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真核細胞培養時支原體污染表現以及解決方式

2020-12-8  閱讀(473)

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   支原體是一種特殊的微生物,在哺乳動物(包括人類)、爬行動物、昆蟲和植物中廣泛分布。它是小、較為簡單的可自我復制的原核生物,大小僅為0.2-0.8um。支原體的基因組僅為0.58-2.20Mb,其自身生物合成能力有限,因此大部分營養物質都要依賴于宿主。
  在真核細胞培養過程中,支原體感染發生率達到63%,因而細胞培養過程中被支原體污染是一個世界性的難題。細胞培養中常遇見的有細菌污染、真菌污染、支原體污染、病毒污染等。說起支原體污染,估計細胞培養的同學就開始犯愁了,細胞培養的老手都知道,支原體污染非常不易察覺。有的實驗室被支原體污染后,如果不進行有效*的支原體清除,該實驗的細胞培養很難進行下去,細胞傳代3代以后狀態就急劇下滑,無法進行正常實驗,有的實驗室甚至只能指望換細胞間。
  真核細胞培養時支原體污染表現
  細胞形態改變,一般是有梭形變成圓形,不再貼壁生長,漂浮
  光鏡下,可以看到細胞膜上吸附很多圓點,40*16倍下約有0.1mm,分布多集中于細胞核周圍和細胞邊緣,中間部位較少
  消化時可以看到圓點從細胞膜上游離出來,很多,還會動
  細胞培養液變堿,有大量小黑點游離
  解決方法
  ①添加抗支原體劑量的pbs或者其他平衡鹽液進行潤洗,然后消化
  ②常規離心,用添加抗支原體(沙星類較為有效)的*培養液重懸,植入新的培養瓶
  ③培養并且密切觀察(抗支原體推薦使用的濃度及時間如下)
    恩諾沙星25μ/ml,治療時間一周;
    環丙沙星10μ/ml,治療時間兩周;
    司氟沙星10μ/ml,治療時間一周;
  治療時間滿后撤藥換用普通雙抗培養基或者無抗培養基,另外特別說明因為以上藥物均抗G+-,所以添加的時候不需要再添加常規雙抗。
 

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