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化學感受態細胞該菌株衍生自大腸桿菌菌株B,具有lon和ompT蛋白酶缺陷的優點,是目前應用廣泛的表達宿主菌之一,其操作方法如下:1、化學感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,6分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質粒或連接產物)并用手滑動EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。2、42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置5分鐘,晃動會降低轉化效率。3、向離心管中加入0.9mL室溫S.O.C.(S.O.C.營養豐富,可提高轉化效率)或LB培養基。4、30℃,250rpm復蘇60分鐘。當
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藥物是不能亂吃的,需要在醫生的指導下服用!重組人干擾素α2b又叫長生扶康,是一種微黃色或白色疏松體,溶解后為澄明液體,無肉眼可見的不溶物。重組人干擾素α2b通過肌肉或皮下注射,血液濃度達峰時間為3.5~8小時,消除半衰期為4~12小時。腎臟分解代謝為干擾素主要消除途徑,而膽汁分泌與肝臟代謝的消除是重要途徑。肌內注射或皮下注射的吸收超過80%。重組人干擾素α2b用法用量1.慢性乙型肝炎:皮下或肌內注射,3~6×106IU/日,連用四周后改為3次/周,連用16周以上。2.慢性粒細胞白血病:3~5×1
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哺乳動物細胞真核表達系統在表達過程中有翻譯后修飾和折疊的功能,這一特點使其蛋白更接近天然蛋白,具備天然蛋白必須的空間結構和修飾,與天然蛋白有相同的生物活性,哺乳動物細胞表達系統在功能蛋白、抗體生產、臨床疫苗的研發和生產中應用較為廣泛。原核表達系統具有表達水平高、操作簡單、周期短、易于大規模高密度培養、成本低等優點,而對于全抗體和糖蛋白類生物藥物來說,表達產物多肽鏈的折疊、二硫鍵的形成、糖基化的有無以及糖基化的類型常常影響表達產物的合成分泌、生物活性、體內穩定性以及免疫原性等特性。由于原核細胞缺少
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重組蛋白作為生物制藥在醫學中作用顯著,一般用轉基因動物的乳腺產生。重組蛋白真核表達包括酵母表達系統、桿狀病毒-昆蟲細胞表達系統、腺病毒表達系統等。一般可以正確折疊,包含各種修改。但是價格高,周期長。重組蛋白真核表達系統技術平臺的特色快速、highly-stringent篩選:只篩選到高表達穩定株;4~5個月獲得穩定高表達細胞株(常規方法要9~12個月)高效表達:*啟動子和*分泌信號肽,很容易達到30p/c/d/以上(傳統方法需要用藥物篩選9~11輪以上才能達到)穩定表達:表達質粒上的AGE穩定子
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支原體是一種特殊的微生物,在哺乳動物(包括人類)、爬行動物、昆蟲和植物中廣泛分布。它是小、較為簡單的可自我復制的原核生物,大小僅為0.2-0.8um。支原體的基因組僅為0.58-2.20Mb,其自身生物合成能力有限,因此大部分營養物質都要依賴于宿主。在真核細胞培養過程中,支原體感染發生率達到63%,因而細胞培養過程中被支原體污染是一個世界性的難題。細胞培養中常遇見的有細菌污染、真菌污染、支原體污染、病毒污染等。說起支原體污染,估計細胞培養的同學就開始犯愁了,細胞培養的老手都知道,支原體污染非常不
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化學感受態細胞是常規克隆和亞克隆實驗應用較為合適的解決方案。經氯化鈣處理,促進質粒DNA黏附于感受態細胞膜上。將感受態細胞通過水浴熱激,使細胞膜孔打開,從而質粒可以進入。操作方法:(以下操作均按無菌條件的標準進行)1、取感受態細胞置于冰浴中,如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中,置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100μl,可以根據實際情況分裝使用。應注意所用DNA體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一。以下實驗以100μl感受態細胞為例。2、向感受態細胞懸液中加入
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多克隆抗體就是用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動物,刺激機體多個B細胞克隆產生針對多種抗原表位的不同抗體后,所獲得的免疫血清實際上是含有多種抗體的混合物。由一種抗原決定簇刺激機體,由一個B淋巴細胞接受該抗原刺激所產生的抗體稱之為單克隆抗體。由多種抗原決定簇刺激機體,相應地就產生各種各樣的單克隆抗體,這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體。多克隆抗體與單克隆抗體的應用比較(1)多克隆抗體的應用一種良好的多克隆抗血清含有抗某種抗原不同表位的多種抗體。由于多克隆抗血清通常包含抗某一抗原的不同表位的抗
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M15化學感受態細胞是采用大腸桿菌M15菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞,可用于DNA的化學轉化。它能表達lac阻遏蛋白,抑制T5強啟動子的表達。同時,pREP4還賦予宿主菌株卡那霉素抗性。pREP4是從pACYC改造而來的,含有p15A復制子。它能夠與所有帶ColE1復制起點的質粒共存。主要特點使用pUC19質粒檢測,轉化效率可達108,-80℃保存幾個月轉化效率不發生改變。recA1和endA1突變阻止對克隆DNA的修飾或對宿主菌染色DNA的重組,提高純化質粒的產量和質量。M15化學感受態