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【感受態細胞的制備】 用CaCl2處理制備新鮮的大腸桿菌感受態細胞
1.從37℃培養16~20h的新鮮平板中挑取一個單菌落（如大腸桿菌DH52），或1ml新鮮的16~20h過夜培養物，轉到一個含有100mlLB培養基的1L或500ml培養瓶中。于37℃振搖培養約2~3h（旋轉搖床200~300r/min），每隔20~30min測量OD600值≈0.4。2.在無菌條件下將細菌轉移到一個，用冰預冷的50ml聚丙烯離心管中，冰上放置10~20min。3.于4℃4000轉/分離心10min，回收細菌細胞。4.將管倒置1min，以使zui后殘留的痕量培養液流盡。5.以10 -
實驗試劑LB培養基，KB培養基，10%甘油，液氮，0.1MCaC12溶液實驗設備超凈工作臺，搖床，離心機，250mL離心瓶，0.5mL的離心管實驗材料大腸桿菌，農桿菌和假單胞桿菌實驗步驟1.電擊感受態細胞的制備1）-80℃保存的大腸桿菌，農桿菌或者假單胞桿菌在固體平板上（DH，BL21在LB平板上，GV3101在LB/Gen;P.s.pv.tomato0288-9和P.syringaepv.tabaci6505在KB平板上）劃線。2）接種單克隆于5-10mL液體培養基，37℃（大腸桿菌）或者28
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細胞表面分子流式檢測步驟說明注意事項1．在使用抗體之前，快速甩動一下，使之聚集到管的底部；2．熒光標記的抗體應該避光保存在4℃，不要冷凍；3．當染色的時候，固定或延遲分析可能降低某些抗體的熒光信號。為了得到更好的結果，染色后應該馬上分析。過程概述：1．制作外周血、淋巴組織或者培養細胞的單細胞懸液；2．細胞染色抗體（包括直接標記抗體和間接標記抗體）；3．洗滌步驟棄掉所有的為束縛的試劑4．運行分析流式儀。注意：流式細胞染色實驗中，所有實驗條件的優化都很重要。關鍵參數包括靶細胞、抗體效價以及動力學。試
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方案A：兩步法胞內（細胞質）蛋白染色。方案B：一步法胞內蛋白染色（細胞核）。注意：1、不同細胞因子的刺激條件是不同的，比如：LPS刺激活化單核細胞分泌IL-6的培養時間一般是6個小時，而檢測IL-10則需要刺激24小時。2、結合熒光的流式抗體應在4度，避光儲存。3、使用抗體前請低速離心30秒，使貼壁抗體沉底。不建議斡旋混勻抗體，可用手指輕彈混勻。4、除非方案中注明，默認的抗體孵育方法是冰上或4度避光。5、緩沖液中加BSA或FBS可以減少固定破膜后的非特異性背景。方案A:兩步法胞內（細胞質）蛋白染
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方案A：細胞懸液的表面抗原染色。方案B：一步法胞內蛋白染色（細胞核）。小貼士：1、流式抗體要儲存于避光4度，嚴格避免凍融。2、流式抗體使用前要離心3min，避免貼壁蓋的損失，請勿斡旋混勻。3、避免細胞成團，以免堵塞流式細胞儀。4、eFluor納米晶體抗體參照該品說明進行改善。方案A:細胞懸液的表面抗原染色實驗材料：15×75mm圓底流式管或96孔板直標一抗或純化抗體二抗（可選）抗小鼠CD32/16抗體（eBioscienceCat.No.14-0161）人FC?R結合抑制劑（eBioscienc
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方案A：組織培養細胞的制備。方案B：淋巴組織細胞制備。方案C：非淋巴組織細胞制備。方案D：全血PBMC的分離。小貼士1、流式細胞儀檢測需要將細胞制備成單細胞懸液。2、避免細胞成團，以免堵塞流式細胞儀。3、實體組織制備單細胞懸液需要物理方法分離或酶消化法進行，具體組織的方法，依照經驗來進行。方案A:組織培養細胞的制備實驗材料：Accutase™酶細胞分離培養基（eBioscienceCat.No.00-4555）eBioscience®流式染色緩沖液（eBioscienceCat.No.00-42
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以CaspGLOW™FluoresceinActiveCaspase-3StainingKit（88-7004）為例。1.根據文獻中方法誘導靶細胞凋亡，準備未誘導細胞作為陰性對照，另外一種陰性對照用1ulZ-VAD-FMK抑制劑制備。2.將細胞加入300ul*培養基中，濃度為1×106.3.加1ulFITC-DEVD-FMK在5%CO237攝氏度下孵育30~60min.4.3000rpm，5min,移去上清。5.加入0.5mlwash-buffer洗滌細胞一次。6.重復步驟4和步驟5.7.流式細
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類型檢測名稱檢測方法主要特點體內功能檢驗遲發型超敏反應法皮下注射抗原或者負載抗原的DC，觀察紅斑、硬塊的發生與大小優點：體內功能性檢驗，相對比較容易操作；缺點：只是一種初篩，加陽性與假陰性比較嚴重。體外表型檢測TCR可變區分析法使用針對T細胞受體（TCR）可變區的流式抗體來對表達特定可變區的T細胞計數優點：可以提供關于可變區使用的群體分布；缺點：識別同一種抗原的TCR的可變區可能不相同；單抗不夠豐富，不能檢測所有種類的可變區。多肽MHC四聚體法（Tetramer）用熒光標記的MHC-肽四聚體去結
