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人胰腺癌細胞培養基本條件2022/05/17

人胰腺癌細胞培養基本條件：1、合適的細胞培養基合適的小鼠源細胞培養基是體外細胞生長增殖的重要的條件之一，培養基不僅提供細胞營養和促使細胞生長增殖的基礎物質，而且還提供培養細胞生長和繁殖的生存環境。2、優質血清目前，大多數合成培養基都需要添加血清。血清是細胞培養液中重要的成分之一，含有細胞生長所需的多種生長因子及其它營養成分。3、無菌無毒細胞培養環境無菌無毒的操作環境和培養環境是保證細胞在體外培養成功的首要條件。在體外培養的細胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質污染，或者自

清除被污染的細胞辦法2022/05/09

培養細胞一經污染，多數較難處理。在細胞培養中如果污染細胞價值不大，宜棄之；在尋找原因后*消毒操作室，復蘇或重新購置細胞，再進行細胞培養。污染細胞價值較大，又難于重新得到，可采取以下辦法清除。1、細菌和真菌的清除抗生素對殺滅細菌較有效。聯合用藥比單獨用藥效果好。預防用藥比污染后再用藥效果好。預防用藥一般用雙抗生素，污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時，再換常規培養液。此法在污染早期有效。2、支原體的清除(1)用MRA處理用MRA（MycoplasmaRemo

細胞不貼壁生長可能原因及解決方法2022/04/24

細胞不貼壁生長可能原因及解決方法：可能原因：支原體污染。培養瓶瓶底不干bai凈。培養液pH值過堿（NaHCO3分解）。消化du液或培養液配制錯誤、過期儲存、儲存不當。細胞老化（如傳代前細胞已匯合導致失去貼附性）。接種細胞起始濃度太低或太高。解決方法：縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度.分離培養物,檢測支原體.清潔支架和培養箱.如發現支原體污染,丟棄培養物.注意刷洗,或換用一次性塑料培養瓶.使用無菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO2（將培養液敞口放入培養箱也可）.重新配置消化液或培養液.啟用新

懸浮細胞的凍存及液氮罐使用說明2022/04/19

懸浮細胞的凍存：1.直接將細胞收集到離心管。2.200g離心5min，棄上清。3.以生長培養基（含20%胎牛血清）或100%胎牛血清重懸細胞至終濃度約107/ml，加入10%的DMSO。4.以每管1ml分裝至凍存管中。5.置于4oC30min，再轉入-20℃2h后，再放入-80℃冰箱冷凍過夜，次日保存到液氮罐中；或置于程序降溫盒中，按相關的操作指南進行操作。液氮罐使用注意事項：1．初次使用前檢查容器內膽是否清潔干燥，外部有無凹陷及嚴重碰傷，如有輕微凹陷及碰傷，經試驗其蒸發性能不變，仍可繼續使用，

PCR三個基本反應步驟2022/04/06

聚合酶鏈式反應（PCR）是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點是能將微量的DNA大幅增加。PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個基本反應步驟構成：模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；模板DNA與引物的退火（復性）：模板DNA經

鋅指蛋白423抗體鑒定2022/03/29

鋅指蛋白423抗體鑒定：1、抗體的效價鑒定鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應,瓊脂擴散試驗,酶聯免疫吸附試驗等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定。2、抗體的特異性鑒定抗體的特異性是指與相應抗原或近似抗原物質的識別能力?？贵w的特異性高,它的識別能力就強。衡量特異性通常以交叉反應率來表示。交叉反應率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計算各自的結合率,求出各自在IC50時的濃度,并按公式計

發酵培養基pH值影響有哪些2022/03/23

發酵培養基的pH值，對微生物生長具有非常明顯的影響，也是影響發酵過程中各種酶活的重要因素。pH值對微生物的生長繁殖和產物合成的影響有以下幾個方面：①影響酶的活性，當pH值抑制菌體中某些酶的活性時，會阻礙菌體的新陳代謝；②影響微生物細胞膜所帶電荷的狀態，改變細胞膜的通透性，影響微生物對營養物質的吸收和代謝產物的排泄；③影響培養基中某些組分的解離，進而微生物對這些成分的吸收；④pH值不同，往往引起菌體代謝過程的不同，使代謝產物的質量和比例發生改變。培養基中營養物質的代謝，是引起pH值變化的主要原因，

抗原抗體反應四個主要特點2022/03/15

抗原抗體反應是指抗原與相應抗體之間所發生的特異性結合反應。這種反應既可在機體內進行，也可以在機體外進行。在機體內，當免疫細胞被抗原激活后，由B細胞分化成熟為漿細胞后所合成、分泌的一類能與相應抗原特異性結合的具有免疫功能的球蛋白（immunoglobulin，Ig），激活補體系統從而解除抗原對機體的損傷。抗原抗體反應的主要特點有：1、特異性：特定的抗體只能與特定的抗原（肽段/蛋白）結合，這在WB一抗二抗的種屬及反應性的選擇常用到；2、可逆性：抗原抗體的結合是非共價結合，在一定條件下這種非共價結合是

介紹抗原和抗體三個主要不同點2022/03/01

1、定義不同抗原是能夠引起人bai體免疫系統產生du免疫應答，并能與抗體和淋巴細zhi胞在體內外結合的物dao質?？乖煞譃?抗原和半抗原，*抗原具有免疫原性和反應原性兩種能力，*抗原you病原體、異種動物血清等等。半抗原只具有反應原性而沒有免疫原性，有磺胺、青霉素等。抗體是一種由漿細胞分泌的大型γ型蛋白質，能夠被免疫系統用來鑒別與中和外來物質如病毒、細菌以及機體本身存在的死亡細胞等等?？贵w能夠識別特定外來物的一個*特征，目前僅被發現存在于脊椎動物的體液之中以及B細胞的細胞膜表面。2、功能不同抗

哪些外源性物質影響ELISA檢測結果2022/02/22

外源性物質經常是由于用于ELISA測定的血標本的采集、貯存等不當所致。如標本溶血、標本被污染、標本貯存過久、標本凝集不全和采血管中添加物等影響。（1）標本溶血由于各種人為原因引起的標本溶血，均可因紅細胞破壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為標記的ELISA測定中，會導致非特異性顯色，干擾測定結果。為克服上述干擾作用，標本采集時必須注重避免溶血。（2）標本受細菌污染因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶，因此，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可產生非特異性顯色而干擾

混和培養物分離純化主要六種方法2022/02/15

含有一種以上的微生物培養物稱為混和培養物（mixedculture）。如果在一個菌落中所有細胞均來自于一個親代細胞，那么這個菌落稱為純培養（pureculture）。在進行菌種鑒定時，所用的微生物一般均要求為純的培養物。得到純培養的過程稱為分離純化，主要方法有以下六種。１、傾注平板法首先把微生物懸液通過一系列稀釋，取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40-50°左右的營養瓊脂培養基充分混合，然后把這混合液傾注到無菌的培養皿中，待凝固之后，把這平板倒置在恒箱中培養。單一細胞經過多次增殖后形成一個菌落，

質粒提取鑒定及保存2022/01/27

1、質粒的提取(Tiangen質粒提取試劑盒)：a)挑菌：選取培養板中大小中等的單個菌落，消毒牙簽接種到10ml搖菌管中，其中含有卡那-霉素的LB約5ml，37°C，220rpm恒溫搖床中震蕩培養過夜。b)取上述2.0ml培養液，于常溫下12000rpm離心1分鐘，棄上清，干燥沉淀。c)加入250ul溶液P1(配有去RNA酶，4°C保存)，渦旋振蕩，*懸浮細菌，不能留有沉淀，否則會影響裂解。d)加入250ul溶液P2，快速上下顛倒8次，常溫靜置3分鐘，可見混合液逐漸變清、粘稠，表示已充分裂解。e

鑒定血清方法有哪些？2022/01/18

一、鑒定的方法1、理化性質：蛋白含量包括血清總蛋白含量、球蛋白含量、血紅蛋白含量等。其中球蛋白含量是一項非常重要的指標，血清中球蛋白主要是抗體，球蛋白含量越低血清質量越高。血紅蛋白也是越低越好。2、微生物檢測：對支原體、病毒的檢測，支原體是一種很小的微生物，可通過孔徑22u的濾膜。支原體、病毒污染在光學顯微鏡下難于察覺，細胞也能生長繁殖，但會影響實驗結果。3、促生長效果：這是血清重要的特性，應當以培養的細胞來檢測。4、對于使用者：判斷血清質量先從外觀入手。好的血清應該是透明清亮，土黃色或棕黃色，

歸納造成ELISA試劑盒標準品溢值的原因2022/01/11

ELISA試劑盒實驗步驟繁瑣，操作者們所犯的問題也各有不同?，F我司技術就造成ELISA試劑盒標準品溢值的原因解析：1、樣品/標準品不正確稀釋。2、孵育時間/溫度不正確。3、在孵育時為蓋上酶聯板覆蓋物：在孵育時需蓋上酶聯板覆蓋物，以防止液體蒸發或孵育期間的污染。每個試劑盒內均有足夠數量的酶聯板覆蓋物。4、檢測波長不正確：要保證分光光度劑的檢測波長是正確的。5、TMB底物的顯色時間過長：請監控顯色時間。說明書中所示的顯色時間可能因為溫度和其它檢測條件的不同而稍有變化。6、樣品不適合此檢測：在說明書中

解答ELISA實驗出現白板異常的原因2022/01/05

ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可

?聚合酶鏈反應(PCR)實驗常見問題及解決方法2021/12/27

PCR實驗原理：聚合酶鏈反應(PCR)技術是在體外進行的由引物介導的酶促DNA擴增反應。PCR的原理是在模板DNA、PCR引物、四種脫氧核糖核苷酸(dNTP)及適當濃度的Mg2+存在的條件下，依賴于DNA聚合酶的體外酶促合成反應。兩個引物分別位于靶序列兩端，同兩條模板的3’端互補，由此限定擴增片段。PCR反應由一系列的變性→退火→延伸反復循環構成，即在高溫下模板雙鏈DNA變性解鏈，然后在較低溫度下同過量引物退火，再在適中溫度下由DNA聚合酶催化進行延伸。理論上，經過N次循環可使特定片段擴增到2n

抗原抗體反應關鍵三因素2021/12/21

抗原抗體反應是指抗原與相應抗體之間所發生的特異性結合反應。這種反應既可在機體內進行，也可以在機體外進行。特點有特異性、比例性、可逆性抗原抗體反應的過程是經過一系列的化學和物理變化，包括抗原抗體特異性結合和非特異性促凝聚兩個階段，以及由親水膠體轉為疏水膠體的變化?？乖贵w反應的特點主要有三性:即特異性、比例性、可逆性。特異性是抗原抗體反應的最主要特征，這種特異性是由抗原決定簇和抗體分子的超變區之間空間結構的互補性確定的。影響抗原抗體反應的三因素：1、電解質：抗原和抗體通常為蛋白質分子，等電點分別為

?PCR的循環的參數2021/12/16

1.預變性（Initialdenaturation）模板DNA*變性與PCR酶的*激活對PCR能否成功至關重要，建議加熱時間參考試劑說明書，一般未修飾的Taq酶激活時間為兩分鐘。2.循環中的變性步驟循環中一般95℃，30秒足以使各種靶DNA序列*變性，可能的情況下可縮短該步驟時間，變性時間過長損害酶活性，過短靶序列變性不*，易造成擴增失敗。3.引物退火（Primerannealing）退火溫度需要從多方面去決定，一般根據引物的Tm值為參考，根據擴增的長度適當下調作為退火溫度。然后在此次實驗基礎上

ELISA雙抗體夾心法檢測未知抗原2021/11/29

用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。3.加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。4

細胞收到后處理方法2021/11/24

您需要準備好細胞所要用到的培養基和相關試劑,雖然所有的貼壁,半貼壁或者懸浮細胞處理方式差不多,但是不同的實驗室培養條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在,也會導致對細胞處理不當,或者環境的不適應而造成細胞的死亡。1、收到細胞,第1時間要觀察細胞形態是否正常,對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很好,觀察細胞密度有疑議及時咨提供細胞的技術人員。由于運輸的時間或者溫度的變化,很多貼壁細胞在盛滿培養基的瓶子里生長的狀態和平時有點不一樣,主要是貼壁牢固問冋題。比如29紅,平時貼壁就不是很牢,在裝滿的培