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免疫熒光染色原理及步驟2023/08/18

免疫熒光又稱免疫熒光抗體。免疫熒光實驗原理是將熒光素標記在相應的抗體上，直接與相應抗原反應。其優點是方法簡便、特異性高，非特異性熒光染色少，相對使用標記抗體用量偏大。利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。下面詳細介紹免疫熒光染色步驟：1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標本片上，10min后棄去，使標本保持一定濕度。2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液，使其覆蓋標本，置于有蓋搪瓷盒內，保溫一定時間(參考：30min)。3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，p

塑料離心管的特點2023/08/14

實驗室常用的離心管有塑料的和玻璃的，一般塑料的用的較多，因為玻璃的離心管不能用在高速或者超速離心機上。塑料的離心管有PP（聚丙烯）、PC(聚碳酸酯)，PE(聚乙烯)等材質。PP的管子性能相對來說比較好。塑料離心管為透明或者半透明，可以直觀的看到樣品離心情況。接下來就介紹一下各種材質塑料離心管的特點：PP（聚丙烯）：半透明，化學及溫度穩定性較好，但是在低溫下會變脆，所以在離心時不要在4℃以下。PC(聚碳酸酯)：透明度較好，硬度大，可以高溫消毒，但不耐強酸強堿以及一些有機溶劑如酒精之類。主要用于5萬

木瓜蛋白酶的性質及酶活測定方法2023/08/08

木瓜蛋白酶（Papain），又稱木瓜酶，是一種蛋白水解酶。木瓜蛋白酶是番木瓜（Carieapapaya）中含有的一種低特異性蛋白水解酶，廣泛地存在于番木瓜的根、莖、葉和果實內，其中在未成熟的乳汁中含量。木瓜蛋白酶的活性中心含半胱氨酸，屬于巰基蛋白酶，它具有酶活高、熱穩定性好、天然衛生安全等特點。化學性質木瓜蛋白酶是一種在酸性、中性、堿性環境下均能分解蛋白質的蛋白酶。它的外觀為白色至淺黃色的粉末，微有吸濕性；木瓜蛋白酶溶于水和甘油，水溶液為無色或淡黃色，有時呈乳白色；幾乎不溶于乙醇、氯/仿等有機溶

液氮儲存細胞的安全性如何保證？2023/08/07

存放注意事項：1.禁止將罐口密封，以免液氮持續蒸發的氮氣無法排出導致液氮罐爆炸；2.定時檢測液位高度，及時補充液氮，避免液氮蒸發后細胞凍存溫度不夠導致失活；3.禁止密閉空間存儲，避免空間內氮氣含量高無氧氣，導致人員缺氧窒息；4.做好個人防護，避免深低溫液氮直接接觸皮膚導致凍傷。取出注意事項：1.做好個人防護，不可徒手去拿從液氮罐中出來的細胞凍存管；2.取出時不要直接將提桶、提籃拿出液氮罐，可放在罐口位置，瀝干提桶、提籃的液氮；3.細胞凍存管取出后可放-80°冰箱或放倒在吸水紙上，使滲入液氮緩慢揮

小鼠腫瘤壞死因子α試劑盒的原理和操作方法2023/08/03

實驗原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被腫瘤壞死因子α(TNF-α)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腫瘤壞死因子α(TNF-α)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設置標準品孔和

ELISA試劑盒組成與常見ELISA試劑盒分類2023/07/31

ELISA快速檢測技術越來越多的用于疾病診斷、食品安全檢測中，那么ELISA試劑盒的主要組成成份是什么呢？根據ELISA試劑盒的應用范圍，可將ELISA試劑盒分為拿幾種呢？ELISA試劑盒主要的組成成份如下：(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)；(2)C的抗原或抗體(結合物)；(3)酶的底物；(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中)，參考標準品和控制血清(定量測定中)；(5)結合物及標本的稀釋液；(6)洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；(7)

PVDF膜的特點2023/07/27

PVDF膜是一種用于各種實驗室和工業應用的膜，用于過濾、分離和純化生物和化學樣品。PVDF代表聚偏二氟乙烯，它是一種具有高化學和熱穩定性的合成聚合物，使其適用于廣泛的應用。PVDF膜通常用于蛋白質和核酸轉移、蛋白質印跡以及其他需要高蛋白質結合能力和低背景干擾的應用。特點：PVDF膜具有多種特性，使其在實驗室和工業應用中廣受歡迎。1、化學和熱穩定性：PVDF可耐受大多數化學品、有機溶劑和溫度，使其適用于惡劣環境。2、高蛋白結合能力：PVDF膜對蛋白質具有高親和力，使其成為蛋白質轉移和蛋白質印跡應用

透析袋的選擇和使用2023/07/24

透析袋的選擇1，正確選擇合適的截留分子量截留分子量的選擇是以預留在膜內的大分子的分子量和將要被除去的小分子污染物的分子量為基礎的。為達到合理有效的分離，需分離的兩種物質分子量的比率至少為25，選擇截留分子量的經驗法則：選擇截留分子量值約為要保留的大分子分子量的一半，以獲得至少90%的保留率。2，正確選擇扁平寬度透析袋扁平寬度的選擇取決于樣品體積和透析容量。較小的透析管透析更快；較大的透析管因擴散距離較長透析較慢。為易于使用，建議使用總長（包括閉合夾和頂部空間）為大約10-15厘米的透析袋。3，透

吐溫80的用法及用量分析2023/07/20

吐溫80又稱聚山梨酯80，是一種非離子型表面活化劑及乳化劑，化學式為C24H44O6(C2H4O)n。易溶于水，溶于乙醇、植物油、乙酸乙醇、甲醇、甲苯，不溶于礦物油。低溫時成膠裝，受熱后復原；有特臭，味微苦。用法及用量分析：1、吐溫80為油酸酯，有很好的乳化作用，一般用作乳化劑、潤濕劑。建議用量：1%-2%（僅供參考，以實際應用為準）。2、吐溫80是制劑學上常用的增溶劑，根據有關參考文獻表示一般用量為1%-2%。3、吐溫80加入量：如果按1%濃度計算，所需吐溫80加入量為10ml；同理，若按2%

PBS怎么配？2023/07/19

PBS作為生物實驗中的試劑，PBS是磷酸緩沖鹽溶液，一般作為溶劑，起溶解保護試劑的作用。一般的有活性的生物制劑都要用它來稀釋。它具有鹽平衡、可調整適宜pH、可以緩沖pH等特點。PBS、蒸餾水和生理鹽水三種溶劑該怎么選擇呢？蒸餾水不具有鹽平衡作用，可以破壞生物蛋白的結構及生物特性；而生理鹽水不具有調整pH的作用，對完整的、具有活性的物質不能保證其在最適條件下參與生物反應。在實驗室也常見PB、PBST溶液。PB溶液的成分通常有磷酸鈉和磷酸鉀。若只是化學反應,用PB溶液就行。在PB的基礎上按照一定比例

引物在 PCR 反應中的作用是什么？2023/07/18

引物是一段短的單鏈RNA或DNA片段，可結合在核酸鏈上與之互補的區域回，其功能是作為核苷酸答聚合作用的起始點，核酸聚合酶可由其3′端開始合成新的核酸鏈。體外人工設計的引物被廣泛用于聚合酶鏈反應、測序和探針合成等。PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°C左右）時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。

新生牛血清的成分2023/07/17

1.蛋白質新生牛血清中的主要成份中除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類蛋白外，主要還有白蛋白，球蛋白。纖維粘連素細胞促進細胞附著;胎牛血清中含胎球蛋白促細胞依附;轉鐵蛋白可以結合鐵離子，減少其毒性會被細胞利用的可能。2.多肽血小板促生長因子能促細胞分裂，據專人介紹新生牛血清是多肽家族的重要成員，多肽擁有著重要的作用，比如它可以促進細胞增殖因子數量的增加，不僅如此，它還能夠促成纖維細胞生長因子以及神經細胞生長因子等，據悉，雖然從數量上來看新生牛血清的含量比例少，但它能夠促進細胞的增長。3.激

DNA瓊脂糖凝膠電泳時上樣緩沖液的量應該為多少？2023/07/14

瓊脂糖凝膠電泳上樣量，一般取決于瓊脂糖凝膠的大小和濃度，以及DNA的濃度和純度等因素。通常而言，瓊脂糖凝膠電泳的上樣量應該在0.1至1.0μg之間。如果上樣量太低，DNA條帶可能會過于模糊且難以讀取，無法得出準確的結果；而如果上樣量太高，則會使得DNA條帶過于密集而無法區分，也會影響結果的準確性。因此，確定適當的上樣量是進行瓊脂糖凝膠電泳實驗的關鍵因素之一。下面是一些常見的上樣量推薦：1.載體DNA：10ng至1μg2.PCR產物：10ng至1μg3.高分子DNA：約50-100ng4.短DNA

瓊脂粉的來源和用途2023/07/13

瓊脂粉是一種半乳糖單元的復合硫酸化聚合物，從軟骨球藻、裙帶菜和相關紅藻中提取。它被用作制備微生物固體培養基的凝膠，用作散裝瀉藥，用于制備乳劑，并用作免疫擴散和免疫電泳的支持介質。瓊脂粉無臭或有輕微的特征氣味。非圓形瓊脂通常以由薄的、膜狀的、凝集的條帶或切割的、片狀的或粒狀的形式形成。它可能是淡黃橙色、黃灰色至淡黃色或無色。潮濕時堅硬，干燥時易碎。粉狀瓊脂為白色至黃白色或淡黃色。當在顯微鏡下在水中檢查時，瓊脂粉末看起來更透明。在水合氯醛溶液中，粉末狀瓊脂比水更透明，或多或少呈顆粒狀、條紋狀、棱角狀

如何挑選合適的ELISA試劑盒2023/07/12

首先，需要明確實驗目的是做靶標功能性測定還是含量檢測。功能性測定一般是酶及底物的反應，對生物活性的分析。而Elisa專用于靶標分子的含量檢測。其次，如果所研究指標為蛋白質或多肽，需查詢對應的的UniprotID，在選擇產品時同時核對指標名和UniprotID；如果所研究指標為小分子半抗原，此類化學物質需查詢對應的CAS號，結合CAS號選擇需要的產品。然后，還需要根據已有文獻查詢或預判靶標在生物樣本中的有無或含量區間，針對性選擇靈敏度足夠的試劑盒，同時和廠商確認試劑盒的適用樣本是否包含客戶自己的實

如何鋪出均勻的細胞培養板？2023/07/10

細胞居中和細胞邊緣化從經濟和高效的角度來說，需要根據實驗目的選擇不同規格的培養板。如在進行藥物對待測細胞半抑制率（IC50）測試時，通常使用96孔板，一方面可以設置濃度梯度；另外還可一次性測多個藥物，減少實驗誤差。收集細胞要混勻消化后的細胞一定要充分混勻，要把聚在一起的細胞團充分地吹打開，最好是單個的狀態，但同時又不能損傷細胞，可以用玻璃吸管的移液器操作。離心也很有講究，一般用1000rpm/min即可。離心力太大細胞容易抱團，然后懸浮離心后的細胞團時，先不要把所有液體都加進，一般先加2mL液體

如何用PBS清洗細胞？2023/07/06

一：取材撕取洋蔥鱗莖內表皮2～3mm2置于載玻片上，用吸管加6mmoI的PBS緩沖液兩滴，使材料充分浸入到液體中，處理約5分鐘。（撕取的材料大小適中，且為內表皮）二：去垢處理用吸水紙吸凈浸泡材料的PBS緩沖液，加2～3滴37°C預溫的去垢劑1%TritonX-100，使液體充分浸泡材料，并立即放入37C水浴鍋中處理15分鐘。（吸水紙不要直接在材料上面吸，以免帶丟材料，去垢處理過程中不要讓材料干燥）三：沖洗吸去1%Triton，用6mmol的PBS緩沖液輕輕沖洗，反復兩至三次。四：固定用吸水紙吸盡

超濾管的使用2023/07/05

1）.濃縮含有抗原、抗體、酶、核酸（DNA/RNA樣本，單鏈或雙鏈）、噬菌體等微生物樣本2）.純化組織培養提取液或細胞裂解液中的大分子成分，去除反應液中的引物、接頭或分子標記，在HPLC前去除蛋白質。3）.除鹽，緩沖液更換，或滲濾。使用方法：1）.將超濾內管插入所提供的一個微量離心管中。2）.向超濾管內管中加入不超過500μL的樣本,并蓋上蓋子。3）.將蓋好蓋子的超濾管放入離心轉子中，讓蓋子的連接帶朝著轉子的中央;用一個類似的超濾管平衡。4）.以14,000xg離心約10-30分鐘,具體時間取決

重組蛋白溶解復溶緩沖液和載體蛋白2023/07/04

干粉形式的重組蛋白在常溫下能夠保持穩定，大多數MCE重組蛋白以干粉形式發貨。凍干粉在使用前需進行溶解，這時候會常看到一位陌生又熟悉的“朋友”——載體蛋白。溶解教學：Step1:判斷實驗周期。短期實驗=7天，溶解材料：復溶緩沖液、載體蛋白。Step2:開蓋前離心。凍干粉在運輸過程中，會因為外力因素粘附于管壁或者管蓋上，在開蓋之前，先通過離心操作，將凍干粉收集于管底，避免損失和浪費。建議10,000-12,000rpm高速離心30s；若沒有高速離心機，3,000-3,500rpm離心5min。Ste

瓊脂糖的原理及實驗過程2023/07/03

實驗原理瓊脂糖凝膠電泳常用于分離、鑒定DNA、RNA分子混合物，以瓊脂凝膠作為支持物，利用DNA分子在電場中時的電荷效應和分子篩效應，達到分離混合物的目的。DNA分子在高于其等電點的溶液中帶負電，在電場中由陰極向陽極運動。在一定的電場強度下，忽略DNA分子攜帶的電荷，DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應，即分子本身的大小和構型是主要的影響因素。DNA分子的遷移速度與相對分子量成反比。不同構型的DNA分子的遷移速度不同。如環形DNA分子樣品，其中有三種構型的分子：超螺旋分子（cccDNA）、開環分