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需要指出的一點,無論采用哪種轉染技術,要獲得*的轉染結果,可能都需要對轉染條件進行優化。影響轉染效率的因素很多,從細胞類型、細胞培養條件和細胞生長狀態,到轉染方法的操作細節,都需要考慮。
1. 試驗準備:200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌),酒精棉球,廢液缸,試管架,微量移液器,記號筆,培養皿,離心管。
3. 用Tip頭加入1ml Trypsin液,消化1分鐘(37℃,5%CO2 )。用手輕拍培養瓶壁,觀察到細胞*從壁上脫落下來為止。
7. 用培養液重懸細胞,細胞計數后選擇0.8X106個細胞加入一個35mm培養皿。
8. 將合適體積*培養液加入離心管中,混勻細胞后輕輕加入培養皿中,使其均勻分布。
① 將400ul去核酸酶水加入管中,震蕩10秒鐘,溶解脂狀物。
4. 吸去培養板中的培養基,用PBS或者無血清培養基清洗一次。
6. 到時后,根據細胞種類決定是否移除混合液,之后加入*培養基繼續培養24-48小時。
1. 在轉染后24小時,觀察實驗結果并記錄綠色熒光蛋白表達情況。