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ELISA實驗加樣注意點2022/09/05

ELISA實驗加樣注意點如下：1、標(biāo)本為血清：最好將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。2、加樣后及時放入孵箱。3、加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。4、如果采用AT或其他全自動加樣，最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。5、標(biāo)本較多時，請分批操作。6、血清樣

抗原的兩種特性分享2022/08/30

抗原（antigen），是指能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生（特異性）免疫應(yīng)答，并能與免疫應(yīng)答產(chǎn)物抗體和致敏淋巴細(xì)胞在體內(nèi)外結(jié)合，發(fā)生免疫效應(yīng)（特異性反應(yīng)）的物質(zhì)。抗原的基本性質(zhì)具有異物性、大分子性和特異性。異物性是指進(jìn)入機(jī)體組織內(nèi)的抗原物質(zhì)，必須與該機(jī)體組織細(xì)胞的成分不相同。抗原的特性：根據(jù)抗原的概念可以看出抗原有兩種特性1、免疫原性（immunogenicity）即抗原刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的過程。該過程包括：抗原進(jìn)入機(jī)體后，刺激淋巴細(xì)胞活化、增殖、分化，產(chǎn)生抗體或致敏的效應(yīng)淋巴細(xì)胞。2、反應(yīng)原性（r

介紹選擇流式抗體技巧2022/08/22

流式抗體本身也是抗體，所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇最基本的條件：目標(biāo)蛋白特異性，反應(yīng)種屬以及應(yīng)用實驗。流式抗體能夠在短時間內(nèi)檢測分析或分選大量細(xì)胞，在血液學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、藥物學(xué)等領(lǐng)域中的應(yīng)用越來越廣泛。其純度、批次穩(wěn)定性、特異性，以及流式結(jié)果的可重復(fù)性備受重視。流式抗體熒光標(biāo)記的方式包括直接標(biāo)記和間接標(biāo)記兩種。在流式實驗過程中，盡量減少實驗工序和過程，以保證實驗的真實和準(zhǔn)確性。因此在條件允許的范圍內(nèi)，建議盡量用直接標(biāo)記的抗體進(jìn)行實驗而不去做間接標(biāo)記。隨著流式細(xì)胞術(shù)的日益發(fā)展，流式抗體及

移液器的使用方法及注意事項2022/08/15

介紹下可調(diào)式自動取液器的具體操作方法：用拇指和食指旋轉(zhuǎn)取液器上部的旋鈕，使數(shù)字窗口出現(xiàn)所需容量體積的數(shù)字，在取液器下端插上一個塑料吸頭，并旋緊以保證氣密，然后四指并攏握住取液器上部，用拇指按住柱塞桿頂端的按鈕，向下按到第一停點，將取液器的吸頭插入待取的溶液中，緩慢松開按鈕，吸上液體，并停留1～2秒鐘。移液器的使用方法：1.設(shè)定移液體積：從大量程調(diào)節(jié)至小量程為正常調(diào)節(jié)方法，逆時針旋轉(zhuǎn)刻度即可；從小量程調(diào)節(jié)至大量程時，應(yīng)先調(diào)至超過設(shè)定體積刻度，再回調(diào)至設(shè)定體積，這樣可以保證移液器的精確度。2.裝配移

解析逆轉(zhuǎn)錄實驗中操作問題2022/08/01

逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）實驗作為是常見的分子生物學(xué)實驗之一，逆轉(zhuǎn)錄是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導(dǎo)下的DNA合成，逆轉(zhuǎn)錄實驗包括3大要素，分別是引物、逆轉(zhuǎn)錄酶和RNA模板。雖然看上去步驟簡單，但是逆轉(zhuǎn)錄實驗中實際操作時常出現(xiàn)問題如下：1.如何提高RT-PCR反應(yīng)的靈敏度與特異性？①確定模板RNA完整性好，無DNA污染。②RNA模板中不應(yīng)含有擴(kuò)增反應(yīng)抑制劑。③使用適量的模板RNA，模板量太多會降低特異性，太少會導(dǎo)致擴(kuò)增不出條帶或條帶太弱。④若模板中有二級結(jié)構(gòu)

IHC常用酶標(biāo)二抗原理及特點2022/07/25

免疫組化（IHC）是利用抗原與抗體的特異性結(jié)合原理和特殊的標(biāo)記技術(shù)，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體顯色，對組織細(xì)胞內(nèi)的特異性抗原進(jìn)行定位、定性、定量檢測的一門技術(shù)。本文主要總結(jié)二抗原理及其特點，以提供更好的選擇。IHC常用酶標(biāo)二抗原理圖1.SABC法原理：SABC法是利用鏈酶親和素(Streptavidin)與生物素(Biotin)*的高度親和力這一生物學(xué)性質(zhì)，先將生物素與辣根過氧化物酶(HRP)結(jié)合，形成生物素化HRP，然后與鏈酶親和素按一定比例混合，形成SABC復(fù)合物。用生物素化二抗與第一抗體結(jié)合，

詳解PCR反應(yīng)條件的選擇2022/07/18

PCR反應(yīng)條件為溫度、時間和循環(huán)次數(shù)。溫度與時間的設(shè)置：基于PCR原理三步驟而設(shè)置變性-退火-延伸三個溫度點。在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結(jié)合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對于較短靶基因（長度為100～300bp時）可采用二溫度點法，除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一，一般采用94℃變性，65℃左右退火與延伸（此溫度TaqDNA酶仍有較高的催化活性）。1、變性溫度與時

ELISA組織樣本處理方法2022/07/05

用ELISA進(jìn)行檢測的樣本類型包括常見的血液（血清、血漿），組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰道分泌物等，這些樣本收集的時間、處理方法和保存都會影響到ELISA實驗的結(jié)果。下面就常見ELISA組織樣本處理方法的整理，希望對您有所幫助。組織樣本一般是制成組織勻漿，處理方法如下:1、取適量組織塊，于預(yù)冷PBS（0.02mol/L,pH7.0-7.2）中清洗去除血液，稱重后備用（組織塊較大需先剪碎后再勻漿）；2、可同

論述PCR反應(yīng)條件的控制2022/06/28

PCR反應(yīng)條件為溫度、時間和循環(huán)次數(shù)。溫度與時間的設(shè)置：基于PCR原理三步驟而設(shè)置變性-退火-延伸三溫度點。在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結(jié)合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對于較短靶基因（長度為100～300bp時）可采用二溫度點法，除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一，一般采用94℃變性，65℃左右退火與延伸（此溫度TaqDNA酶仍有較高的催化活性）。PCR反應(yīng)條件的控

區(qū)分三種組成物質(zhì)化學(xué)成分不同細(xì)胞培養(yǎng)基2022/06/21

細(xì)胞培養(yǎng)基是人工模擬細(xì)胞在體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境，是提供細(xì)胞營養(yǎng)和促進(jìn)細(xì)胞生長增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基的含義幾乎相同，英文都是medium。當(dāng)它是粉劑時，傾向性地稱為培養(yǎng)基，而將粉劑配成液體后，多稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常常補(bǔ)加血清、抗生素等成分。根據(jù)對培養(yǎng)基組成物質(zhì)的化學(xué)成分是否*了解來區(qū)分，可以將培養(yǎng)基分為：天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基。1、天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基是指利用各種動、植物或微生物的原料，其成分難以確切知道。用作這種培養(yǎng)基的主要原料有：牛肉膏、麥芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麩

傳代培養(yǎng)實驗操作步驟2022/06/14

實驗原理:傳代培養(yǎng)是組織培養(yǎng)常規(guī)保種方法之一。也是幾乎所有細(xì)胞生物學(xué)實驗的基礎(chǔ)。當(dāng)細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中長滿后就需要將其稀釋分種成多瓶，細(xì)胞才能繼續(xù)生長。這一過程就叫傳代。傳代培養(yǎng)可獲得大量細(xì)胞供實驗所需。傳代要在嚴(yán)格的無菌條件下進(jìn)行，每一步都需要認(rèn)真仔細(xì)的無菌操作。傳代培養(yǎng)實驗操作步驟:1.入無菌室之前用肥皂洗手，用75%酒精擦拭消毒雙手。2.倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，確定細(xì)胞是否需要傳代及細(xì)胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液置37℃下預(yù)熱。3.超凈臺臺面應(yīng)整潔，用0.1%新潔爾滅溶液擦凈。4.打開超凈臺的

解讀微生物菌種活化方式2022/06/07

菌種活化就是將保藏狀態(tài)的菌種放入適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，逐級擴(kuò)大培養(yǎng)是為了得到純而壯的培養(yǎng)物，即獲得活力旺盛的、接種數(shù)量足夠的培養(yǎng)物。菌種發(fā)酵有一般需要2-3代的復(fù)壯過程，因為保存時的條件往往和培養(yǎng)時的條件不相同，所以要活化,讓菌種逐漸適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境。要明白菌種活化的情況就需要了解菌種保藏的方式和方法。目前國際國內(nèi)常用的菌種保存方法包括：定期移植法、液體石蠟法、沙土管法、真空冷凍干燥法、80℃冰箱凍結(jié)法、液氮超低溫凍結(jié)法。對于不同的保存方式活化的方式也不同：1、定期移植法的菌種復(fù)蘇較簡單，直接轉(zhuǎn)接即可

解決PCR產(chǎn)物中出現(xiàn)假陰性或無擴(kuò)增產(chǎn)物2022/05/23

解決PCR產(chǎn)物中出現(xiàn)假陰性或無擴(kuò)增產(chǎn)物（即陽性對照中有條帶，而樣品則無條帶）方法：1、條帶放置時間過久,核酸被降解，最好在48h內(nèi)進(jìn)行電泳檢測。2、DNA模板純度低，如含有雜蛋白質(zhì)或Taq酶抑制劑，可對DNA進(jìn)行再次純化或重新用優(yōu)質(zhì)試劑盒提取DNA;DNA濃度太低時，可以加大模板量；對具有二級結(jié)構(gòu)DNA使用較好的聚合酶；提取DNA時，避免吸入酚類試劑。3、對設(shè)計不合理的引物進(jìn)行重新設(shè)計合成；引物應(yīng)高濃度小量分裝保存，防止多次凍融而降解失效；檢測引物OD值并進(jìn)行電泳檢測以確保兩條引物濃度一致。4、

了解細(xì)胞系用途2022/05/18

細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)首ci傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體，也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。現(xiàn)在細(xì)胞系廣泛的應(yīng)用于科學(xué)研究和藥物，用途包括：1、科學(xué)研究：藥物研究開發(fā)與基礎(chǔ)研究藥物研究與開發(fā)（1）新藥篩選：如化學(xué)合成藥物藥效研究、中藥有效成分篩選與鑒定等。（2）疫苗研究與開發(fā)：如病毒性疫苗的研究與開發(fā)（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、腫瘤疫苗(多肽疫苗)等。（3）基因工程藥物研究與開發(fā)：如干擾素研究與開發(fā)，細(xì)胞生長因子研究與開發(fā)等。（4）細(xì)胞工程藥物研究與開發(fā)：生物活性多肽研究與開發(fā)，人參皂甙、紫杉醇

簡述大鼠褪黑素ELISA試劑盒使用指南2022/05/09

大鼠褪黑素ELISA試劑盒使用指南：1．試劑盒從冷藏箱里取出后放在常溫環(huán)境下15-30分鐘后再使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可以放在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3．每一步步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間*控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，*做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)

ELISA試劑盒使用技巧大集合2022/05/05

ELISA試劑盒使用技巧大集合：1.洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。2.吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。3.要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，又能反映出試劑盒的精密度。4.為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。5.未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請于2-8℃保存。辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復(fù)使用

原代細(xì)胞培養(yǎng)實驗步驟2022/04/24

原代細(xì)胞培養(yǎng)實驗步驟：1、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。2、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。3、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。4、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。5、大腦皮質(zhì)放于DMEM中(含慶大霉素和谷氨酰胺)，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05

活性蛋白試劑盒提取操作步驟2022/04/19

本試劑盒用于從哺乳動物組織和培養(yǎng)細(xì)胞中提取具有活性的全蛋白，用含有蛋白酶抑制劑及磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液LysisBuffer勻漿裂解組織或細(xì)胞，作用溫和，提取過程簡便。獲得的全蛋白可用于WesternBlot、免疫共沉淀和酶的活性的測定的等后續(xù)研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本試劑盒中包括這兩種酶的抑制劑。應(yīng)用方面：可用于WesternBlot、免疫共沉淀和酶活性測定等后續(xù)研究。操作步驟Ⅰ、實體組織蛋白的提取1、在每mL冷LysisBuffer加入10μL磷酸酶抑制劑，1μ

支原體污染細(xì)胞常用清除方法2022/04/13

支原體污染細(xì)胞后，有必要清除支原體，常用方法有：1、對于非重要的細(xì)胞，如培養(yǎng)中的細(xì)胞、WCB的細(xì)胞等，將培養(yǎng)物與用過的培養(yǎng)基滅活后丟棄即可。對于較為重要的細(xì)胞，如來源珍貴或?qū)嶒炇抑屑?xì)胞保藏量較小等可以采用以下（2）-（8）的方法。2、用MRA處理：用支原體清除劑（MycoplasmaRemovalAgent）處理細(xì)胞，作用濃度為25μg/ml，兩周可以清除支原體。3、用清洗純化法清除支原體污染的方法：細(xì)胞營養(yǎng)馴化→優(yōu)質(zhì)細(xì)胞群的篩選→細(xì)胞清洗→反復(fù)離心洗滌，其原理是利用離心力、細(xì)胞、微生物質(zhì)量和懸

PCR產(chǎn)物跑不出來條帶原因參考2022/03/23

PCR是分子生物學(xué)的常規(guī)和常用手段，用途很多，但是都是通過擴(kuò)增目的基因片段來實現(xiàn)的。那么，首先需要搞明白的是，需要擴(kuò)增的基因片段大小是多大，因為不同大小的基因片段其擴(kuò)增的難度是有差異的，尤其過長的片段，需要使用不同的taq酶來進(jìn)行擴(kuò)增（比如LAtaq）。幾點容易發(fā)生問題的地方供參考：1.引物，PCR是基于引物來實現(xiàn)的。引物是否是自己設(shè)計的？如果是，需要檢查一下引物設(shè)計的是否合理。如果是從文獻(xiàn)中選取的，一般出問題的可能性不大，不放心的可以在數(shù)據(jù)庫比對一下，防止文獻(xiàn)出錯。2.模板，一般來講通過試劑盒