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質(zhì)粒提不出和得率較低的原因分析2023/11/16

質(zhì)粒提不出和得率較低的原因1)大腸桿菌老化：請涂布平板培養(yǎng)后，重新挑選新菌落進行液體培養(yǎng)。2)質(zhì)?？截悢?shù)低：由于使用低拷貝數(shù)載體引起的質(zhì)粒DNA提取量低，可更換具有相同功能的高拷貝數(shù)載體。3)菌體中無質(zhì)粒：有些質(zhì)粒本身不能在某些菌種中穩(wěn)定存在，經(jīng)多次轉(zhuǎn)接后有可能造成質(zhì)粒丟失。例如，柯斯質(zhì)粒在大腸桿菌中長期保存不穩(wěn)定，因此，不要頻繁轉(zhuǎn)接，每次接種時應(yīng)接種單菌落，另外，檢查篩選用抗生素使用濃度是否正確。4)堿裂解不充分：使用過多菌體培養(yǎng)液，會導(dǎo)致菌體裂解不充分。5)吸附柱過載：不同產(chǎn)品中吸附柱吸附能

大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取步驟2023/11/16

質(zhì)粒DNA的提取是從事基因工程工作中的一項基本實驗技術(shù)，但提取方法有很多種，以下介紹一種最chang用的方法：堿裂解法：此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取，提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。方法如下：1、接1%含質(zhì)粒的大腸桿菌細胞于2mlLB培養(yǎng)基。2、37℃振蕩培養(yǎng)過夜。3、取1.5ml菌體于Ep管，以4000rpm離心3min，棄上清液。4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖，50mM/LEDTApH8.0，25mM/LTris-HClpH8.0)充分混合。5、加入0.2m

如何用細菌培養(yǎng)皿來檢測細菌？2023/11/15

怎么用培養(yǎng)皿培養(yǎng)細菌1.將培養(yǎng)皿清洗干凈，用牛皮紙或紗布包裹后，于高壓滅菌器中121℃30分鐘滅菌待用。2.將樣品用無菌生理鹽水溶解，將稀釋液1ml注入培養(yǎng)皿中，倒入已經(jīng)滅菌好的培養(yǎng)基，待凝固。3.將培養(yǎng)皿置36℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3天，觀察培養(yǎng)基中生長的菌落。細菌和真菌的分布作為自然界中微生物的細菌和真菌是我們?nèi)庋劭床灰姷?，必須借助于一定的器械（顯微鏡），但是它們又是無處不在的。未了弄清楚它們的分布情況，特進行探究：1、實驗中要選取五套培養(yǎng)皿進行實驗，一個做為對比，另外四個用來培養(yǎng)不同環(huán)境中

液體培養(yǎng)基中細菌培養(yǎng)實驗步驟2023/11/15

實驗步驟一、過夜培養(yǎng)1.將5ml預(yù)熱的液體培養(yǎng)基移入一無菌的16mm或18mm管中。2.用接種環(huán)挑一個單菌落，浸沒于培養(yǎng)液中并輕輕振動接種環(huán)，使待接種的細菌分散在培養(yǎng)液中。3.蓋好試管，在搖床或轉(zhuǎn)鼓式培養(yǎng)裝置上以60r/min速度，于37°C培養(yǎng)至飽和（1X109~2X109細胞/ml，6h）。二、大體積培養(yǎng)1.在一無菌的Erlenmeyer或baffle瓶中，用新鮮預(yù)熱的培養(yǎng)液按I1:100的比例稀釋過夜培養(yǎng)物，燒瓶的體積應(yīng)該是培養(yǎng)液體積的5倍以上。如果不搖動培養(yǎng)，所用燒瓶的體積應(yīng)比培養(yǎng)液體積

沙門氏菌檢驗中血清學(xué)試驗常見問題解答2023/11/14

沙門氏菌的理化性質(zhì)：生化反應(yīng)很活潑，能分解多種糖類和醇。培養(yǎng)特性1）需氧及兼性厭氧菌。2）在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長良好，培養(yǎng)24h后，形成中等大小、圓形、表面光滑、無色半透明、邊緣整齊的菌落，其菌落特征亦與大腸桿菌相似（無糞臭味）。3）鑒別培養(yǎng)基（麥康凱、SS、伊紅美藍）：一般無色菌落。4）三糖鐵瓊脂斜面：斜面為紅色，底部變黑并產(chǎn)氣。生化特性1）發(fā)酵葡萄糖，麥芽糖，甘露醇和山梨醇產(chǎn)氣；2）不發(fā)酵乳糖、蔗糖和側(cè)金盞花醇；3）不產(chǎn)吲哚、V-P反應(yīng)陰性；4）不水解尿素和對苯丙氨酸不脫氨。傷寒沙門氏菌、雞

蛋白質(zhì)糖基化位點檢測實驗步驟2023/11/14

蛋白質(zhì)糖基化位點檢測：用酶或化學(xué)脫糖基化、通過選擇性標記或通過凝集素親和層析法是檢測蛋白糖基化常用方法。一、用PNGaseF（N-多糖酶）處理。1.以0.1mol/L磷酸鈉（或Tris-HCl，而不用檸檬酸）緩沖液，pH7.4(7.0~8.0)配制高達2mg/ml的蛋白溶液，并含50mmol/Lβ-巰基乙醇和0.1%SDS，在水浴中煮沸2分鐘。2.加1/10體積的10%NP-40溶液（或使SDS濃度少于或等于0.17%，NP-40：SDS的質(zhì)量比在終反應(yīng)中至少是7:1)。3.加PNGaseF到終

淺談一下動物細胞培養(yǎng)的原理2023/11/13

動物細胞培養(yǎng)是指細胞在體外條件下的生長，動物細胞在培養(yǎng)的過程中不再形成組織。從動物機體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。用途指動物、(包括哺乳動物、昆蟲、魚類、禽類等)細胞在體外的培養(yǎng)技術(shù)，即在無菌條件下，從機體中取出組織或細胞，模擬體內(nèi)正常生理狀態(tài)下生存的基本條件，讓它在培養(yǎng)器皿中繼續(xù)生存、生長和繁殖的方法。體外培養(yǎng)的細胞可分為原代細胞和傳代細胞。動物細胞培養(yǎng)給細胞生物學(xué)的研究帶來了極大的方便，解決了以人的活細胞材料作為研究對象或研究工具的問題

PH測量一定要標定校準嗎？2023/11/13

pH測量通常有比色法（pH試紙或比色皿）和電極法二種。比色法當然不要標定，而電極法就一定要標定，因為電極法pH測量就是將未知溶液與已知pHs值的標準溶液在測量電池中作用比較測定，這是電極法pH測量的“操作定義”所決定的。pH計因電計設(shè)計的不同而類型很多，其操作步驟各有不同，因而pH計的操作應(yīng)嚴格按照其使用說明書正確進行。在具體操作中，校準是pH計使用操作中的一重要步驟。盡管pH計種類很多，但其校準方法均采用兩點校準法，即選擇兩種標準緩沖液：一種是pH7標準緩沖液，第二種是pH9標準緩沖液或pH4

PCR基因擴增原理和基本程序2023/11/10

基因擴增技術(shù)（PCR）聚合酶鏈反應(yīng)（polymerasechainreaction簡稱PCR）又稱無細胞分子克隆系統(tǒng)或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增法，是基因擴增技術(shù)的一次重大革新?？蓪O微量的靶DNA特異地擴增上百萬倍，從而大大提高對DNA分子的分析和檢測能力，能檢測單分子DNA或?qū)γ?0萬個細胞中僅含1個靶DNA分子的樣品，因而此方法立即在分子生物學(xué)、微生物學(xué)、醫(yī)學(xué)及遺傳學(xué)等多領(lǐng)域廣泛應(yīng)用和迅速發(fā)展。由于PCR具有敏感性高、特異性強、快速、簡便等優(yōu)點，已在病原微生物學(xué)領(lǐng)域中顯示出巨大的

標準物質(zhì)常見種類簡單介紹2023/11/10

標準物質(zhì)RM（referencematerial）是具有準確量值的測量標準，是具有一種或多種足夠均勻并已確定特性值的，用于校準設(shè)備、評價測量方法或給材料賦值的材料或物質(zhì)。應(yīng)用于化學(xué)測量、生物測量、工程測量、無力測量等領(lǐng)域。有證標準物質(zhì)CRM（certifiedreferencematerial）是附有證書的標準物質(zhì)，用建立了溯源性的程序來確定其一種或多種特性值，使之可溯源到準確復(fù)現(xiàn)的用于表示該特性值的計量單位，而且每個標準值都附有給定置信水平的不確定度。其證書是介紹標準物質(zhì)的技術(shù)文件，是研制者/

纖維蛋白vs纖維蛋白原，一字之差的區(qū)別2023/11/09

1、定義纖維蛋白：是人類發(fā)現(xiàn)最早的一種凝血因子，呈伸長的橢球體，是由三對多肽鏈（一對α鏈、一對β鏈、一對γ鏈）以二硫鍵連接而成的二聚物，在肝臟中合成后進入血漿，以溶解形式存在。纖維蛋白原：是一種蛋白質(zhì)，能夠溶解于水，是一種由肝臟合成的具有凝血功能的蛋白質(zhì)，是凝血過程、血栓形成過程中的重要物質(zhì)。2、來源纖維蛋白：是一種高度不溶的蛋白質(zhì)多聚體，是象細針一樣的晶狀物。是纖維蛋白原在生理條件下凝固而成的一種材料。纖維蛋白原：是在凝血過程中，凝血酶切除血纖蛋白原中的血纖肽A和B而生成的單體蛋白質(zhì)。3、成因

培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿滅菌方法介紹2023/11/09

為了避免雜菌污染，獲得微生物純培養(yǎng)物，培養(yǎng)基必須及時嚴格滅菌。通常采用高壓蒸汽滅菌。一般培養(yǎng)基用0.IMPa(121℃)維持15~30min即可徹di滅菌。長時間的高溫滅菌會使某些不耐熱的物質(zhì)破壞，如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖。因此，含糖培養(yǎng)基常用0.05MPa(110℃)滅菌20~30min某些對糖類要求更高的培養(yǎng)基，可先將糖過濾除菌或間歇滅菌，再與其他已滅菌的成分混合。長時間高溫滅菌也會使磷酸鹽、碳酸鹽與鈣、鎂鐵等陽離子形成難溶性化合物而產(chǎn)生沉淀。為了防止這類沉淀發(fā)生，可將這些物質(zhì)分別滅菌，

DNA和RNA提取原理都在這里了！2023/11/08

TRIzol試劑有多組分分離作用,與其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚／SDS法、鹽酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特點是可同時分離一個樣品的RNA\DNA\蛋白質(zhì)．TRIzol使樣品勻漿化，細胞裂解，溶解細胞內(nèi)含物，同時因含有RNase抑制劑可保持RNA的完整性。在加入lv仿離心后，溶液分為水相和有機相，RNA在水相中。取出水相用異丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中間層可回收DNA；用異丙醇沉淀有機相可回收蛋白質(zhì)。TRIzol試劑可用于小量樣品（50-100mg組織、5×106細胞）也適用于大量樣品（

組織RNA提取和培養(yǎng)細胞RNA提取總結(jié)2023/11/08

一.組織RNA提取1.最好新鮮組織，這樣RNA提取的效果比較好，這是肯定的。2.如果不是新鮮的（最好在半年之內(nèi)，-80℃或者液氮中凍存的）組織，注意不要反復(fù)凍融，從冰凍狀態(tài)拿到0-4℃，注意不要拿到常溫，待組織解凍后，用DEPC泡過的剪刀剪一小塊組織，稱重后，放到預(yù)冷的勻漿器中，然后加入一定量的TRIZOL試劑，然后勻漿。注意：速度不要太快，要勻一會挺一會，否則由于摩擦產(chǎn)熱，RNA遇熱會加速降解。如果一次做多個標本的RNA提取，也要這樣做，更不能急。后面的步驟和細胞RNA提取一樣。二.培養(yǎng)細胞的

常用的分子生物學(xué)技術(shù)簡單介紹2023/11/07

分子生物學(xué)是指在分子水平上研究生命現(xiàn)象的科學(xué)，從生物大分子(核酸、蛋白質(zhì))的結(jié)構(gòu)、功能和生物合成等方面來闡明各種生命現(xiàn)象的本質(zhì)。研究內(nèi)容包括各種生命過程，如光合作用、發(fā)育的分子機制、神經(jīng)活動的機理、癌的發(fā)生等。生物大分子，特別是蛋白質(zhì)和核酸結(jié)構(gòu)功能的研究，是分子生物學(xué)的基礎(chǔ)。分子生物學(xué)技術(shù)：PCR、分子克隆、核酸電泳、瓊脂糖凝膠電泳測序、DNA，RNA提取、轉(zhuǎn)化外源DNA、體外轉(zhuǎn)錄、逆轉(zhuǎn)錄、cDNA文庫構(gòu)建、原位雜交、酵母雙雜交、差減雜交、扣除雜交、藍白斑篩選、抗生素篩選、基因工程技術(shù)大部分都是

高純試劑用途盒純度表示介紹2023/11/07

高純試劑簡介高純試劑是反映化學(xué)試劑純度高低的一個類別概念，它表示，該試劑中起干擾作用離子的相對量很少；該試劑可以被用于一般的定量分析實驗。比如，色譜用的乙腈，是一種高純試劑。用途高純試劑通常應(yīng)用于，例如針對色譜使用的色譜純試劑、針對光譜使用的光譜純試劑。此外，電路、液晶等領(lǐng)域都有各自行業(yè)標準的高純試劑。但是高純試劑通常不使用在分析純試劑使用的領(lǐng)域，如配制標準溶液、滴定劑等，高純的單質(zhì)例外。純度表示不同行業(yè)使用的高純試劑有各自的標注方式，通用的標注是用9的數(shù)目來表示。例如，純度為99.999%，含

細胞中的DNA合成途徑分析2023/11/06

細胞中的DNA合成有兩條途徑：一條途徑是生物合成途徑（“D途徑”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，為DNA分子的合成提供原料。在此合成過程中，葉酸作為重要的輔酶參與這一過程，而HAT培養(yǎng)液中氨基蝶呤是一種葉酸的拮抗物，可以阻斷DNA合成的“D途徑”。另一條途徑是應(yīng)急途徑或補救途徑（“S途徑”），它是利用次黃嘌呤—鳥嘌呤磷酸核苷轉(zhuǎn)移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相應(yīng)的核苷酸，兩種酶缺一不可。因此，在HAT培養(yǎng)液中，未融合的效應(yīng)B細胞和兩個效應(yīng)B細

組蛋白的分類及功能簡單介紹2023/11/06

組蛋白是構(gòu)成真核生物染色體的基本結(jié)構(gòu)蛋白，富含帶正電荷的Arg和Lys等堿性氨基酸，等電點一般在pH10.0以上，屬堿性蛋白質(zhì)，可以和酸性的DNA緊密結(jié)合，而且一般不要求特殊的核苷酸序列。用聚丙烯酰胺凝膠電泳可以區(qū)分5種不同的組蛋白：H1、H2A、H2B、H3和H4。幾乎所有真核細胞都含有這5種組蛋白，而且含量豐富，每個細胞每種類型的組蛋白約6×10個分子。5種組蛋白在功能上分為兩組：①核小體組蛋白。包括H2A、H2B、H3和H4。這4種組蛋白有相互作用形成復(fù)合體的趨勢，它們通過C端的疏水氨基酸

細胞融合實驗看這篇就夠了2023/11/03

細胞融合(cellfusion)，細胞遺傳學(xué)名詞，是在自發(fā)或人工誘導(dǎo)下，兩個細胞或原生質(zhì)體融合形成一個雜za種細胞?；具^程包括細胞融合形成異核體(heterokaryon)、異核體通過細胞有絲分裂進行核融合、最終形成單核的雜za種細胞。細胞融合可作為一種實驗方法被廣泛適用于單克隆抗體的制備，膜蛋白的研究。細胞融合實驗所需試劑：（1）胎牛血清或小牛血清（2）培養(yǎng)基：細胞融合常用的培養(yǎng)液有DMEM、RPMI1640及無血清培養(yǎng)基等。DMEM有高糖（4500mg／L）及低糖（1000mg／L）之分。

冰凍切片免疫熒光實驗步驟2023/11/03

冰凍切片免疫熒光實驗步驟1、冰凍切片固定冰凍切片37℃烘烤10至20分鐘，控干水分，置于4%多聚甲醛固定30min。于PBS緩沖液中晃動洗滌3次，每次5分鐘。2、抗原修復(fù)將切片浸沒在升滿EDTA抗原修復(fù)緩沖液（PH8.0）的修復(fù)盆中，置于微波爐內(nèi)進行抗原修復(fù)，修復(fù)條件：中火8min至沸——?；?min保溫——中低火7min（整個過程需防止修復(fù)液過度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后，將切片置于PBS緩沖液中。然后在搖床上，晃動洗滌3次，每次5min。3、畫圈血清封閉切片稍甩干后，用組化筆在組織周圍畫圈，