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這種常見的維生素，有益于大腦，阻止認知能力下降2024/04/28

癡呆癥，是一個具有高經濟和社會負擔的全球健康問題。全球約有5000萬癡呆癥病例，每年新增約有1000萬例，在中國，有上千萬患者，在全球中位居第一名。盡管科學界投入了許多精力，但目前仍然沒有十分有效的治療方案來預防或治愈阿爾茨海默病。肥胖，既是一種特征，也是一種疾病，是導致認知能力下降的原因之一。在中國，超重和肥胖人群占49%。中國雖然不是肥胖人口比例最高的國家，但由于人口基數龐大，近年來中國已經成了全球肥胖人口最多的國家。生育三烯酚（T3），屬于維生素E家族，是一組天然存在的化合物，早期研究顯示

兔源抗體2024/04/28

兔IgG只有一種亞型人和小鼠都有五種抗體類型（IgA,IgD，IgE，IgG,andIgM）。目前為止，已經在兔中發現其中的四種（IgA,IgE,IgG，andIgM）。有趣的是，人有兩種IgA亞型，小鼠有一種，而兔子共有14種IgA亞型。研究用的抗體主要是IgG類型。兔只有一種IgG亞型，而小鼠有IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c和IgG3亞型，大鼠有IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG2c亞型。表一列出了兔抗體類型，亞型，基因名稱及導向NCBI和IMGT基因數據庫的鏈接。表一：

細胞計數的實驗步驟＆問題分析2024/04/25

細胞計數在細胞實驗中是非常常見的，大多數實驗室目前使用細胞計數板進行細胞計數，細胞計數板的結構如下圖所示：實驗步驟1.所用細胞密度達到一定要求后進行細胞計數鋪板，提前準備好細胞計數板、蓋玻片、計數器；2.棄掉原有培養基，加入1ml溫浴的PBS緩沖液清洗；3.棄掉PBS緩沖液，加入胰酶消化細胞，消化時間根據細胞類型及日常經驗決定；4.消化相應時間后，加入二倍體積的培養基終止消化，用移液器將細胞全部吹下，轉移至離心管內；5.離心機室溫800rpm,離心5min；6.準備和所計數細胞種類相同的1.5m

DMEM、1640、MEM...這么多培養基有什么不同？2024/04/24

為什么細胞培養基有那么多不同的名字？常見的1640和DMEM有什么不同？培養基應該如何儲存？這一期我們講講細胞培養所用到的培養基。01為什么細胞培養基有那么多不同的名字？培養基有很多不同的名字是因為根據不同細胞的培養和應用場景，培養基可以分為多種類型，最常見的是DMEM、RPMI-1640、MEM等。這些培養基有自己的配方特點和適用范圍。例如，DMEM適用于哺乳動物細胞的培養，而RPMI-1640則適用于淋巴細胞的培養。此外，還有一些專門用于特定類型細胞培養的培養基，如神經元培養基、肌肉細胞培養

細胞共培養實驗步驟、技巧，Transwell or Millicell?2024/04/23

實驗目的：研究兩種或三種細胞之間的相互作用實驗簡介：共培養是通過分別在插入式細胞培養小室內外培養兩種或以上細胞，來研究細胞之間的相互作用，例如不同CD亞型的免疫細胞、免疫細胞和腫瘤細胞、飼養層和干細胞等。因此，在免疫、腫瘤、干細胞等領域都有廣泛應用。方法11.將小室放在24孔板里，用培養基潤濕膜。2.反轉小室，底面朝上，加入約200μL細胞懸液，置于37℃細胞培養箱培養1-4小時，使細胞貼膜。3.輕輕將小室正立在培養板孔里，在小室里層種第二種細胞，并在小室里面和外面都加培養基，繼續培養至細胞貼膜

原位雜交實驗流程2024/04/23

原位雜交組織（或細胞）化學簡稱原位雜交，屬于固相分子雜交的范疇，它是用標記的DNA或RNA為探針，在原位檢測組織細胞內特定核酸序列的方法。一、合成RNA探針1、設計探針引物RNA探針長度500bp最為合適。一輪引物不添加啟動子序列，二輪引物在正向引物的5端加上T7啟動子序列，在反向引物的5端加上SP6啟動子序列。2、探針合成用未添加啟動子序列的引物克隆出探針序列的DNA模板，將PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳驗證。膠回收，將其連接到T載體上，轉化涂板，進行質粒提取送測。用添加了T7和SP6啟動子序列

如何提高DNA濃度/純度測定的準確性？2024/04/23

分子生物學實驗中經常需要對樣品進行濃度和純度的測定，它相當于一種質控，以此來確保下游實驗的結果可靠。常用的DNA濃度/純度測定設備是紫外分光光度計，它的原理是利用物質分子對紫外可見光譜區的輻射吸收來進行分析物質成分。這樣來描述可能有點生硬，我們舉個栗子：假設現在有一樣物質A，它溶解在溶液內，當光照射溶液時，溶液內的A會吸收一部分的光。不同顏色的光有不同的波長，A對不同顏色的光（不同波長）的吸收程度是不一樣的。雙鏈的DNA，它能對波長為260nm的光進行強烈的吸收，吸收的程度可以用一個叫吸光度的數

Lipofectamine ™ RNAiMAX轉染2024/04/23

轉染是實驗過程中常用的技術操作，通俗來說，常見的轉染即為把某種功能性質粒轉到細胞中去，通過轉染試劑的作用在經過一段時間后，收集細胞通過WB、qpcr等來檢測質粒是否正常發揮作用來達到我們實驗的某種需求；不同的質粒通常有不同的轉染試劑和不同的方法，如PEI轉染、lipo2000轉染等。Lipofectmine™RNAiMAX轉染主要供siRNA和Stealth™RNAi雙鏈體轉染使用，具有轉染效率高、對細胞毒性小等優點，分為正向轉染及反向轉染兩種方式。siRNA轉染比較常見，因此本文分享主要針對s

原代細胞培養入門2024/04/22

大家好！這篇文章是關于原代培養的入門知識，向剛入門的同學科普這個實驗的基礎。包括以下內容：原代培養的概念和流程分離組織的操作和注意事項解離組織獲取細胞的三種常見方法原代培養是指細胞分離之后至第一次傳代之前的細胞培養階段，之后細胞就轉變成細胞系。原代培養可分為4個步驟：獲取樣品分離組織解剖或解離組織接種于培養皿中培養用于原代培養的樣品中可來源于2類，一是實驗室樣本，包括實驗動物的器官、組織，例如胚胎、腸道等；二是臨床樣本，例如通過手術過程分離出來的病人組織。分離組織分離組織的時候，要注意無菌操作，

流式細胞術實驗常見問題分析2024/04/22

流式細胞技術（FlowCytometry,簡稱FCM）是一種高效的方法，用于分析和收集細胞懸液中的單個細胞。FCM的優勢在于其速度快、結果客觀，并且具有重要的統計意義。它能夠處理復雜的樣本，同時收集多個參數，其可靠性和重復性都非常出色。今天我將總結并分享一系列關于流式細胞技術的常見問題及其分析。對于流式細胞術的原理和步驟不甚清晰的同學，建議先閱讀本公眾號以往的文章，了解背景知識。1.熒光抗體染色無信號或信號弱（1）加入的抗體量不足：這是普通的一種情況，只需要摸索實驗條件，適當增加抗體的量或濃度。

何時用瓶皿培養，何時用孔板培養2024/04/18

細胞的體外培養需要依附在人工附著物上，大多數脊椎動物細胞在人工附著物上會呈現為單層生長的狀態。所謂的人工附著物，就是常見的多孔板、培養瓶、培養皿。用什么類型的附著物來培養細胞，是有什么依據的呢？這一期內容就講講這個話題。基本概念從材料分類上看，常見的細胞培養附著物分為一次性的塑料和玻璃。先說玻璃，成本低、可重復使用，透光性好，但由于其清洗過程復雜，不易保存，現在已逐漸被一次性塑料取代了。一次性塑料的主要成份是聚丙乙烯，由人工合成，質地均勻，產量大成本低，能為細胞提供一個良好的生長表面。這里有一個

ELISA實驗經驗總結2024/04/18

前置知識ELISA（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay，酶聯免疫吸附試驗）是一種常用的實驗技術，用于檢測和定量分析樣品中特定抗原或抗體的存在。ELISA是基于免疫學原理的一種高靈敏度和高特異性的實驗方法。ELISA實驗通常包括以下步驟：1.涂覆：將待檢測的抗原或抗體溶液加入到微孔板（通常是96孔板）中，并在孔板表面上形成一層固定的抗原或抗體。這個過程被稱為涂覆。2.阻斷：為了防止非特異性結合，需要在涂覆后加入一種阻斷劑，例如牛血清蛋白（BSA）或牛奶粉，以覆蓋孔板上未

要做好CCK-8實驗，這三個重要環節請注意2024/04/17

在做細胞基礎實驗時，必要的一步就是需要探究清楚細胞的增殖變化和毒性耐藥變化情況，為下一步實驗做準備。我們在做CCK-8增殖和毒性實驗中常常會遇到一下幾個問題：1.細胞鋪板問題2.給CCK-8的方式問題3.CCK-8的反應時間問題首先，在進行細胞鋪板時，需要用血球計數板進行細胞計數，得到細胞數量后按照所需鋪板的細胞數量進行調整。一般96孔板鋪板數量為1*10^6/孔。制備細胞懸液時需要反復吹打，使細胞懸液充分混勻，降低出現細胞團塊的幾率。一般96孔板，每孔加入100微升細胞懸液，從孔的9點鐘方向打

細胞凍存的實驗步驟＆注意事項2024/04/17

細胞凍存實驗用于保護細胞免受損傷，以便在需要的時候重新復蘇和使用，對于保存少有的細胞資源、制備細胞庫、研究細胞生物學等方面具有重要意義。實驗步驟：1.細胞凍存液提前配置：凍存液配置比例根據實驗習慣即可，若細胞不多或使用人數較少，建議一次少量配置，配置完成后，由于DMSO的存在，因此需要嚴格避光保存。2.需要凍存的細胞密度要求≥90%，鏡下觀察細胞，當細胞密度滿足要求后，棄掉原有培養基，沿培養皿邊緣加入1ml溫浴的PBS緩沖液清洗。3.棄掉PBS緩沖液，加入胰酶消化細胞，消化時間根據細胞類型決定。

三羧酸循環與銅死亡2024/04/15

銅死亡背景2022年3月在Science期刊發表的CopperinducescelldeathbytargetinglipoylatedTCAcycleproteins揭示了銅離子過載會導致細胞死亡，細胞銅穩態失衡，銅離子直接結合三羧酸循環酯酰化蛋白，FDX1/LIAS介導的LApathway（硫辛酸途徑）誘導硫辛酸化修飾的DLAT（丙酮酸脫氫酶復合物關鍵組分）發生寡聚化，從而使三羧酸循環代謝失常，引發細胞蛋白質毒性應激，導致細胞死亡。該研究表明，銅死亡與三羧酸循環代謝途徑是有直接聯系的。圖1.

細胞消化和傳代經驗分享2024/04/10

一、準備工作試劑準備：培養細胞所需的培養基、胰酶、胎牛血清（簡稱FBS）、雙抗（簡稱P/S）、PBS緩沖液等從4°C的冰箱中取出，于室溫條件下放置至恢復室溫。耗材準備：50ml離心管、15ml離心管及移液槍。實驗條件準備：打開超凈臺紫外線照射30min之后通風3-5min即可開始實驗。二、實驗步驟1.潔凈要求：進入細胞間后，穿好實驗服，戴好口罩手套等實驗裝備，將上述試劑耗材用酒精噴洗后放入超凈臺，手部同樣酒精噴洗后放入超凈臺，手部同樣酒精噴洗即可開始。2.試劑分裝及配制：（1）配制（血清）細胞培

CHO-K1倉鼠卵巢細胞株的培養方法2024/04/10

中國倉鼠卵巢（Chinesehamsterovary,CHO）細胞是第一個被美國FDA、歐盟EMA和中國CFDA認可的用于生物制藥領域的生產細胞，已廣泛應用于各種治療性蛋白質藥物的大規模制備，包括重組抗體、重組單體蛋白質以及重組融合蛋白質等。CHO-K1是未經改造的野生型CHO細胞。最原始的CHO-K1細胞是貼壁培養，并需要添加血清，由于血清的批間穩定性問題，及后來病毒安全性問題，無血清懸浮培養成為趨勢。實驗室常以貼壁的CHOK1細胞構建穩轉細胞株。細胞形態：長梭形（10×倍鏡）培養條件：DME

Dot blot法鑒定分泌型蛋白表達2024/04/10

實驗原理：Dotblot是一種半定量的蛋白質或核酸檢測方法，其原理是將待測物直接滴于固相載體上，然后通過特異性抗體或探針與待測物結合，最終通過可視化方法來檢測目標分子的存在與否。溶液配置：操作步驟：（1）減取適當大小的PVDF膜，于甲醇活化1分鐘；（2）將活化后的PVDF膜于ddH2O中，在脫色搖床上清洗15分鐘；（3）提取預冷離心機，將樣品在4℃低溫條件下8000rpm離心15分鐘，取上清作為樣品（分泌型蛋白）。（4）取出活化后的PVDF膜在室溫晾至半干，看見水膜消失即可。將收集的上清、空白對

小鼠脾臟native CD4+ T細胞的分離和原代培養2024/04/09

在生物醫學實驗中，細胞培養是基礎中的基礎，大部分實驗只需要用到相關細胞系的培養，但對實驗動物原代細胞的培養也是非常重要的。脾臟T細胞的分離和培養就是免疫學領域的一種非常基礎和重要實驗方法。本文將詳細探討小鼠脾臟T細胞分離培養的關鍵步驟，幫助大家更有效地進行實驗操作。一、實驗目的提取小鼠脾臟的naiveCD4+T細胞，研究某種因素對naiveCD4+T細胞或某一亞型的CD4+T細胞增殖分化和功能狀態的影響，或者在誘導分化為CD4+T細胞的某一亞型后做下游實驗。二、實驗內容小鼠脾臟naiveCD4+

馬松染色的實驗步驟和注意事項2024/04/01

馬松（Masson）染色是一種用于可視化組織纖維和炎性因子的染色方法。該技術充分利用了不同組織成分對陰離子燃料滲透性的差異。此法多用于觀察病變組織中纖維結締組織的增生和分布,纖維素腫瘤與肌源性腫瘤的鑒別，在肌肉疾病和心血管疾病的診斷中具有重要意義。一、原理：Masson染色，又成為馬松染色，是結締組織染色領域中經典的一種技術方法，專注于膠原纖維的染色。該方法被廣泛應用于組織學研究中，其主要目的是對胞核進行染色，并能夠有選擇地展示膠原纖維和肌纖維。Masson染色的原理與陰離子染料分子的大小以及對