏癥的患者通常患有骨質疏松癥和骨折。然而，目前的主要挑戰是了解CBS+/-條件下的骨髓間充質干細胞功能障礙的病因，以及制定臨床策略來保護這些患者的骨骼健康。治療骨骼異常的策略有多種多樣，如支架材料與生長因子的結合、細胞或自體骨移植等。研究辦法及結果1.通過RT2lncRNAPCRArray篩選（(LAMM-001Z,MouseLncRNAfinder,），

支氣管杯狀細胞中的MUC5B和MUC5AC在新型guan狀病毒中的研究2022/08/30

研究背景：SARS-CoV-2會優先感染支氣管氣道上皮的杯狀細胞。杯狀細胞（gobletcells）是一種特殊類型的上皮細胞，分泌黏性蛋白(mucins，MUCs)，是重要的黏液成分。黏蛋白5AC(MUC5AC)主要由氣道杯狀細胞表達，而黏蛋白5B(MUC5B)主要由粘膜下腺體的杯狀細胞表達。慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者細支氣管腔中的MUC5B蛋白和支氣管上皮中的MUC5AC蛋白表達會增高。由來自美國北達科他州大學的JaspreetOsan等人近日研究發現杯狀細胞在由SARS-CoV-2誘導