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ELISA試劑盒加樣的具體步驟2021/11/17: ELISA試劑盒加樣的具體步驟，即加標(biāo)本，加酶物，加底物。凍住血清融解后，蛋白質(zhì)有些濃縮，散布不均，應(yīng)充沛混勻宜輕緩，防止氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上激烈振動(dòng)。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清天然凝結(jié)、縮短后即可獲得。也可在板孔中參加稀釋液，再在其參加血清標(biāo)本，然后在微型震動(dòng)器上震動(dòng)1分鐘以確保混和。通常說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超越一星期測定的需低溫冰存。可用作ELISA測定的標(biāo)本非常廣泛，體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、大便)等均可作標(biāo)

了解十五種細(xì)胞染色試劑2021/11/08: 1、酸性品紅：酸性品紅是酸性染料，呈紅色粉末狀，能容於水，略溶於酒精（0.3%）。是良好的細(xì)胞制染色劑，在動(dòng)物制片上應(yīng)用很廣，在植物制片上用來染皮層、髓部等薄壁細(xì)胞和纖維素壁。它跟甲基綠同染，能顯示線粒體。組織切片在染色前先浸在帶酸性的水中，可增強(qiáng)它的染色力。酸性品紅容易跟堿起作用，所以染色過度，易在自來水中褪色。2、剛果紅：剛果紅是酸性染料，呈棗紅色粉末狀，能溶於水喝酒精，遇酸呈藍(lán)色。它能作染料，也用作指示劑。它在植物制片中常作為蘇木精或其他細(xì)胞染料的襯墊劑。用來染細(xì)胞質(zhì)時(shí)，能把膠制或纖維素染

了解ELISA檢測代測服務(wù)2021/11/03: 一、ELISA檢測概述ELISA（酶聯(lián)接免疫吸附反應(yīng)分析）是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對客戶提供比較常用的

抗體的特異性的選擇需考慮的因素2021/10/26: 抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識(shí)別能力。抗體的特異性高,它的識(shí)別能力就強(qiáng)。特異性的選擇主要需要考慮因素：蛋白特異性、種屬特異性、實(shí)驗(yàn)方法特異性、標(biāo)記物的特異性。1、蛋白特異性針對需要檢測的蛋白查找抗體，幾個(gè)細(xì)節(jié)要區(qū)分：a.重組蛋白如果不是全長表達(dá)，則需要注意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。b.內(nèi)源性蛋白最好能清楚其剪切與修飾的方式，特殊表型的蛋白需要進(jìn)行序列比對，并結(jié)合抗體免疫原序列，查看交叉反應(yīng)的情況。c.磷酸化蛋白檢測需要確定具體位點(diǎn)，不同位點(diǎn)的磷酸化意味著可能有不同的機(jī)制

溶解與稀釋ELISA標(biāo)準(zhǔn)品方法步驟2021/10/20: ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱，是一種檢測方法，而標(biāo)準(zhǔn)品是相對于具體的物質(zhì)有具體的標(biāo)準(zhǔn)品，所以不存在說ELISA的標(biāo)準(zhǔn)品。ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線是結(jié)果計(jì)算的尺子，標(biāo)準(zhǔn)品是ELISA實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵點(diǎn)。正確溶解、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品如下：1.粉末標(biāo)準(zhǔn)品短暫離心，讓因運(yùn)輸沾到管蓋、管壁的標(biāo)準(zhǔn)品沉到管底。2.根據(jù)瓶標(biāo)簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解10-30min，讓粉末*溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋

組織培養(yǎng)消除污染的實(shí)驗(yàn)步驟2021/10/11: 當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時(shí)，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開，用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái)，檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細(xì)胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時(shí)尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟:（1）在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞，稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。（2）分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)

PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶（雜帶）原因與解決方法2021/10/08: 擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶(雜帶)1)引物用量偏大，引物的特異性不高。應(yīng)調(diào)換引物或降低引物的使用量。2)循環(huán)的次數(shù)過多。適當(dāng)增加模板的量，減少循環(huán)次數(shù)。3)酶的用量偏高或酶的質(zhì)量不好。應(yīng)降低酶量或調(diào)換另一來源的酶。4)退火溫度偏低，退火及延伸時(shí)間偏長。應(yīng)提高退火溫度，減少變性與延伸時(shí)間，也可采用二種溫度的PCR擴(kuò)增。以2度為梯度設(shè)計(jì)梯度PCR反應(yīng)優(yōu)化退火溫度。5)樣品處理不當(dāng)。6)Mg2+濃度偏高。因適當(dāng)調(diào)整Mg2+使用濃度。7)若為PCR試劑盒。也可能時(shí)試劑盒本身質(zhì)量有問題。8)復(fù)制提前終止。使用非熱

抗體的免疫學(xué)五大功能2021/09/24: 1、中和（Neutralization）這是抗體最基本的功能。抗體的中和指的是抗體和抗原結(jié)合后，抗原失去原有的功能。比如病毒的糖蛋白無法和細(xì)胞受體結(jié)合，酶無法進(jìn)行催化，轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白無法轉(zhuǎn)運(yùn)等等。中和是抗體自身的功能，僅由抗體的分子結(jié)構(gòu)決定，不需要免疫系統(tǒng)的其它部分參與。2、凝集（Agglutination）抗原和抗體結(jié)合后會(huì)凝集成一團(tuán)，失去行動(dòng)力，有利于免疫系統(tǒng)的清除。3、調(diào)理（Opsonization）抗體和抗原結(jié)合會(huì)促進(jìn)吞噬細(xì)胞對抗原的吞噬。由于細(xì)胞膜帶負(fù)電會(huì)互相排斥，被抗體覆蓋的細(xì)菌或細(xì)胞更易

探討熒光定量PCR中的Ct值2021/09/15: 熒光定量PCR（qPCR）是目前病原檢測領(lǐng)域使用最為廣泛的核酸檢測方法（PCR檢測技術(shù)概述）。尤其是非洲豬瘟發(fā)生后，qPCR檢測得到了極大的普及，對于剛剛進(jìn)入qPCR檢測領(lǐng)域的人，很容易鉆入了“唯Ct值”的牛角尖，今天我們就聊聊qPCR中的Ct值。一、Ct值的基本概念1、什么是Ct值閾值循環(huán)數(shù)Thresholdcycle(Ct)也寫作Cq值，熒光信號(hào)大于熒光閾值時(shí)PCR循環(huán)數(shù)。儀器軟件通常將第3-15個(gè)循環(huán)的熒光值設(shè)為基線（baseline），是由于測量的偶然誤差引起的。閾值（threshold

實(shí)驗(yàn)室酶聯(lián)免疫技術(shù)的質(zhì)量控制要點(diǎn)2021/09/07: 實(shí)驗(yàn)室酶聯(lián)免疫技術(shù)的質(zhì)量控制：1.測定模式的影響ELISA測定模式包括：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法，其中競爭抑制法因受操作時(shí)差所引起的bu公平競爭等因素的影響，結(jié)果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難控制。2.ELISA試劑的準(zhǔn)備不同批次的試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量*一致，即使是通過批批檢的項(xiàng)目其檢測結(jié)果也存在差異，因此必須選擇和訂購長批號(hào)的試劑，并保證保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號(hào)改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性；對

單克隆抗體與多克隆抗體的區(qū)別2021/09/02: 克隆：指無性繁殖細(xì)胞系，是由單一的祖先細(xì)胞分裂繁殖而形成的一簇細(xì)胞純系。在這個(gè)家族的所有成員中，如無突變發(fā)生，基因是*相同的。單克隆抗體（monoclonalantibodies,mAb）：由一個(gè)識(shí)別一種抗原表位的B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的同源抗體。高度均一、特異性強(qiáng)、效價(jià)高、少或無交叉反應(yīng)性。多克隆抗體（polyclonalantibody,pAb）：用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動(dòng)物，可刺激機(jī)體多個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對多種抗原表位的不同抗體。所獲得的免疫血清實(shí)際上是含有多種抗體的混合物。多克隆抗體與

培養(yǎng)基制備常用的8個(gè)步驟過程2021/08/25: 培養(yǎng)基(Medium)是供微生物、植物組織和動(dòng)物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。不同培養(yǎng)基可根據(jù)實(shí)際需要，添加一些自身無法合成的化合物，即生長因子。培養(yǎng)基的制備程序不同類型培養(yǎng)基制備的程序也不盡相同。但一般培養(yǎng)基的程序主要可分為：配料、溶化、矯正pH、澄清過濾、分裝、滅菌及檢定等8個(gè)步驟。1，配料：按培養(yǎng)基處方準(zhǔn)確稱取各種成分，先在三角燒瓶中加入少量蒸餾水，再加入各種成分，以防蛋白胨等粘附于瓶底，然后再以剩余的水沖洗瓶壁。

?ATCC菌種四種的保存方法2021/08/19: 1、傳代保存法有些微生物當(dāng)遇到冷凍或干燥等處理時(shí)，會(huì)很快死亡，因此在這種情況下，只能求助于傳代培養(yǎng)保存法。傳代培養(yǎng)就是要定期地進(jìn)行ATCC菌種轉(zhuǎn)接、培養(yǎng)后再保存，它是基本的微生物保存法，例如酸奶等常用菌種的保存。傳代保存時(shí)，培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸ATCC菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。一般地，大多數(shù)菌種的保藏溫度以5℃為好，像厭氧菌、霍亂弧菌及部分病原真菌等微生物菌種則可以使用3

血清的五大主要功能2021/08/03: 血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等，這些物質(zhì)對促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份，常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。1.提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子

流式抗體保存注意事項(xiàng)2021/07/28: 1.流式抗體應(yīng)該如何保存？流式抗體一般都是直接帶熒光標(biāo)記的，一般情況下4°C避光可以保存一年，勿-20°C保存，熒光基團(tuán)在反復(fù)凍融之后會(huì)從抗體上脫落。2.流式抗體過了一年還能用嗎？一般來說，流式抗體還是比較穩(wěn)定的，如果說明書上寫4°C避光可以保存一年，大部分情況下，過了一年還是可以使用的，有些流式抗體甚至可以4°C避光保存2-3年。3.不能及時(shí)檢測的樣本應(yīng)該如何保存？流式實(shí)驗(yàn)建議是用新鮮細(xì)胞做，樣本如果不能及時(shí)上機(jī)檢測，可以在得到單細(xì)胞懸液后就立即放到4°C冰箱中，到第二天早上做流式，或嘗試抗體

介紹按用途分類的三種培養(yǎng)基2021/07/21: 根據(jù)培養(yǎng)基的用途來區(qū)分，可分為選擇培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等。一、選擇培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入某種物質(zhì)以殺死或抑制不需要的菌種生長的培養(yǎng)基，稱之為選擇培養(yǎng)基。如鏈霉素、氯霉素等抑制原核微生物的生長；而制霉菌素、灰黃霉素等能抑制真核微生物的生長；結(jié)晶紫能抑制革蘭氏陽性細(xì)菌的生長等。二、增殖培養(yǎng)基在自然界中，不同種的微生物常生活在一起，為了分離我們所需要的微生物，在普通培養(yǎng)基中加入一些某種微生物特別喜歡的營養(yǎng)物質(zhì)，以增加這種微生物的繁殖速度，逐漸淘汰其它微生物，這種培養(yǎng)基稱為增殖培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基

生物素標(biāo)記實(shí)驗(yàn)指南2021/07/14: 生物素標(biāo)記反應(yīng)原理：NH2-ReactiveBiotin專一的與伯胺反應(yīng)（N-末端及賴氨酸殘基側(cè)鏈）形成穩(wěn)定的酰胺鍵一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：仔細(xì)閱讀使用說明書。計(jì)算待使用NH2-ReactiveBiotin的量。1.提前20min從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫（注：不需要用到的NH2-ReactiveBiotin繼續(xù)放置冰箱中）。2.溶解NH2-ReactiveBiotin：加入30μLDMF至NH2-ReactiveBiotin瓶中，靜置10min，待其充分溶解，此時(shí)生物素的濃度為10mM。二、操作步

牛源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒實(shí)驗(yàn)說明2021/07/07: 牛源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒實(shí)驗(yàn)說明需要自備的器材：1．方法儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光PCR擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20℃冰箱、可調(diào)移液器（2µL、20µL、200µL、1000µL）。2．耗材：熒光PCR專用反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5mL經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水處理的滅菌離心管、吸頭（10µL、200µL、1000µL）、滅菌雙蒸水。樣本采集、存放及運(yùn)輸：1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存

介紹生物素親和素ELISA系統(tǒng)2021/07/01: 生物素親和素(又稱抗生物素)系統(tǒng)(biotinavidinsystem,BAS)標(biāo)記抗體的技術(shù)是20世紀(jì)70年代后期發(fā)展起來的一種新的免疫檢測方法。由于親和素與生物素間的親和力*，結(jié)合迅速，且極其穩(wěn)定，生物素標(biāo)記抗體和酶的標(biāo)記率高，又不影響蛋白的活性，使BAS標(biāo)記技術(shù)比常規(guī)酶聯(lián)免疫、放射免疫及熒光免疫技術(shù)有著更高的靈敏度，為微量抗原、抗體的檢測開辟了新的途徑。近年來，在BAS檢測中多用鏈霉親和素“streptavidin,SA”，它是鏈霉菌培養(yǎng)過程中的分泌物，完整的鏈霉親和素和從卵白中提取的親和

免疫熒光技術(shù)實(shí)驗(yàn)說明2021/06/23: 免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescencetechnique）又稱熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)技術(shù)。很早以來就有一些學(xué)者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。一、傳統(tǒng)的免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟1、實(shí)驗(yàn)材料細(xì)胞樣品試劑、試劑盒：多聚甲醛、70%甲醇、丙酮、PBS、Triton、BSA、DAPI染液、DABCO、Tris、甘油儀器、耗材：玻片2、實(shí)驗(yàn)步驟細(xì)胞爬片免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟：第一

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