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抗生素的特性與作用機理介紹2022/08/30

抗生素（antibiotics）是由微生物（包括細菌、真菌、放線菌屬）或高等動植物在生活過程中所產生的具有抗病原體或其它活性的一類次級代謝產物，能干擾其他生活細胞發育功能的化學物質。現臨床常用的抗生素有轉基因工程菌培養液液中提取物以及用化學方法合成或半合成的化合物。抗生素是細菌、霉菌或其他微生物的代謝產物或人工合成的類似物，通俗地講，抗生素就是用于治療各種細菌感染或抑制致病微生物感染的藥物。其主要用途是抑制其他種類微生物的生長（抑菌作用）或將它們殺死（殺菌作用），一般情況下對其宿主不會產生嚴重的

雜交瘤細胞原代培養過程2022/08/22

雜交瘤細胞原代培養過程：1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺內，固定在泡沫板上。2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開皮膚一個橫切口，將皮膚向上撕開，然后剪開肌肉等，暴露出腹腔，在左側找到脾臟，用彎頭眼科鑷取出脾臟，置于無菌培養皿中。3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無用的組織。4.將篩網置于平皿中，脾臟置于篩網上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網上進行碾磨，同時不停滴加不含血清的培養液沖洗。5.將碾磨好的細胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。6.加入10

WB實驗檢測結果背景過高原因分析2022/08/15

WesternBlot（WB）又名WesternBloting、Western、蛋白質印跡法、免疫印跡試驗，WesternBlot基本原理：首先利用SDS-PAGE對蛋白質樣品進行分離，然后轉移到固相載體上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。轉移后的膜就稱為一個印跡（blot）,用于對蛋白質的進一步檢測。印跡首先用蛋白溶液處理以封閉膜上剩余的疏水結合位點，而后用所要研究的蛋白質的抗體（一抗）處理，印跡中只有待研究的蛋白質與一抗特異結合形成抗原抗體復合

提取到質量良好的RNA方法技術2022/08/08

提取到質量良好的RNA（包括總RNA和mRNA，以下同），概括起來有兩種方法，總結如下：1、檢測RNA溶液的吸光度280、320、230、260nm下的吸光度分別代表了核酸、背景（溶液渾濁度）、鹽濃度和蛋白等有機物的值。一般的，我們只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0時，我們認為RNA中蛋白或者時其他有機物的污染是可以容忍的，不過要注意，當你用Tris作為緩沖液檢測吸光度時，R值可能會大于2（一般應該是2.2時，說明RNA已經水解成單核酸了。如果RNA的量夠，可在260nm

介紹抗體的保存2022/08/01

抗體的保存方法一般會直接影響抗體的活性和使用效果。在保存得當的情況下，大部分抗體可以存放數月甚至數年，一般情況需嚴格按照抗體說明書來進行保存。一、抗體保存溫度和條件：1、抗體收到后，需在12000rpm離心1~5分鐘，再打開管蓋進行分裝和保存，如果抗體體積不足50ul，可延長離心時間至5分鐘，從而確保抗體全部離心下來。2、對于多數抗體而言，分裝成小等份并凍存于-20℃或-80℃是不錯之選。腹水形式的產品收到后需立即凍存，因為該類產品含有大量的蛋白酶，長期在置于4℃條件會導致抗體的降解。分裝成小等

PCR對照試驗結果好卻沒回收到目的片段參考見解2022/07/25

PCR對照試驗一般都會加陰性對照，陽性對照。如果你只想檢控PCR操作及擴增，就加水作為陰性對照，陽性質粒或者DNA作為陽性對照。如果你想監控整個核酸提取過程，及PCR過程的話，那就從核酸提取開始，就將水作為陰性樣本做對照，含模板DNA的菌或者病毒或者組織作為陽性對照。然而，PCR對照試驗結果好卻沒回收到目的片段參考見解：1、連接用室溫保溫1小時，能滿足大多數克隆，為提高效率，需4oC過夜。2、插入片段帶有污染，使3`-T缺失，或抑制連接，抑制轉化。為此，將插入片段和pGEM-T正對照混合，再連接

正確溶解與稀釋ELISA標準品了解下2022/07/18

標準品是ELISA實驗成功與否的關鍵點。正確溶解、稀釋標準品尤其重要，以下一起了解下：1.粉末標準品短暫離心，讓因運輸沾到管蓋、管壁的標準品沉到管底。2.根據瓶標簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解10-30min，讓粉末*溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋白未溶解，槍頭帶出部分蛋白，待*溶解后可吹吸或渦旋振蕩混勻。3.標準品梯度稀釋:（1）標準品稀釋液的選擇：若血清、血漿、組織勻漿樣本，用試劑盒中的標準品稀釋液，梯度稀釋標準品。若細胞上清樣本，建議用細胞培養基梯度稀

ELISA試劑盒檢測血清使用說明2022/07/05

ELISA試劑盒檢測血清使用說明大部分elisa檢測均以血清為標本。血清標本可按慣例方法收集，應留意防止溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為符號的ELISA測定中，溶血標本可能會添加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，?菌體中可能含有內源性HRP，也會發生假陽性反應。一般說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃。超越一周測定的需-20℃保存。凍住血清融解后，蛋白質局部濃縮，散布不均，應充沛混勻并防止發生氣泡。混濁或有沉積的血清標本應先離心或過濾，弄清后再

常見的化學試劑儲存及原則上處理辦法2022/06/28

很難說，一般買來的試劑打開用一次沒用完要放好，保質期和儲存條件有很大關系。比如對于不耐熱的試劑特別是一些生物試劑，在冰箱冷藏又容易吸潮，往往是很不利的；有些試劑對光敏感或者對空氣敏感，所以很難找到一種*理想的儲存條件。原則上應該這樣：1、對于便宜的試劑，買來用過按照瓶上建議的方式保存即可（反正壞了不心疼，有錢任性）2、價格昂貴的試劑，最要緊的是按照需要量購買，最好一次用完，不要剩下，因為很難說這種東西會受什么影響，一來價格貴，你不會有心情來試試它對光、氧、水的敏感性；二來昂貴藥品往往用在關鍵步驟

胎牛血清在細胞培養中的作用2022/06/21

胎牛血清在細胞培養中的作用：1.提供對維持細胞指數生長的激素，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。2.提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調節它們所結合的物質活力。3.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用。4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。7.參與細胞凍存。在細胞培養中，胎牛血清加入基礎培養基的濃度大多為5%～20%

淺析幼倉鼠腎細胞培養基本條件2022/06/14

幼倉鼠腎細胞培養基本條件：1、合適的細胞培養基合適的小鼠源細胞培養基是體外細胞生長增殖的重要的條件之一，培養基不僅提供細胞營養和促使細胞生長增殖的基礎物質，而且還提供培養細胞生長和繁殖的生存環境。2、優質血清目前，大多數合成培養基都需要添加血清。血清是細胞培養液中重要的成分之一，含有細胞生長所需的多種生長因子及其它營養成分。3、無菌無毒細胞培養環境無菌無毒的操作環境和培養環境是保證細胞在體外培養成功的首要條件。在體外培養的細胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質污染，或者自

了解有關pH標準緩沖溶液必看2022/06/07

pH標準緩沖溶液定義：pH緩沖溶液是一種能使pH值保持穩定的溶液。如果向這種溶液中加入少量的酸或堿，或者在溶液中的化學反應產生少量的酸或堿，以及將溶液適當稀釋，這個溶液的pH值基本上穩定不變，這種能對抗少量酸堿或大或稀釋，而使pH值不變化的溶液就稱為緩沖溶液。pH標準緩沖液有以下特點：（1）標準溶液的pH值是已知的，并達到規定的準確度；（2）標準溶液的pH值有良好的復現性和穩定性，具有較大的緩沖容量，較小的稀釋值和較小的溫度系數；（3）溶液的制備方法簡單；1.如何配制pH標準緩沖溶液？對于一般p

熒光定量PCR的應用領域2022/05/31

熒光定量PCR的應用領域：1、核酸定量分析:對傳染性疾病進行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的檢測,比如近期流行的甲型H1N1流感，轉基因動植物基因拷貝數的檢測，RNAi基因失活率的檢測等。2、基因表達差異分析:比較經過不同處理樣本之間特定基因的表達差異(如藥物處理、物理處理、化學處理等)，特定基因在不同時相的表達差異以及cDNA芯片或差顯結果的確證3、SNP檢測:檢測單核苷酸多態性對于研究個體對不同疾病的易感性或者個體對特定藥物的不同反應有著重要的意義，因分子信標結構的巧妙性，一旦SNP的序

簡述各類抗體主要功能2022/05/31

抗體依據重鏈抗原性的不同分為五類：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。各類抗體主要功能有：IgG：血清中含量最高，因此是最重要的抗感染分子，包括抗菌、抗病毒、抗毒素等。IgG還能激活補體，結合并增強巨噬細胞的吞噬功能（調理作用和ADCC效應），穿過胎盤，保護胎兒及新生嬰兒免受感染。IgA：分單體和雙體兩種。前者存在血清中，后者存在于黏膜表面及分泌液中，是黏膜局部抗感染的重要因素。IgM：是分子量最大，體內受感染后最早產生的抗體，具有很強的激活補體和調理作用，因此是重要的抗感染因子，且常用于診

ELISA試劑盒解析泛素化結構2022/05/24

ELISA試劑盒泛素化作為一類作用方式更加復雜且作用結果更加多樣的蛋白質修飾,在細胞生命周期各個方面扮演著同樣重要的角色。泛素化過程通常需要3種泛素酶的協同作用，其中E1泛素激活酶(ubiquitin-activatingenzyme)與E2泛素偶聯酶(ubiquitin-conjugatingenzymes)激活泛素，將其鏈接到蛋白底物上，而泛素連接酶在靶蛋白的特異性識別以及泛素化系統活性的調控中起著zui重要的作用。RINGE3sRING-finger家族的E3均含有相似的E2結合結構域，作

分享免疫熒光實驗要點2022/05/23

標記免疫技術發展蕞早的一種是免疫熒光，它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術，通過將抗體與一些示蹤物質結合，利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。免疫熒光步驟包括，細胞固定和通透，封閉，孵育一抗，二抗等。除了這些基本步驟，接下來的實驗方法希望可以幫到您。1.細胞固定和通透為達到蕞佳的檢測效果，細胞需要經過固定和通透。步驟很重要，細胞和抗原需要保證蕞佳的結構，并利于抗體與抗原結合。通常情況下，2.抗體特異性免疫熒光需要用到特異性非常強的抗體，可以避免高背景和不理想的

人胰腺癌細胞培養基本條件2022/05/17

人胰腺癌細胞培養基本條件：1、合適的細胞培養基合適的小鼠源細胞培養基是體外細胞生長增殖的重要的條件之一，培養基不僅提供細胞營養和促使細胞生長增殖的基礎物質，而且還提供培養細胞生長和繁殖的生存環境。2、優質血清目前，大多數合成培養基都需要添加血清。血清是細胞培養液中重要的成分之一，含有細胞生長所需的多種生長因子及其它營養成分。3、無菌無毒細胞培養環境無菌無毒的操作環境和培養環境是保證細胞在體外培養成功的首要條件。在體外培養的細胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質污染，或者自

清除被污染的細胞辦法2022/05/09

培養細胞一經污染，多數較難處理。在細胞培養中如果污染細胞價值不大，宜棄之；在尋找原因后*消毒操作室，復蘇或重新購置細胞，再進行細胞培養。污染細胞價值較大，又難于重新得到，可采取以下辦法清除。1、細菌和真菌的清除抗生素對殺滅細菌較有效。聯合用藥比單獨用藥效果好。預防用藥比污染后再用藥效果好。預防用藥一般用雙抗生素，污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時，再換常規培養液。此法在污染早期有效。2、支原體的清除(1)用MRA處理用MRA（MycoplasmaRemo

細胞不貼壁生長可能原因及解決方法2022/04/24

細胞不貼壁生長可能原因及解決方法：可能原因：支原體污染。培養瓶瓶底不干bai凈。培養液pH值過堿（NaHCO3分解）。消化du液或培養液配制錯誤、過期儲存、儲存不當。細胞老化（如傳代前細胞已匯合導致失去貼附性）。接種細胞起始濃度太低或太高。解決方法：縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度.分離培養物,檢測支原體.清潔支架和培養箱.如發現支原體污染,丟棄培養物.注意刷洗,或換用一次性塑料培養瓶.使用無菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO2（將培養液敞口放入培養箱也可）.重新配置消化液或培養液.啟用新

懸浮細胞的凍存及液氮罐使用說明2022/04/19

懸浮細胞的凍存：1.直接將細胞收集到離心管。2.200g離心5min，棄上清。3.以生長培養基（含20%胎牛血清）或100%胎牛血清重懸細胞至終濃度約107/ml，加入10%的DMSO。4.以每管1ml分裝至凍存管中。5.置于4oC30min，再轉入-20℃2h后，再放入-80℃冰箱冷凍過夜，次日保存到液氮罐中；或置于程序降溫盒中，按相關的操作指南進行操作。液氮罐使用注意事項：1．初次使用前檢查容器內膽是否清潔干燥，外部有無凹陷及嚴重碰傷，如有輕微凹陷及碰傷，經試驗其蒸發性能不變，仍可繼續使用，