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抗原決定簇根據(jù)結(jié)構(gòu)分類2023/02/28

根據(jù)結(jié)構(gòu)，可以把表位分為構(gòu)象決定簇、線性決定簇及新抗原決定簇1、構(gòu)象決定簇在蛋白質(zhì)分子折疊時，由線性氨基酸序列的相隔離的氨基酸殘基而形成的空間構(gòu)象，稱為構(gòu)象決定簇（conformationaldeterminant）。如溶菌酶分子上的表位來自一級序列的兩個相隔離的氨基酸殘基，所以蛋白質(zhì)或者肽類抗原的抗原決定簇依賴于其一級結(jié)構(gòu)和空間結(jié)構(gòu)。2、線性決定簇蛋白質(zhì)抗原上的表位是由相鄰連續(xù)的或非連續(xù)的氨基酸序列形成的局部表面結(jié)構(gòu)。在共價序列的鄰近氨基酸殘基形成的表位稱為線性決定簇（lineardeterm

小鼠白介素ELISA試劑盒成分介紹2023/02/20

試劑盒是用于盛放檢測化學(xué)成分、藥物殘留、病毒種類等化學(xué)試劑的盒子。下面小鼠白介素ELISA試劑盒成分介紹：1、預(yù)包被板:抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化96T2、酶標(biāo)記抗體:(30倍濃縮)HRP標(biāo)記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化0.4mLx13、標(biāo)準(zhǔn)品:重組小鼠白介素-60.5mLx24、EIA緩沖液:含1%BSA,0.05%吐溫20BPS30mLx15、標(biāo)記抗體稀釋液:含1%BSA,0.05%吐溫20BPS12mLx16、顯色劑:TMB底物液15mLx17、終止液:1N硫酸12mLx

探討小鼠ELISA試劑盒加樣問題2023/02/15

ELISA試劑盒加樣時可能遇到的問題：1、過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)。2、手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間。3、加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外，血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。ELISA試劑盒相應(yīng)解決辦法：1、標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘。2、標(biāo)本為血漿：須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘。3、若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-2

單克隆化抗體特性優(yōu)勢2023/02/10

一、單克隆抗體的特性1.高度特異性。2.高度的均一性和可重復(fù)性。3.弱凝集反應(yīng)和不呈現(xiàn)沉淀反應(yīng)。4.對環(huán)境敏感性單克隆抗體越純，對溫度越敏感，對pH越敏感。低濃度的NaCl對單克隆抗體有一定的保護(hù)作用。二、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)與局限性1.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)(1)可以用相對不純的抗原，獲得大量高度特異的、均一的抗體。(2)由于單克隆抗體的高特異性和單一生物學(xué)功能，可用于體內(nèi)的放射免疫顯像和免疫導(dǎo)向治療。(3)由于可能得到“無xian量”的均一性抗體，所以適用于以標(biāo)記抗體為特點(diǎn)的免疫學(xué)分析方法，如IRMA

引起ELISA測定錯誤結(jié)果的主要原因2023/01/29

做elisa實(shí)驗(yàn)需要注意哪些問題?實(shí)驗(yàn)室需要做elisa實(shí)驗(yàn),在做的時候需要特別注意些什么問題呢?這是新手朋友都有疑惑的地方。Elisa實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該注意的問題,包括樣品稀釋、試劑盒平衡、樣品和試劑的混勻、加樣、溫育等問題。elisa試劑盒有著準(zhǔn)確性高、靈敏度高、特異性強(qiáng)的諸多優(yōu)點(diǎn),深受廣大用戶朋友的喜愛.然而,在實(shí)驗(yàn)過程中,也需要注意很多問題.對此,你需要遵守一些規(guī)則,才能更好地進(jìn)行實(shí)驗(yàn),取得較好的實(shí)驗(yàn)成果。Elisa方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定.在Elisa測定中影響因素較多,在檢測過程中

ELISA試劑盒的使用標(biāo)準(zhǔn)分享2023/01/16

ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。ELISA屬固相免疫測定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標(biāo)本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會，只有最貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程，因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA試劑盒反應(yīng)總是需要一定時間的溫育。溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用

ELISA試劑盒溫度把控2023/01/09

在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育，有人稱之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當(dāng)。溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應(yīng)動力學(xué)研究時，實(shí)驗(yàn)表明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1～2小時，產(chǎn)物的生成可達(dá)ding峰。為加速反應(yīng)，可提高反應(yīng)的溫度，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應(yīng)4℃

ELISA間接法和夾心法定性測定計算方法2023/01/05

這類反應(yīng)的定性結(jié)果可以用肉眼判斷。目視標(biāo)本也無色或近于無色者判為陰性，顯色清晰者為陽性。但在ELSIA中，正常人血清反應(yīng)后常可出現(xiàn)呈色的本底，此本底的深淺因試劑的組成和實(shí)驗(yàn)的條件不同而異，因此實(shí)驗(yàn)中必須加測陰性對照。陰性對照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判斷結(jié)果時，更宜用顯色深于陰性對照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo)。目視法簡捷明了，但頗具主觀性。在條件許可下，應(yīng)該用比色計測定吸光值，這樣可以得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標(biāo)本（sample，S）、陽性對照（P）、和陰性對照（N）的吸光值，然后進(jìn)行

分享菌種常用的兩種保存方法2022/12/13

菌種用于發(fā)酵過程作為活細(xì)胞催化劑的微生物，包括細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌四大類。來源于自然界大量的微生物，從中經(jīng)分離并篩選出有用菌種，再加以改良，貯存待用于。使優(yōu)良菌種的性狀保持穩(wěn)定，人為地創(chuàng)造條件，使菌種的新陳代謝活動處于不活潑狀態(tài)，即選取優(yōu)良菌種的休眠體(孢子或芽孢)或富有生命力的懸浮液在低溫或脫水狀態(tài)下保存。一、低溫存法：1.簡單保存法，將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時間不超過1~2個月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空

盤點(diǎn)ELISA測定操作技術(shù)要求2022/11/25

ELISA即酶聯(lián)吸附試驗(yàn)，是一種常用的固相酶免疫測定方法。ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，下面盤點(diǎn)ELISA測定操作技術(shù)要求如下：1、嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作。2、檢測前應(yīng)將試劑放置室溫平衡半小時，洗滌液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，同時觀察濃縮洗滌液中有無結(jié)晶，若有結(jié)晶應(yīng)放37℃水浴中融化后方可使用。加入底物TMB時應(yīng)注意有無顏色變化，若已顯色則可能過期或變質(zhì)，也不可使用。3、加樣后及時放入孵育箱。標(biāo)本較多時，要分批操作。按照說明書步

逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)要素分析2022/11/14

逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導(dǎo)下的DNA合成，逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)包括3大要素，分別是引物、逆轉(zhuǎn)錄酶和RNA模板：逆轉(zhuǎn)錄過程1.引物：逆轉(zhuǎn)錄引物主要有3種，包括Oligo（dT）、RandomPrimers和基因特異性引物（GSP）。其中Oligo（dT）具有12-20個T堿基，并且與真核生物mRNA的3’PolyA尾配對，可合成全長的cDNA，但僅擴(kuò)增有polyA尾的mRNA，對模板質(zhì)量要求高，較適合克隆實(shí)驗(yàn)。而RandomPrimers

影響抗原抗體反應(yīng)因素條件2022/11/07

抗原抗體反應(yīng)原理：抗原與抗體能夠特異性結(jié)合是基于抗原決定簇（表位）和抗體超變區(qū)分子間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性與親和性。抗原決定簇=表位。這種特性是由抗原、抗體分子空間構(gòu)型所決定的抗原表位和抗體超變區(qū)必須密切接觸。抗原抗體反應(yīng)的四大特點(diǎn)：特異性、可逆性、比例性、階段性。影響抗原抗體反應(yīng)因素條件:1、電解質(zhì)：抗原和抗體通常為蛋白質(zhì)分子，等電點(diǎn)分別為pH3～5和pH5～6，在中性或:弱堿性的環(huán)境中，表面均帶負(fù)電荷，適當(dāng)濃度的電解質(zhì)會使他們失去一部分負(fù)電荷而相互結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集或沉淀現(xiàn)象：在抗原抗體反應(yīng)中，

敘述細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染源2022/11/01

細(xì)胞培養(yǎng)是指將細(xì)胞從動物或植物體內(nèi)取出，然后在適宜的人工環(huán)境中生長的過程。細(xì)胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過酶或機(jī)械方法進(jìn)行解離，也可以來源于已建立的細(xì)胞系或細(xì)胞株。細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)是在細(xì)胞房中進(jìn)行，在超凈工作臺或生物安全柜中，把細(xì)胞處理好，根據(jù)需要加入細(xì)胞培養(yǎng)基，放入細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿或細(xì)胞培養(yǎng)板中，再放到帶有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)過程中如果操作不當(dāng)或者條件控制不合適容易受到化學(xué)或者生物因素的污染，常見的污染源有：1.細(xì)菌污染細(xì)菌污染是實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染，即使在細(xì)胞培

引物的合成及純化方式2022/10/24

目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺y三酯法。該方法具有高效、快速的偶聯(lián)以及起始反應(yīng)物比較穩(wěn)定的特點(diǎn)。主要是將DNA固定在固相載體上完成DNA鏈的合成，由待合成引物的3'端向5'端合成延伸，相鄰的核苷酸通過3'→5'磷酸二酯鍵連接。固相亞磷酰胺三酯法合成引物的具體步驟如下：1)用三lv乙酸去除固相載體5'-羥基的保護(hù)基團(tuán)DMT，獲得游離的5'-羥基；2)將亞磷酰胺保護(hù)核苷酸單體與活化劑四氮唑混合，得到核苷亞磷酸活化中間體，與游離的5'-羥基發(fā)生縮合反應(yīng)；3)由于無法*的5'-羥基都參與縮合，可能有極

詳細(xì)解答逆轉(zhuǎn)錄操作過程中問題2022/10/17

逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導(dǎo)下的DNA合成。在實(shí)際的操作過程中，還會有各種問題，現(xiàn)做詳細(xì)解答！1.如何提高RT-PCR反應(yīng)的靈敏度與特異性？①確定模板RNA完整性好，無DNA污染。②RNA模板中不應(yīng)含有擴(kuò)增反應(yīng)抑制劑。③使用適量的模板RNA，模板量太多會降低特異性，太少會導(dǎo)致擴(kuò)增不出條帶或條帶太弱。④若模板中有二級結(jié)構(gòu)，可通過提高逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度來提高擴(kuò)增效果。2.RNA中含有逆轉(zhuǎn)錄抑制劑時，怎么處理？逆轉(zhuǎn)錄抑制劑包括：SDS、E

ELISA標(biāo)本的處理與注意事項(xiàng)2022/10/10

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。ELISA的檢測目的是為了實(shí)驗(yàn)提供準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為了保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性，在實(shí)驗(yàn)過程中必須堅持全面的質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制，在收集標(biāo)本前都必須有一個完整的計劃。ELISA標(biāo)本的處理：1、血清：室溫血液私人凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)

詳述ELISA定性測定判斷方法2022/10/05

ELISA定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標(biāo)本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答，分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標(biāo)本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來表示反應(yīng)的強(qiáng)度，其實(shí)質(zhì)仍是一個定性試驗(yàn)。在這種半定量測定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn)，呈陽性反應(yīng)的稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽性、弱陽性具定量意義。在間接法和夾心法ELSIA中，陽性孔呈色深于陰性孔。在

細(xì)胞衰老檢測方法與步驟2022/09/26

細(xì)胞衰老是細(xì)胞在正常環(huán)境條件下發(fā)生的功能減退、逐漸趨向死亡的現(xiàn)象。衰老的細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞體積變大，呈扁平狀；細(xì)胞核變大，核膜內(nèi)陷，染色質(zhì)聚集、固縮、裂解；胞質(zhì)內(nèi)顆粒增加，有空泡形成；線粒體的數(shù)目及形狀發(fā)生改變；膜流動性降低；溶酶體內(nèi)容物增多，導(dǎo)致溶酶體酶β-半乳糖苷酶活性升高。衰老細(xì)胞所具有的上述特征成為各種細(xì)胞衰老檢測手段的依據(jù)。細(xì)胞衰老檢測方法與步驟:（1）細(xì)胞接種前在6孔培養(yǎng)板中預(yù)先放置滅菌的細(xì)胞片，每孔加入1×10E5個細(xì)胞，37℃5%CO2條件下培養(yǎng)過夜，使細(xì)胞在細(xì)胞片上生長。（2）在超

抗體的功能用途2022/09/19

抗體（英語：antibody）：病原體侵入人體后，刺激了淋巴細(xì)胞，淋巴細(xì)胞就會產(chǎn)生一種抵抗該病原體的特殊蛋白質(zhì)，叫作抗體。（免疫球蛋白不僅僅只是抗體）是一種由漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面。抗體能識別特定外來物的一個du特特征，該外來目標(biāo)被稱為抗原。一、抗體的功能抗體的主要功能是與抗原（包括外來的和自身的）相結(jié)合，從而有效地清除侵入機(jī)體內(nèi)的微生物、寄生蟲等異物，抗體（antib

細(xì)胞遷移步驟實(shí)驗(yàn)方法2022/09/13

細(xì)胞遷移即細(xì)胞劃痕法，是測定細(xì)胞遷移運(yùn)動與修復(fù)能力的方法，類似體外傷口愈合模型。在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上，用微量槍頭或其他硬物在細(xì)胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分的細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時間，取出細(xì)胞培養(yǎng)板，觀察周邊細(xì)胞是否生長至中央劃痕區(qū)，以此判斷細(xì)胞的生長遷移能力，實(shí)驗(yàn)通常需設(shè)定正常對照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等組別，通過不同分組之間的細(xì)胞對于劃痕區(qū)的修復(fù)能力，可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力。當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時，在融合的單層