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逆轉錄實驗必看重難點分享2024/03/18

逆轉錄（reversetranscription），是以RNA為模板合成DNA的過程，合成的DNA稱為cDNA。逆轉錄過程遺傳信息的流動方向為RNA到DNA，與轉錄過程DNA到RNA的方向相反，故稱為逆轉錄。一、實驗原理要素：酶促催化使RNA反轉錄為cDNA第一鏈。一條寡聚脫氧核苷酸引物先與RNA雜交，然后由RNA依賴的DNA聚合酶催化合成相應互補的cDNA拷貝，后者能進一步用于PCR擴增。依據實驗的不同目的，針對cDNA第一鏈合成的引物可根據特殊的靶基因設計，或可用隨機引物與所有mRNA雜交。

標準物質的定值及常見問題解答2024/03/11

標準物質(RM)referencematerial(RM)：是一種已經確定了具有一個或多個足夠均勻的特性值的物質或材料，作為分析測量行業中的“量具"，在校準測量儀器和裝置、評價測量分析方法、測量物質或材料特性值和考核分析人員的操作技術水平，以及在過程中產品的質量控制等領域起著重要的作用。標準物質的基本要求有以下三點：第一是穩定性，即標準物質在使用期間，其量值應該是穩定不變的；第二，均勻性，即物質各部分之間特性量值的差異不能用實驗方法檢測出來；第三，量值準確性，即標準值與真值的偏離不超過不確定度。

實驗室質量控制主要需主要方面闡述2024/03/04

為了確保檢測數據的準確可靠，以保證檢測報告的質量，在檢驗檢測工作中必須有一個質量控制的過程，必須明確質量控制各階段可能影響檢測報告的各項因素。從而對這些因素采取相應的措施加以管理和控制，以使其過程處于受控狀態。主要從實驗室環境、設備、樣品等方面進行質量控制。一、環境質量的控制1.檢測場所的環境條件應滿足檢測工作的需要，應采取措施確保實驗室的內務良好，必要時制定專門的工作程序。對影響分析檢測質量的區域加以控制，限制進入或使用該區域，并根據其特定的情況確定控制的程度。將不相容活動的相鄰區域進行有效隔

培養基的制備和性能測試分述2024/02/26

培養基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質。培養基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環節，培養基自身質量的優劣、保存是否得當、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結果的準確性。公司對微生物實驗室在培養基購置、貯存、制備、使用等方面應采取的質量控制措施進行討論，提一些建議。希望有助于微生物檢測工作的同行們更好的開展工作。干粉培養基應保存在陰涼干燥處，要避免陽光直射;未開瓶的培養基在室溫下的最長保存2年，開瓶后的干粉培養基易吸濕，應注意防潮并在6個月

ELISA實驗洗滌優化關鍵點小結2024/02/19

優化ELISA的重點之一在于洗滌。洗滌步驟可降低未結合抗體所引起的背景信號，從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結合事件被保留，在最后一步產生信號。而不充分的洗滌會導致差異和高背景，從而帶來不理想的結果。下面將為你介紹一些利用自動洗板機來洗滌ELISA平板的技巧。免疫分析，比如ELISA，一般包含兩個或以上的孵育步驟，中間以洗滌隔開。ELISA通常在96孔板中開展，其上包被了結合抗原或抗體。在封閉步驟后，包被后的平板首先與一抗或抗原孵育。隨后通過一些洗滌步驟去除未結合（低親和力）

免疫組化實驗步驟及問題解答2024/02/05

免疫組化基本原理是利用抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質)，對其進行定位、定性及定量的研究。1、脫蠟和水化：脫蠟前應將組織芯片在室溫中放置60分鐘或60℃恒溫箱中烘烤20分鐘。a、組織芯片置于二甲苯中浸泡10分鐘,更換二甲苯后在浸泡10分鐘b、無水乙醇中浸泡五分鐘c、95%乙醇中浸泡五分鐘d、75%乙醇中浸泡五分鐘2、抗原修復：用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織芯片：A、抗原熱修復a、高壓熱修復：在沸水中加

實驗室細胞貼壁問題探究2024/01/29

細胞貼壁細胞（除腫瘤細胞外）在體外培養條件下，完成貼壁后均為單層生長，原因是貼壁細胞有接觸性抑制的特點。一般認為接觸抑制是細胞間的一種識別作用，對于動物細胞的形態形成與穩定具有重要性的作用。由于貼壁細胞的一面是緊貼在培養瓶上的，如果其上方存在細胞與其相粘附，那么下方的細胞很快就會缺乏營養餓死。不貼壁的一些原因：1.胰酶消化時間把控不當：消化不夠細胞本身就是成團的；若胰酶處理太久，容易造成細胞膜蛋白損傷，使細胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強，嚴重的時候甚至會造成細胞死亡。2.缺少貼壁因子：血清中

選擇適合實驗抗體技術方法綜述2024/01/22

檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，同時在后繼試驗中也會有不同的檢測方案，因此在選擇二抗的時候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測方案的要求，其中如何根據一抗的種屬來源和類型選擇二抗尤為重要。1.一抗的種屬來源：二抗應選用與使用的一抗相同的物種來源，例如：如果你的一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是從兔血清里制備的兔源多克隆抗體，則相應的二抗需要選擇抗兔的二抗。即根據一抗的物種來源選擇相應的抗該物種的二抗。2.一抗是屬于哪個類或亞類除了要與

引物在PCR反應中幾個方面的作用歸納2024/01/15

PCR（聚合酶鏈反應）是一種常用的分子生物學技術，可用于擴增DNA序列。在PCR反應中，引物是起關鍵作用的短鏈DNA分子，它們會與待擴增DNA序列的兩端匹配，指示聚合酶在這些位置開始復制DNA。引物在PCR反應中的作用可以歸納為以下幾個方面：1.引物定義PCR擴增的目標序列：PCR擴增需要在待擴增DNA序列的兩端放置引物，引物的選擇和設計可以確保PCR擴增特定的DNA序列。引物的序列應該能夠與待擴增DNA序列的兩端互補匹配，以便在PCR反應中進行擴增。2.引物促進DNA序列的復制：一旦引物與待擴

實驗檢測結果的準確性把控詳細闡述2024/01/08

任何檢測均會產生檢測誤差，分析測試誤差來源很多，如，樣品的代表性、均勻性、穩定性。質量保證的任務就是把所有的誤差，包括：系統誤差、隨機誤差，減少到預期的水平。分析測試的質量保證可分為取樣的質量保證和分析檢測系統的質量保證兩大方面。質量保證的兩大方面取樣的質量保證：樣品是從大量物質中選取的一部分物質；樣品的測定結果是總體特性量的估計值；由于總體物質的不均勻性，用樣品的測定結果推斷總體，必然引入誤差，稱此誤差為取樣誤差；取樣誤差可分為隨機誤差和系統誤差；1、取樣的隨機誤差：由取樣過程中無法控制的隨機

酶免疫分析儀各類型的工作原理及基本結構2023/12/26

酶免疫分析(enzymeimmunoassay，EIA)是目前臨床應用最多的一類免疫分析技術，可分為非均相(或異相)酶免疫測定和均相酶免疫測定兩種方法。均相酶免疫分析法（homogeneousenzymeimmunoassay，HEI）均相酶免疫分析主要有酶擴大免疫測定技術和克隆酶供體免疫測定兩種方法。非均相酶免疫分析法（heterogeneousenzymeimmunoassay）常用的酶免疫分析法多為非均相法，又可分為液相酶免疫法和固相酶免疫法兩種，以后者常用，稱為酶聯免疫吸附測定（enzy

DNA提取試劑盒試驗必看事項2023/12/18

一、RNA和DNA提取：裂解：裂解公式可能因您要提取DNA還是RNA而異，但共同點是含有高濃度離液鹽的裂解緩沖液。Chaotropes（離液劑）的作用：Chaotrope會破壞氫鍵及疏水間的相互作用。離液鹽包括鹽酸胍、硫氰酸胍、尿素和高氯酸鋰。洗滌劑：除了離液劑外，裂解緩沖液中通常還有一些去污劑，以幫助蛋白質溶解和裂解。溶菌酶和蛋白酶K:根據樣品類型，也可以使用酶進行裂解。蛋白酶K就是其中之一，實際上在這些變性緩沖液中效果較好；當蛋白質變性增多，蛋白酶K的作用也會相應增強。然而，溶菌酶在變性中不

細胞衰老檢測具體方法2023/12/11

細胞衰老是細胞在正常環境條件下發生的功能減退、逐漸趨向死亡的現象。衰老的細胞表現為細胞體積變大，呈扁平狀；細胞核變大，核膜內陷，染色質聚集、固縮、裂解；胞質內顆粒增加，有空泡形成；線粒體的數目及形狀發生改變；膜流動性降低；溶酶體內容物增多，導致溶酶體酶β-半乳糖苷酶活性升高。衰老細胞所具有的上述特征成為各種細胞衰老檢測手段的依據。其中，對衰老相關β-半乳糖苷酶的檢測是有效檢測細胞衰老的經典方法。X-Gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）是β-半乳糖苷酶的底物，X-Gal本身無色，經

制作劃痕實驗需要注意事項2023/12/04

傷口愈合試驗，也通常稱為“劃痕試驗”，是一種廣泛建立的研究體外集體細胞遷移的技術。細胞劃痕（WoundHealing)是一種操作簡單，經濟實惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。其實驗原理是，當細胞長到融合成單層狀態時，在融合的單層細胞上人為一個空白區域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區域使“劃痕”愈合。條件好的實驗室可以使用活細胞成像來分析創傷愈合實驗中角質形成細胞或者成纖維細胞的遷移活動。結合包含的軟件分析算法，有可能延遲量化間隙表面關閉和關閉推移時間的速度。使用延時顯微鏡獲

免疫印跡(WB)實驗步驟闡述2023/11/28

WB，蛋白質印跡(Westernblotting)又稱免疫印跡(immunoblotting)，是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術，具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現已成為蛋白分析的一種常規技術。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分析。實驗步驟：一、蛋白質樣品制備原始樣品可為細胞、組織、培養上清、免疫沉淀或親和純化的蛋白，以下為定性檢測目的蛋白時細胞樣

化學成分之化學分析方法詳情2023/11/20

化學分析從大類分是指經典的重量分析和容量分析。重量分析是指根據試樣經過化學實驗反應后生成的產物的質量來計算式樣的化學組成，多數是指質量法。容量法是指根據試樣在反應中所需要消耗的標準試液的體積。容量法即可以測定式樣的主要成分，也可以測定試樣的次要成分。1、重量分析指采用添加化學試劑是待測物質轉變為相應的沉淀物，并通過測定沉淀物的質量來確定待測物的含量。2、容量分析滴定分析主要分為酸堿滴定分析、絡合滴定分析、氧化還原滴定分析、沉淀滴定分析。酸堿滴定分析是指以酸堿中和反應為原理，利用酸性標定物來滴定堿

實時定量PCR檢測結果出現異常解析2023/11/13

實時定量PCR技術（real-timePCR）也叫qPCR（QuantitavePCR），是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程，最后通過特定數學原理對未知模板進行定量分析的方法。下面對實時定量PCR檢測結果出現異常解析：1、無Ct值出現a)、檢測熒光信號的步驟有誤：一般染料法采用72℃延伸時采集，探針法則一般在退火結束時或延伸結束采集信號。b)、引物或探針降解：可通過PAGE電泳檢測其完整性。c)、模板量不足：對未知濃度的樣品應從系列稀釋樣本的最高濃度做起。

影響微生物生長因素之溫度解析2023/11/06

微生物與所處的環境之間具有復雜的相互影響和相互作用:一方面,各種各樣的環境因素對微生物的生長和繁殖有影響,另一方面,微生物生長繁殖也會影響和改變環境.研究環境因素與微生物之間的關系,可以通過控制環境條件來利用微生物有益的一面,同時防止它有害的一面。溫度是影響微生物生長的最重要因素之一。溫度對微生物的影響具體表現在：1、影響酶活性，溫度變化影響酶促反應速率，最終影響細胞合成。2、影響細胞膜的流動性，溫度高，流動性大，有利于物質的運輸，溫度低，流動性降低，不利于物質運輸，因此，溫度3、變化影響營養物

ELISA測定標本需要考慮方面2023/10/30

用于ELISA測定的標本最為常用的是血清(漿)，有時因為特定的檢測目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標本。目前使用血清標本測定的標志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物、激素、特種蛋白、細胞因子和治療藥物等。對用于激素和治療藥物測定的血清標本的收集，要注意收集時間甚或體位有可能會對測定結果產生影響。如可的松在早晨4～6點之間，會有一峰值出現：生長激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發性方式釋放，因此，在測定此類激素時，有必要在密切相連的時間間隔內采取數份血樣本，以其中

小鼠ELISA檢測試劑盒試驗標本收集事項2023/10/23

做ELISA實驗，在處理樣本前應該先了解收集樣本的注意事項。一、標本收集注意事項：1.收集血液的試管應為一次性的無熱原，無內毒素試管。2.血清和血漿避免使用溶血，高血脂標本。3.標本應清澈透明，懸浮物應離心去除。4.標本收集后若不及時檢測，需按一次使用量分裝，凍存于-20℃，-80℃電冰箱內，避免反復凍融。5.可根據標本的實際情況，做適當倍數稀釋(建議做預實驗，以確定稀釋倍數)。6.收集標本，盡量做到雙份的用量，避免一次實驗失敗，重復實驗時標本缺失，從而耽誤實驗進程。7.收集標本時，應該做好防護