本試劑盒用于高純度質粒 DNA 的小量制備。菌體經堿裂解、高鹽、低 pH 處理，質粒可從菌體中釋放出來，并特異、高效地被離心吸附柱吸附。通過清洗液的洗滌可去除雜質，在低鹽、高 pH 條件下洗脫，最后得到純度較高的質粒 DNA。所得質粒可直接用于酶切、轉化、PCR、RT-qPCR、測序及轉染等分子生物學實驗。
高純度質粒小提試劑盒（離心柱型）核酸提取

HiPure Plasmid Mini Kit

高純度質粒小量快速提試劑盒

高純度質粒小提試劑盒（離心柱型）核酸提取

目錄號：31013

產品內容：

保存條件：

在室溫(15 ~ 25℃)干燥條件下，可保存 12 個月。加入 RNase A 后的溶液 P1 應置于 2 ~ 8℃保存，可穩定保存 6 個月,如果 P1 中 RNase A 失活，重新補加即可。

產品簡介：

本試劑盒用于高純度質粒 DNA 的小量制備。菌體經堿裂解、高鹽、低 pH 處理，質粒可從菌體中釋放出來，并特異、高效地被離心吸附柱吸附。通過清洗液的洗滌可去除雜質，在低鹽、高 pH 條件下洗脫，最后得到純度較高的質粒 DNA。所得質粒可直接用于酶切、轉化、PCR、RT-qPCR、測序及轉染等分子生物學實驗。

產品特點：

1. 得率高：1.5 - 4.5ml 可提出多達 10 – 20 ug 的純凈質粒；

2. 純度高：沉淀致密，去雜質che底干凈；

3. 高效：操作簡便，快捷，節約時間。

注意事項：

1. 使用前請先檢查平衡液、溶液 P2 和溶液P3 是否出現渾濁，如有混濁現象，可在 37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復澄清。

2. 細菌培養時間一般為 12 ~ 16 小時，過度培養會降低質粒質量甚至導致質粒DNA突變；

3. 注意溶液P1，P2和 P3的用量比例，若細菌量增大，需按比例放大這些溶液的使用量；

4. 隨菌體增多應延長溶液P2的作用時間，直至溶液成粘稠透明狀，但時間過長會導致質粒DNA變性。

5. 質粒的產量跟細菌量、質粒拷貝數、質粒大小和操作規范程度密切相關，一般1.5ml過夜培養菌體可收獲約10ug高拷貝質粒。

重要提示：

一、第一次使用前請先在去蛋白液PE、漂洗液WB中加入指ding量無水乙醇（見瓶身標簽），充分混勻，并做好標記，以免多次加入。

二、shou次使用時請先將 RNase A全部加到溶液P1中，混勻，每次使用后置于2~8℃保存。

操作步驟：

1. 柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入100ul的平衡液，12,000rpm離心1min，棄收集管中濾液，將吸附柱重新放回收集管中。

2. 取1~5ml過夜培養的菌液，室溫12,000rpm離心30sec，盡量倒干上清，收集菌體。

（注意：根據菌液的濃度決定取液量，濃度高時取1.5ml菌液離心即可，濃度低時可多收集一次）

3. 加入250ul溶液P1，重懸菌體沉淀，渦旋震蕩至che底懸浮。

（注意：如有未che底懸浮的菌塊會影響裂解，導致提取的質粒濃度及純度降低）

4. 加入250ul溶液P2，溫和地上下翻轉6-8次，使菌體充分裂解，室溫放置4min。

（注意：不可劇烈震蕩，以免造成基因組 DNA 片段的污染，所用時間不要超過 5 min，以免質粒受到破壞，如未wan全變得清亮，可能是菌體太多，可增加溶液 P2 的用量，在后續的操作中溶液 P3 的用量也要相應增加）

5. 加入350ul溶液P3，立即溫和地上下翻轉6-8次，充分混勻時會出現白色絮狀沉淀，然后室溫12,000rpm離心10min。

（注意：加入溶液P3后應立即混合，避免產生 SDS的局部沉淀）

6. 將上清液轉移到吸附柱中，室溫12,000rpm離心1min，質粒被吸附在膜上，棄濾液。

7. 可選步驟：向吸附柱中加入 500 ul 去蛋白液 PE，室溫 12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

（注意：去蛋白液 PE 為濃縮液，按要求加入無水乙醇，用后應立即蓋緊瓶蓋，以防酒精揮發）

（注意：如果宿主菌是 endA-，如 DH5α，此步驟可省略。如果宿主菌是 endA+，如 TG1、BL21、 HB101、JM101等，此步驟不可省略，因這些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解質粒。如果提取低拷貝質粒也推薦采用此步驟）

8. 加入600ul漂洗液 WB，室溫 12,000rpm離心30sec，棄濾液。

（注意：漂洗液 WB 為濃縮液，按要求加入無水乙醇，用后應立即蓋緊瓶蓋，以防酒精揮發）

9. 重復步驟 8一次。

10. 室溫12,000rpm離心2min，甩干殘留液體。

（注意：此步不能省略，否則殘留乙醇會影響質粒的后續使用）

11. 將吸附柱置于一個新的1.5 ml離心管（自備）中，加入50~100 ul的洗脫緩沖液 EB，室溫放置2min，12,000rpm離心1min，離心管底溶液即質粒 DNA。

（注意：事先在 65~70℃水浴中預熱洗脫緩沖液 EB，可增加洗脫效率；如果需要較多量質粒，可將得到的溶液重新加入吸附柱中，再次離心 1 min 收集；如需使用去離子水洗脫，可用 NaOH 調整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之間。）

低拷貝或大質粒（>10 kb）提取

如果所提質粒為低拷貝質粒或大于10kb的大質粒，應加大菌體使用量，使用5~10ml過夜培養物，同時按照比例增加溶液 P2、P2、P3的用量，脫緩沖液EB應在65℃水浴預熱，在吸附和洗脫時可以適當延長時間，以增加提取效率，其它步驟相同。

高純度質粒小提試劑盒（離心柱型）核酸提取