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（一）無菌操作前的準備工作培養材料接種時的無菌操作過程除上述各項消毒滅菌操作外，還需完成以下無菌操作步驟，從而獲得接種的無菌培養材料。工作人員無菌操作前需用肥皂刷洗雙手及手臂，并用流水沖凈，并對手臂消毒后穿戴好滅菌工作服、工作帽和口罩，更換拖鞋，才能進入無菌操作區。如進入層流操作室進行實驗操作，應完成緩沖準備區內的淋浴、一次更換滅菌衣帽、拖鞋；手臂消毒、二次更換滅菌防護衣帽、手套、拖鞋等；再在風淋區進行無菌風淋后方可進入層流操作室。進入無菌操作區后，再用70%～75%的酒精擦拭雙手和前臂，完成無
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食品中菌落總數的測定，目的在于了解食品在生產中，從原料加工到成品包裝受外界污染的情況；也可以應用這一方法觀察細菌在食品中繁殖的動態，確定食品的保存期，以便對被檢樣品進行衛生學評價時提供依據。食品有可能被多種類群的微生物所污染，每種細菌都有它一定的生理特性，培養時應用不同的營養條件及其生理條件（如溫度、培養時間、PH值、需氧性質等）去滿足其要求，才能分別將各種細菌培養出來。但在實際工作中，一般都只用一種常用的方法去作菌落總數的測定，所得結果，只包括一群能在營養瓊脂上發育的嗜中溫性需氧菌的菌落數。國
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轉染，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例；化學介導方法很多，如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法，有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。病毒介導的轉染技術，是目前轉染效率zui
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下面我們為大家提供一些常用脂質體試劑的適用細胞系信息以及轉染FAQs：1.promega公司Promega轉染試劑產品適合于人HeLa，HepG2，293，K562，Jurkat；猴COS-7，CV-1；小鼠NIH3T3；倉鼠BHK，CHO；大鼠PC12；昆蟲S19等等細胞系的RNAi轉染。詳情請參閱http：//www.promega.com.cn/files/cpxl/zhuanran/zhuanran.htm2.Invitrogen公司根據經驗，我公司推薦您使用Invitrogen公司生產
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1．瞬時轉染分析法目前有很多功能性分析方法用于研究轉錄調控，zui常用的方法是瞬時轉染分析法。該方法是通過一定的轉染程序將含目的調控區的質粒導人培養細胞。在典型情況下，調控區調控“報告基因”的轉錄。報告基因是在mRNA和蛋白質的水平上都易于被正確檢測到的基因。產生的質粒在培養細胞中轉錄后，在特定時刻測定從報告基因上合成的mRNA或蛋白質，以評價調控區的活性。人們將這種分析方法稱為瞬時轉染分析，因為此時質粒仍然以附加的形式存在，很少整合進宿主基因組。因此，mRNA或蛋白質產物必須在短時間內（1～3
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將制備好的siRNA，siRNA表達載體或表達框架轉導至真核細胞中的方法主要有以下幾種：1.磷酸鈣共沉淀將氯化鈣，RNA（或DNA）和磷酸緩沖液混合，沉淀形成包含DNA且極小的不溶的磷酸鈣顆粒。磷酸鈣-DNA復合物粘附到細胞膜并通過胞飲進入目的細胞的細胞質。沉淀物的大小和質量對于磷酸鈣轉染的成功至關重要。在實驗中使用的每種試劑都必須小心校準，保證質量，因為甚至偏離*條件十分之一個pH都會導致磷酸鈣轉染的失敗。2.電穿孔法電穿孔通過將細胞暴露在短暫的高場強電脈沖中轉導分子。將細胞懸浮液置于電場中會
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脂質體（lipofectinregeant,LR）試劑是陽離子脂質體N-[1-2，3-Dioleyoxy,Propyl]-n,n,n-TrimethylammoniumChloride（DOTMA）和Dioleoylphotidye-thanolamine（DOPE）的混合物[1:1（w/w）]。它適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中，是目前條件下zui方便的轉染方法之一。轉染率高，優于磷酸鈣法，比它高5～100倍，能把DNA和RNA轉染到各種細胞。用LR進行轉染時，首先需優化轉染條件，應找
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ELISPOT技術的*優點已經讓它在抗原特異性T細胞免疫學研究上*。它是當今*能夠檢測到到百萬分之一陽性細胞率的檢測技術。如此高的靈敏度就連流式細胞技術（細胞內細胞因子染色）和tetramer技術也*（LetschAet.al.，2003）。此外由于淋巴細胞的凍存復蘇問題也得到了的解決，經過凍存復蘇的細胞并不喪失免疫功能（MaeckerHTet.al.，2005；KvarnstromMet.al.，2004）。這一點對臨床試驗非常重要，它使科研人員得以并行分析免疫治療前、后的病人血樣。如果試驗牽
