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Western blot實驗結果分析2021/9/15
Westernblot實驗結果分析①微笑條帶解析：由于凝膠的中間部分凝固不均勻所致，多出現于較厚的凝膠處理辦法：配膠時一定要充分混勻，待其充分凝固后再做后續試驗②帶出現紋理現象解析：樣品不溶性顆粒處理...
WB的免疫印跡操作分享2021/9/14
①膜處理（甲醇1min，風干（放濾紙上），甲醇1min，水1min）②封閉（用TBST配5%牛奶）1h配搖床③加一抗，牛奶稀釋,所需濃度參考抗體說明書，看膜的大小配多少一抗，4°過夜。④室溫孵育20m...
WB過程中最重要的環節——轉膜2021/9/14
①跑到溴酚藍距離最下緣25px時配電轉液（tris3.03g，甘氨酸14.4g，甲醇100ml，定容至1L）②在電轉液中剝膠，裁膠，剪膜，膜活化（甲醇1min，去離子水1min，電解液15min）③“...
WB電泳技巧分享2021/9/14
①清洗玻璃板，去離子水沖，風干或烤干（一定要以處女座的精神去嚴格要求自己把板子洗干凈，相當重要）②按說明書配膠。先配下膠（分離膠），一般兩塊板配10ml的10%的膠（20~80kDa通用）膠的濃度根據...
蛋白樣品的制備與定量2021/9/14
（1）提細胞蛋白①消化或刮下細胞至1.5的EP管中，標記，10000r離心2min，PBS洗3遍②吸去EP管中PBS，最好用濾紙吸干里面的水分，加適量RIPA裂解液（RIPA裂解液：蛋白酶抑制劑=25...
三天征服Chip的經驗分享2021/9/13
在科研界，CHIP無疑是高冷的女神，在追逐的過程總是分分鐘虐得體無完膚，糟心的實驗結果更是分分鐘想去“狗帶”。征服CHIP的路上，有多虐心就有多少要注意的地方。慶幸的是，曾得到女神青睞的前輩們積累了不...
CO-IP沒有條帶的常見原因和解決的辦法2021/9/13
CO-IP并不容易做，尤其是兩個蛋白豐度低，相互作用力較弱的時候。做CO-IP經常會遇到沒有條帶的問題。這里談談CO-IP沒有條帶的常見原因和解決的辦法，更有獨門配方獻上。蛋白濃度過稀絕大多數情況下，...
染色質免疫共沉淀值得注意的15個細節2021/9/13
染色質免疫共沉淀，又叫Chip（ChromatinImmunoprecipitation）。Chip又正好是英語里面薯片的意思。為了有趣，就叫薯片實驗吧。做薯片做了幾個月，時間不長，但深刻體會到了魔鬼...
分享染色質免疫共沉淀的方法2021/9/13
目前，不斷發展的DNA和蛋白質相互作用的方法和技術已經成為研究DNA復制、重組、修復和轉錄的核心。今天跟大家分享的是花樣百出、拽酷炫的染色質免疫共沉淀的方法！染色質免疫共沉淀(chromatinimm...
ELISA實驗操作中值得關注的細節大盤點2021/9/10
酶聯免疫吸附測定（ELISA）因其具有敏感性高、特異性強等優點，被廣泛應用于臨床檢測中的各種抗原和抗體的測定。盡管ELISA操作簡單，但是小實驗里也蘊含著大文章，ELISA操作各個環節對實驗的檢測效果...
ELISA實驗中常遇到的問題、產生的原因與解決辦法2021/9/10
酶聯免疫吸附實驗，簡稱為ELISA。ELISA實驗是一種非常經典的免疫學實驗。雖然歷史非常悠久了，但是還是不斷地在臨床和基礎研究中得到應用。其主要用于：免疫酶染色各種細胞內成份的定位；研究抗酶抗體的合...
一句話知曉實驗方法怎么選？2021/9/8
在分子生物學實驗室里的玩法，無非就是用某種特定的刺激物（如細胞活素）去刺激一些細胞或組織，讓它們high起來，然后分析細胞對這些外源刺激物的反應，檢測細胞內哪條信號通路被激活或失活，或者什么蛋白被分泌...
免疫組化（IHC）的10大實戰經驗（附臨床上常用免疫組化指標）2021/9/8
1.把要做的切片先分好，做幾個抗體可分幾盒，不正常組織與正常組織要分開。其余做預實驗用。2.選擇實驗要做的抗體時，要結合他們的正常組織和癌組織的分別表達率。3.試劑盒的選擇可結合生物素強弱的情況。如：...
免疫組化之8大疑難解答2021/9/8
IHC常見的8大疑問Q1：冰凍切片和石蠟切片如何取材？Answer:冰凍切片取材可分為兩種情況：1）動物灌流固定：如小鼠心臟灌流，首先采用預冷的1×PBS灌流沖洗直至血液全部放出，隨后灌注4%PFA直...
免疫組化結果分析應該注意的一些事項和技巧2021/9/8
很多時候，我們千辛萬苦地染出了一張張漂亮的免疫組化片子。但是卻不知道如何正確地分析，得出理想的結果。這實在是一件憾事。其實，免疫組化結果分析的protocol教科書和實驗手冊上面都有。今天主要談談應該...
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