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上海聯(lián)碩生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第17年
干型透析袋的使用和注意事項(xiàng)2024/03/18
使用方法:①把透析袋剪成適當(dāng)長(zhǎng)度(10cm左右)的小段。②用60℃去離子水中水浴30分鐘-1小時(shí),再用去離子水膜內(nèi)沖洗3次。③使用時(shí),一端用下沉透析袋夾子夾緊,灌滿(mǎn)水后,用手指適當(dāng)加壓,檢查不漏,方可裝入樣品。通常要留三分之一至一半的空間,以防透析過(guò)程中,袋外的水和緩沖液過(guò)量進(jìn)入袋內(nèi)將袋漲破。裝完樣品后,用上浮夾子夾緊袋口,可在袋內(nèi)放一玻璃珠,以使透析袋處于懸浮狀態(tài),即可進(jìn)行透析。為了加快透析速度,除多次更換透析液外,還可使用磁力攪拌器。透析的容器要大一些,可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。注意事
細(xì)胞篩網(wǎng)的使用方法2024/03/11
準(zhǔn)備濾器:選擇合適的細(xì)胞篩網(wǎng),并根據(jù)需要在濾器上加上濾紙,使其更容易使用。準(zhǔn)備細(xì)胞懸液或培養(yǎng)基:將細(xì)胞懸液或培養(yǎng)基倒入容器中,并加入需要的藥物、酶、抗生素等。過(guò)濾細(xì)胞:將濾器輕輕地壓在溫和的細(xì)胞懸液或培養(yǎng)基中,讓其均勻地經(jīng)過(guò)細(xì)胞篩網(wǎng)的孔。收集過(guò)濾的細(xì)胞:過(guò)濾后的細(xì)胞可以直接通篩網(wǎng)被收集或者用無(wú)菌的器具從容器中進(jìn)行收集。細(xì)胞培養(yǎng):若需要培養(yǎng)篩選的細(xì)胞,則將其收集到未被污染的細(xì)胞培養(yǎng)基中,并按照培養(yǎng)基配方進(jìn)行培養(yǎng)。此外,細(xì)胞篩網(wǎng)的使用還需注意以下幾點(diǎn):1.細(xì)胞篩網(wǎng)的類(lèi)型。細(xì)胞篩網(wǎng)通常分為單層和多層兩
蛋白酶K的原理和應(yīng)用2024/03/05
新型蛋白酶K(ProteinaseK)的基因序列來(lái)源于林伯氏白色念球菌(Tritirachiumalbumlimber)的蛋白酶K基因,經(jīng)過(guò)了基因定點(diǎn)突變和酵母細(xì)胞分泌表達(dá)、色譜純化。經(jīng)過(guò)蛋白質(zhì)工程化的新型蛋白酶K提高了比活性和純度,不含有細(xì)菌內(nèi)毒素,應(yīng)用范圍比天然蛋白酶K更廣泛。新型蛋白酶K是現(xiàn)有蛋白酶中活性最高的品種,在pH4到pH12的條件下均有活性,反應(yīng)溫度介于0~75oC之間。在常用濃度的SDS、尿素或EDTA存在時(shí)亦很穩(wěn)定。酶切割位點(diǎn)在脂肪族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵,可以用于
不同類(lèi)型透析袋的區(qū)別2024/02/26
一、即用型透析袋即用型透析袋的制造過(guò)程沒(méi)有重金屬污染及硫化物,無(wú)需預(yù)處理,只需用去離子水清洗即可使用,滿(mǎn)足對(duì)截留分子量精確性和膜純度的應(yīng)用。1.韌性膜材料,不易破損2.雜質(zhì)含量極少,可無(wú)需預(yù)處理,只需用去離子水清洗即可使用3.孔徑標(biāo)準(zhǔn)均一4.對(duì)溶質(zhì)的吸附性小5.可選分子量范圍廣100-3000006.多種扁平寬度可選7.生物技術(shù)膜,不含硫化物及金屬雜質(zhì)二、普通干型透析袋1.PH穩(wěn)定范圍:5-92.污染物水平:硫化物3.化學(xué)兼容性:與很多鹽兼容,比如CaCl2,(NH4)2SO4;還可與分子生物學(xué)
牛血清白蛋白在實(shí)驗(yàn)中的作用2024/02/18
牛血清白蛋白(BSA)在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用,接下來(lái)為大家介紹其中兩種作用。牛血清白蛋白測(cè)定蛋白濃度:按50:1配置BCA工作液。10ulC液(蛋白標(biāo)準(zhǔn))+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液。再分別以0、1、2、4、8、12、16、20ul將蛋白標(biāo)準(zhǔn)液加入96孔板的第1~8標(biāo)準(zhǔn)孔中,在其他樣品孔中加入10ul待測(cè)樣品。分別加PBS定容至20ul。各孔中加入200ulBCA工作液,室溫放置2小時(shí)。用酶標(biāo)儀測(cè)定蛋白濃度:測(cè)定A562,依標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)算出蛋白濃度。牛血清白蛋白SDS-PA
配置瓊脂糖凝膠的方法2024/01/29
1.用于制備膠液的錐形瓶體積應(yīng)為膠液體積的2-4倍,緩慢向緩沖液中加入瓊脂糖,邊加邊攪拌,防止瓊脂糖聚集。記錄瓶體和溶液總重量。2.微波爐高火加熱30s,根據(jù)配制的溶液體積調(diào)整加熱時(shí)間。加熱時(shí)間與微波爐、瓶體大小和瓊脂糖濃度有關(guān)。3.搖勻瓊脂糖溶液。4.再次高火加熱30s,搖勻瓊脂糖溶液。5.將溶液再次放回微波爐,高火加熱至沸騰(大約10-35s)。接觸移動(dòng)時(shí)瓊脂糖膠液可能會(huì)劇烈沸騰,小心操作,避免燙傷。從微波爐拿出后,室溫冷卻1-2min,輕輕搖晃使液體里的氣泡溢出。6.重新放回微波爐,高火加
配置培養(yǎng)基過(guò)程中常見(jiàn)的問(wèn)題2024/01/22
一、培養(yǎng)基顏色不正確(1)含有酸堿指示劑的培養(yǎng)基,若顏色不正確,通常是由于pH不正確導(dǎo)致的,加熱過(guò)度、錯(cuò)誤的滅菌方式等都會(huì)導(dǎo)致此項(xiàng)問(wèn)題。(2)加熱過(guò)度導(dǎo)致某些成分分解或糖焦化,如SC培養(yǎng)基(SC增菌液)加熱過(guò)度會(huì)變紅,含糖量高的培養(yǎng)基,加熱過(guò)度通常會(huì)出現(xiàn)顏色加深,呈焦糖色或棕褐色。(3)某些成分變質(zhì),如血液久置易變黑,制成的平板顏色偏棕黑色。二、培養(yǎng)基產(chǎn)生沉淀(1)某些培養(yǎng)基原本就含有不溶性沉淀,如TTB,MC培養(yǎng)基等,配方中含有大量不溶性碳酸鈣。(2)滅菌前未充分溶解,如Fraser培養(yǎng)基中含
冰凍切片免疫熒光實(shí)驗(yàn)2024/01/15
1、冰凍切片固定冰凍切片37℃烘烤10至20分鐘,控干水分,置于4%多聚甲醛固定30min。于PBS緩沖液中晃動(dòng)洗滌3次,每次5分鐘。2、抗原修復(fù)將切片浸沒(méi)在升滿(mǎn)EDTA抗原修復(fù)緩沖液(PH8.0)的修復(fù)盆中,置于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù),修復(fù)條件:中火8min至沸——停火8min保溫——中低火7min(整個(gè)過(guò)程需防止修復(fù)液過(guò)度蒸發(fā),切勿干片。自然冷卻后,將切片置于PBS緩沖液中。然后在搖床上,晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。3、畫(huà)圈血清封閉切片稍甩干后,用組化筆在組織周?chē)?huà)圈,滴加組織自發(fā)熒光淬滅劑A
RNA提取原理與詳細(xì)步驟2024/01/08
原理用Trizol的溶液提取,將總RNA與DNA和蛋白質(zhì)分離。Trizol是一種酸性溶液,含有硫氰酸胍(GITC)、苯酚和氯仿。GITC不可逆地使蛋白質(zhì)和RNase變性。隨后進(jìn)行離心。在酸性條件下,總RNA保留在上層水相中,而大部分DNA和蛋白質(zhì)保留在中間相或下層有機(jī)相中。然后通過(guò)用異丙醇沉淀回收總RNA。RNase酶可以通過(guò)加入吡咯碳酸二乙酯(DEPC)來(lái)滅活。步驟組織:每100毫克新鮮組織加入1毫升TRIzol試劑,使用無(wú)菌手術(shù)刀在冰上切碎,并用無(wú)菌勻漿器或其他設(shè)備勻漿。細(xì)胞:如果是細(xì)胞培養(yǎng)
蛋白酶K的作用及保存方法2024/01/02
作用:蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用,以增強(qiáng)探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會(huì),提高雜交信號(hào)。但蛋白酶K濃度過(guò)高、消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或孵育溫度過(guò)高時(shí),都會(huì)對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)有一定的破壞,導(dǎo)致組織切片脫落,細(xì)胞核的消失,從而影響雜交結(jié)果。EDTA緩沖液可以代替蛋白酶K的作用,解決上述出現(xiàn)的問(wèn)題,并能達(dá)到理想的染色效果。保存方法:保存在-20℃的冰箱里,避免反復(fù)凍融,有效保證12個(gè)月。孵育溫度為55-65℃,理想孵育溫度為58℃,孵育時(shí)間為15分鐘至48小時(shí),理想孵育時(shí)間為2
免疫熒光實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞爬片如何使用2023/12/25
首先是玻片的處理,普通的蓋玻片用砂輪劃成自己要的大小的小方塊,先用洗衣粉洗干凈,用水沖靜烤干,然后泡酸過(guò)夜,撈酸后流水洗凈,烤干,置于器皿中高壓滅菌,然后再烤箱中大約8小時(shí)烤干備用。爬片可以在培養(yǎng)皿六孔板或24孔板中都可,我選擇在培養(yǎng)皿中爬。一為節(jié)約經(jīng)費(fèi)(培養(yǎng)皿可以重復(fù)利用)二來(lái)覺(jué)得培養(yǎng)皿口大,操作比較方便。培養(yǎng)皿消毒同上,消毒時(shí)記得消兩把鑷子具體操作是:用胰酶消化好細(xì)胞,充分吹打,使之成單細(xì)胞懸液(注意:這一點(diǎn)很重要,關(guān)系到將來(lái)爬出來(lái)片子的質(zhì)量)取出消毒的培養(yǎng)皿,可以先加少量培養(yǎng)基(以使玻片與
胎牛血清的功能有哪些?2023/12/20
胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。胎牛血清是高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分最少。胎牛血清的功能:胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)成份,常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類(lèi)、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)
胰蛋白酶如何在細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)揮作用2023/12/15
胰蛋白酶是一種消化酶,可分解許多脊椎動(dòng)物消化系統(tǒng)中的蛋白質(zhì)。它存在于胰液中。如何在細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)揮作用質(zhì)膜上的蛋白質(zhì)負(fù)責(zé)多種功能,這些功能對(duì)于維持細(xì)胞的正常生理活動(dòng)至關(guān)重要。一些質(zhì)膜蛋白(如鈣粘蛋白家族)是粘附蛋白,可作為錨,將細(xì)胞骨架蛋白連接到細(xì)胞外基質(zhì)。這有助于細(xì)胞粘附和細(xì)胞遷移。在細(xì)胞培養(yǎng)物中,可以將胰蛋白酶添加到培養(yǎng)基中,通過(guò)消化粘附蛋白從培養(yǎng)皿表面釋放貼壁細(xì)胞。胰蛋白酶還通過(guò)消化粘附蛋白從聚集體中釋放細(xì)胞。EDTA也與胰蛋白酶一起添加到細(xì)胞培養(yǎng)物中,以螯合培養(yǎng)基中的二價(jià)離子。鈣和鎂離子可
如何使用細(xì)胞分離液2023/12/11
細(xì)胞分離液的配置與使用:1、不同濃度分離液的制備:先用9份分離液與1份8.5%NaCl或1.5MPBS混合達(dá)到生理性滲透壓,然后用生理溶液稀釋到所需濃度。2、不連續(xù)密度梯度層的制備:先將試管壁用牛血清濕潤(rùn),除去多余血清,這種預(yù)處理可使逐層疊加的液平穩(wěn)沿管壁流下,使形成滿(mǎn)意的界面。在制備過(guò)程中一般用長(zhǎng)針頭注射器從高密度向低密度逐層放置,有時(shí)相鄰兩層比重相差不大時(shí),可將液放入注射器中,小針頭斜面緊貼管壁,任其自然慢慢流下。3、裝樣:樣品體積和細(xì)胞濃度根據(jù)不同細(xì)胞而異,一般加樣體積不宜過(guò)大,細(xì)胞濃度也
緩沖液配制操作流程2023/12/04
定義:緩沖溶液指的是由弱酸及其鹽、弱堿及其鹽組成的混合溶液,能在一定程度上抵消、減輕外加強(qiáng)酸或強(qiáng)堿對(duì)溶液酸堿度的影響,從而保持溶液的pH值相對(duì)穩(wěn)定。以常用的PBS磷酸緩沖溶液(不含鈣、鎂離子)為例,簡(jiǎn)述配制流程實(shí)驗(yàn)材料:NaClNa2HPO4KClKH2PO4Mili-Q水HCl電子天平高溫高壓蒸汽滅菌鍋巴氏吸管方形試劑瓶試劑配方:NaCl8.00g+Na2HPO41.15g+KH2PO40.20g+KCl0.20g+1LMili-Q水=1×PBS實(shí)驗(yàn)流程:根據(jù)配制需求計(jì)算需要使用的試劑量,用電
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附)原理及步驟詳解2023/11/29
酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)1.原理:免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識(shí)別和結(jié)合原理,對(duì)待測(cè)抗體或者抗原進(jìn)行分析測(cè)定的方法,酶聯(lián)免疫吸附分析(下稱(chēng)ELISA)是免疫分析的一種,分三個(gè)部分組成:免疫識(shí)別,信號(hào)輸出和數(shù)據(jù)處理。2.步驟:免疫識(shí)別是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗體,而后利用抗體識(shí)別待測(cè)的抗原(通常是疾病的蛋白質(zhì)生物標(biāo)記物,病毒,細(xì)菌等等,從復(fù)雜待測(cè)液中將抗原吸附到96孔板表面。接著用帶有辣根過(guò)氧化酶(HorseradishPeroxidase,HRP)、熒光或放射性
免疫熒光染色步驟和原理2023/11/22
免疫熒光染色是一種常用的細(xì)胞和組織學(xué)研究技術(shù),它利用特異性抗體與標(biāo)記熒光染料結(jié)合,來(lái)檢測(cè)和定位細(xì)胞中的特定蛋白質(zhì)或其他分子。以下是免疫熒光染色的步驟和原理:步驟:1.細(xì)胞或組織樣品的固定:通常使用甲醛或乙醛來(lái)固定細(xì)胞或組織,以保持其形態(tài)和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的完整性。2.抗體的孵育:將特異性抗體加入到樣品中,與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合。3.洗滌:用緩沖液洗去未結(jié)合的抗體。4.二抗的孵育:加入熒光標(biāo)記的二抗,與原抗體結(jié)合。5.洗滌:用緩沖液洗去未結(jié)合的二抗。6.熒光顯微鏡觀(guān)察:使用熒光顯微鏡觀(guān)察樣品,熒光信號(hào)可顯示目
什么是離心管,需要注意哪些事項(xiàng)?2023/11/15
離心管(CentrifugeTube)是實(shí)驗(yàn)室中常用的一種實(shí)驗(yàn)耗材,主要用于離心實(shí)驗(yàn)。離心管按大小可分為微量離心管和普通離心管,可以承受高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的離心力,通常微量離心管離心力測(cè)試最高可達(dá)21000g;而普通離心管離心力測(cè)試最高可達(dá)12000g;將樣品中的不同成分按照密度和質(zhì)量進(jìn)行分離。按照材質(zhì),離心管有塑料離心管,玻璃離心管幾種,有不同的體積和形狀,如0.6ml,1.5ml、2ml,15ml、50ml等。注意事項(xiàng):1.使用離心管時(shí),請(qǐng)確保離心管質(zhì)量良好,無(wú)破損或裂紋。2.離心管應(yīng)與離心機(jī)匹配
在試驗(yàn)中ELISA試劑盒的條件挑選2023/11/10
在ELISA試劑盒中,進(jìn)行各項(xiàng)試驗(yàn)條件的挑選是很重要的,其間包括:(1)固相載體的挑選:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。現(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一試驗(yàn)條件下進(jìn)行反響,調(diào)查其顯色反響是否均一性,據(jù)此判明其吸附功能是否良好。(2)包被抗體(或抗原)的挑選:將抗體(或抗原)吸附在固相載體外表時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)刻及其蛋
電泳緩沖液的特點(diǎn)是什么?有何作用?2023/11/03
電泳緩沖液是核酸、蛋白質(zhì)凝膠電泳系統(tǒng)的一個(gè)重要組成,是電泳場(chǎng)中的導(dǎo)體,也是維持電泳系統(tǒng)恒定pH值的必要條件。常見(jiàn)的核酸電泳緩沖液有:TAE、TBE、TPE和MOPS等。電泳緩沖液的特點(diǎn):1.TAE是使用緩沖系統(tǒng)。其特點(diǎn)是超螺旋在其中電泳時(shí)更符合實(shí)際相對(duì)分子質(zhì)量(TBE中電泳時(shí)測(cè)出的相對(duì)分子質(zhì)量會(huì)大于實(shí)際分子質(zhì)量),且雙鏈線(xiàn)狀DNA在其中的遷移率較其他兩種緩沖液快約10%,電泳大于13kb的片段時(shí)用TAE緩沖液將取得更好的分離效果,此外,回收DNA片段時(shí)也易用TAE緩沖系統(tǒng)進(jìn)行電泳。TAE的缺點(diǎn)是
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