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什么是基因編輯技術(shù)？（下）2024/06/05

四、轉(zhuǎn)錄激活樣效應(yīng)因子核酸酶技術(shù)（TALEN）轉(zhuǎn)錄激活樣效應(yīng)（TranscriptionActivator-LikeEffector,TALE）核酸酶（Nucleases,TALENs）是一種基因編輯工具，其工作原理與鋅指核酸酶（ZFNs）類似，但是它們使用不同的DNA結(jié)合蛋白。TALEN是一種人工制造的蛋白質(zhì)，由兩部分組成：一個DNA結(jié)合域（TALE）和一個FokI核酸酶。1、TALEDNA結(jié)合域TALE蛋白是由植物病原體Xanthomonas細菌產(chǎn)生的，它們可以識別并結(jié)合到植物基因中的特定序

什么是基因編輯技術(shù)？（上）2024/06/05

一、前言每一個生命個體都是由無數(shù)精妙的生物分子共同組成的。而其中的DNA就像是生命的藍圖，DNA中的每一段特定序列，即我們所稱的基因，各自承擔(dān)著特定的生物學(xué)功能。它們共同調(diào)控著生物體的生長、發(fā)育、繁殖等一系列復(fù)雜的生命過程。然而，并非所有基因都是十全十美的，有時候，基因中的一點小小改變，就可能導(dǎo)致疾病的產(chǎn)生。但如果我們能夠像編輯文字一樣編輯這些基因，那我們就有可能修復(fù)這些錯誤，治療疾病，甚至創(chuàng)造出新的生命形式。這個想法并非遙不可及。在21世紀(jì)的今天，一種名為"基因編輯"的技術(shù)正在逐漸實現(xiàn)這個夢想

石蠟切片HE染色實驗2024/06/04

蘇木精-伊紅染色法(Hematoxylin-Eosinstaining)，簡稱HE染色法，切片技術(shù)里常用的染色法之一。蘇木精染液為堿性，主要使用細胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖著紫藍色；伊紅為酸性染料，主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色。實驗步驟：1.取樣固定取新鮮的組織樣品，加入4%多聚甲醛組織固定液的EP管中。取樣材料應(yīng)該小而薄，約黃豆粒大小。2.脫水采用梯度酒精濃度法脫水。通常選擇50%-60%-70%-90%-95%-100%的濃度梯度，各酒精濃度要求準(zhǔn)確，95%以前各步驟脫水1h，9

質(zhì)粒電泳3條帶？5條帶？一文告訴你原因2024/06/04

1.相信很多小伙伴將質(zhì)粒電泳后發(fā)現(xiàn)，質(zhì)粒不是單一條帶，而是出現(xiàn)了很多條帶，例如下圖：2.質(zhì)粒為什么出現(xiàn)這樣的情況？一般理解來說，質(zhì)粒DNA應(yīng)如圖2（左）所示的簡單環(huán)狀結(jié)構(gòu)。然而，雙鏈環(huán)狀DNA的分子軸變形或雙螺旋的扭曲，導(dǎo)致閉合環(huán)狀DNA中每個螺旋轉(zhuǎn)彎的實際堿基對數(shù)量發(fā)生變化，或者導(dǎo)致螺旋軸發(fā)生規(guī)則的空間變形，產(chǎn)生拓撲結(jié)構(gòu)，形成質(zhì)粒DNA的超螺旋性狀（圖2右）。因此，不同的拓撲結(jié)構(gòu)將使質(zhì)粒DNA形成多種形式，包括共價封閉圓形（CCC）形式、開放圓形（OC）形式（也稱為“缺口形式”）和線性形式（通

PCR凝膠電泳問題，全都總結(jié)出來了！2024/05/31

1.Marker相關(guān)問題1.1Marker不直，偏斜或拖尾原因：1.膠配制的問題，制作不均勻或有污染或瓊脂糖質(zhì)量不好；2.電泳緩沖液過于老舊，考慮更換；3.電壓太高，凝膠受熱導(dǎo)致不均勻；4.電泳槽的電極歪斜；1.2Maker跑不開原因：1.膠濃度太大；2.電泳時間太短；2.PCR產(chǎn)物相關(guān)問題2.1沒條帶原因：沒跑出來2.2條帶微弱原因：1.DNA降解2.上樣量過少3.沒跑出來，產(chǎn)物濃度過低，需再次PCR2.3非特異性擴增原因：1.引物設(shè)計不合理。需重新設(shè)計引物，balst檢測引物特異性；2.試劑

瓊脂糖凝膠電泳實驗的注意事項2024/05/31

一、瓊脂糖凝膠的特點核酸分子是兩性解離分子，在高于其等電點的電泳緩沖液中，其堿基不解離，而磷酸基團全部解離，核酸分子因而帶負電荷，電泳時向正極遷移。瓊脂糖主要從海洋植物瓊脂中提取而來并經(jīng)糖基化修飾，為一種聚合鏈線性分子，使用瓊脂糖凝膠作為電泳支持介質(zhì)，發(fā)揮分子篩功能，使得大小和構(gòu)象不同的核酸分子的遷移率出現(xiàn)較大差異，從而達到分離的目的。因此，目前多用瓊脂糖為電泳支持物進行平板電泳，其優(yōu)點如下。（1）瓊脂糖凝膠電泳操作簡單，電泳速度快，樣品不需事先處理就可以進行電泳。（2）瓊脂糖凝膠結(jié)構(gòu)均勻，含水

上科大李磊組發(fā)現(xiàn)漸凍癥治療的新機制2024/05/29

5月11日，上海科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院李磊課題組在國際學(xué)術(shù)期《分子治療》發(fā)表了題為【TheMuSKagonistantibodyprotectstheneuromuscularjunctionａndextendsthelifespaninC9orf72-ALSmice】的研究論文，報道了漸凍癥中神經(jīng)肌肉接頭受損的新機制，并發(fā)現(xiàn)了一種治療的新策略。肌退化側(cè)索硬化癥（ALS），也被成為漸凍癥，是一種嚴(yán)重危及生命的運動神經(jīng)系統(tǒng)疾病。患者由于上下運動神經(jīng)元的退行和死亡，導(dǎo)致肌肉無力、麻痹和退化，最后

記憶真會刻進DNA阿！記憶導(dǎo)致DNA損傷再修復(fù)，難怪學(xué)習(xí)【燒腦】2024/05/29

長期以來，科學(xué)家一直致力于解開大腦如何存儲和回憶記憶的謎團。海馬體，作為大腦中負責(zé)處理記憶和空間導(dǎo)航的關(guān)鍵區(qū)域，一直是研究的熱點。近期，來自美國西北大學(xué)范伯格醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)系的研究人員在Nature正刊在線發(fā)表研究論文「FormationofmemoryassembliesthroughtheDNA-sensingTLR9pathway」。該研究發(fā)現(xiàn)學(xué)習(xí)和記憶形成時會刺激大腦神經(jīng)元發(fā)生強烈的電活動，導(dǎo)致其DNA雙鏈斷裂。DNA損傷后，神經(jīng)元中的特定信號通路被激活以修復(fù)DNA損傷。正是在神經(jīng)元的DNA

復(fù)旦團隊復(fù)活冰封18個月的人腦，三體要成真了？2024/05/29

隨著類器官技術(shù)的進步，腦類器官在研究人類大腦發(fā)育、腦疾病建模和開發(fā)新藥方面顯示出巨大的潛力，腦類器官對于研究和模擬人類神經(jīng)系統(tǒng)疾病至關(guān)重要。然而，腦類器官的培養(yǎng)周期長，成本高，極大限制了它們在生物醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用。攜帶病理特征的新鮮人腦組織是研究神經(jīng)系統(tǒng)疾病更為可靠的模型。目前，具有特定病理特征的腦組織可獲取性，可操縱性以及低溫保存神經(jīng)活性都面臨很多技術(shù)難題。冷凍保存技術(shù)已在胚胎干細胞、配子、胚胎、膠質(zhì)母細胞瘤類器官、子宮內(nèi)膜器官等方面廣泛應(yīng)用，極大助力再生醫(yī)學(xué)的發(fā)展。腦類器官/腦組織是由多種神

無菌操作的注意事項（2）2024/05/28

我們這篇文章主要講述幾個常見實驗操作的注意事項。包括：擦拭、加蓋、灼燒、移液；01擦拭實驗過程中需要擦拭的對象有工作臺面、手套、瓶皿/孔板表面、耗材/器械表面。對于工作臺面，在實驗開始前，結(jié)束后都需要試用70%乙醇擦拭，如果實驗過程中出現(xiàn)液體滴落在臺面，也需要擦拭臺面后才能繼續(xù)實驗；對于手套，除了佩戴一次性滅菌處理過的手套外，整個實驗過程都應(yīng)間隔一段時間就擦拭手套一次；對于瓶皿/孔板，如果實驗過程中被拿出過生物安全柜范圍以外，那么再次放回生物安全柜或培養(yǎng)箱之前，都應(yīng)該用70%乙醇進行外表面擦拭；

無菌操作的注意事項（1）2024/05/28

細胞培養(yǎng)需要無菌技術(shù)。什么是無菌技術(shù)？它和普通的實驗操作有什么區(qū)別？首先，無菌技術(shù)是通過制定一個嚴(yán)格的操作規(guī)范來約束每個人做實驗的行為規(guī)范，從而排除潛在的污染可能。其原則就是在外部環(huán)境的微生物和細胞之間建立起一道屏障。這道屏障有兩層含義：1.讓細胞從物理上和外部非無菌的物品隔絕，不讓它們直接接觸2.設(shè)計實驗操作時，所有步驟不能讓細胞和外部非無菌環(huán)境建立直接聯(lián)系說白了，就是從各個環(huán)節(jié)、細節(jié)上去盡力做到?jīng)]有過失。實驗操作臺面在生物安全柜內(nèi)進行細胞培養(yǎng)操作，操作臺面的使用有以下注意事項：1用之前，無論

穩(wěn)定載體時，為什么載體上通常有兩個抗性基因？2024/05/28

構(gòu)建的載體上有兩個抗性基因，但一般只有一個抗性用來篩細胞。兩個抗性基因的本質(zhì)區(qū)別是什么呢？我們來看看這個例子，現(xiàn)在這個是pcDNA3.1質(zhì)粒的圖譜，載體上有兩個抗性基因，Amp（氨芐青霉素）和Neo（新霉素）。氨芐青霉素是在bla啟動子驅(qū)動下表達，bla是原核表達啟動子，在大腸桿菌可以表達，因此，轉(zhuǎn)化后的質(zhì)粒用Amp可以篩選出來。而新霉素是在SV40啟動子驅(qū)動下表達，SV40是真核表達啟動子，轉(zhuǎn)入真核細胞后表達，所以只有轉(zhuǎn)進了載體的細胞才能被篩選出來。所以，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染時，載體上的兩個抗性基因，一個

裸鼠皮下成瘤實驗2024/05/24

裸鼠皮下成瘤實驗用于研究腫瘤的形成、發(fā)展以及針對腫瘤的治療方法。裸鼠是一種缺乏免疫系統(tǒng)的小鼠品種，因此能夠更容易地接受移植的異種組織，比如人類腫瘤細胞。在這種實驗中，通常會將人類腫瘤細胞注射到裸鼠的皮下組織中，形成腫瘤。然后觀察腫瘤的生長情況、病理學(xué)特征以及對治療方法的反應(yīng)。此實驗通常用于評估潛在的抗腫瘤藥物、免疫治療方法或其他治療策略的有效性。通過在裸鼠模型中進行實驗，可以更好地理解腫瘤的生物學(xué)特性，并為臨床治療提供重要的參考依據(jù)。實驗步驟1.準(zhǔn)備工作：準(zhǔn)備對數(shù)期生長的、細胞密度達80-90%

真核表達系統(tǒng)有哪些？2024/05/24

有三種，分別是哺乳動物表達系統(tǒng)、酵母表達系統(tǒng)、昆蟲表達系統(tǒng)。哺乳動物細胞表達系統(tǒng)能誘導(dǎo)高效表達，對目的蛋白進行正確折疊，并進行復(fù)雜糖基化修飾，生產(chǎn)的蛋白活性接近于天然蛋白，不需去除內(nèi)毒素，但是實驗周期較長，操作復(fù)雜，成本高。哺乳動物細胞表達系統(tǒng)的表達方式有兩種，瞬時轉(zhuǎn)染和構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞系，應(yīng)用于不同的研究需求。哺乳動物細胞表達系統(tǒng)是基因工程藥物的生產(chǎn)平臺，適用于新基因的發(fā)現(xiàn)、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的研究，是真核系統(tǒng)中可以單獨表達復(fù)雜系統(tǒng)的蛋白。以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接

共表達抗原的工作2024/05/23

抗原間的相互關(guān)系分為三種，分別是互斥關(guān)系、子代與親代的關(guān)系和共表達關(guān)系?；コ怅P(guān)系是指兩種抗原不會同時表達在一中細胞上，即表達A不表達B，表達B不表達A。配色時，互斥的抗原是允許熒光溢漏的。子代與親代關(guān)系是指抗原之間是上下級關(guān)系，即下級抗原是在上級抗原的基礎(chǔ)上進行分析的。共表達關(guān)系是指兩種抗原同時表達在一種細胞上。配色時，共表達抗原要搭配熒光干擾較小的熒光素，盡量避免熒光溢漏。什么樣的抗原屬于共表達抗原呢？以Treg細胞為例，Treg細胞同時表達CD25和Foxp3，那么CD25和Foxp3就屬于

經(jīng)驗總結(jié)/實驗猿一定要注意的實驗室安全知識2024/05/23

一、基本實驗操作前做防護準(zhǔn)備進入實驗室第一件事情：穿白大褂，戴手套，戴口罩!!!你壓根想不到下一秒被什么溶液潑濺到，touch到什么有毒物質(zhì)或空氣中有什么懸浮/揮發(fā)性物質(zhì)，且有些藥品（如：苯、有機溶劑、汞等）會透過皮膚進入人體。1.穿戴實驗服并扣上扣子：穿戴專門的實驗服可以防止實驗物質(zhì)直接接觸到皮膚上，減少受到化學(xué)或生物物質(zhì)的傷害。實驗服應(yīng)該是長袖的，能夠全部覆蓋身體，并且易于清洗。2.戴手套：在進行生物實驗時，戴上手套可以保護雙手不受到細菌、病毒或其他有毒有害物質(zhì)的侵害。手套應(yīng)該是適合尺寸的，

瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的本質(zhì)區(qū)別是什么？2024/05/23

瞬時轉(zhuǎn)染是在短時間內(nèi)獲得目的蛋白，而穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是獲得能長期穩(wěn)定地生產(chǎn)目的蛋白的細胞株。瞬時轉(zhuǎn)染時，外源基因并沒有轉(zhuǎn)染到細胞的染色體上，而是存在于游離的載體上，可以在短時間（1-3天）內(nèi)獲得基因的表達產(chǎn)物。但是隨著細胞的不斷分裂增殖，外源基因最終會丟失，無法繼續(xù)進行重組蛋白的生產(chǎn)。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是將外源基因轉(zhuǎn)染至細胞染色體上，目的基因不會隨著細胞傳代而消失，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞株能夠長期穩(wěn)定地生產(chǎn)目的蛋白。另外，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染還能夠進行基因插入、基因敲除等編輯操作。以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈

PCR引物設(shè)計原則2024/05/23

1、引物長度一般在15-30bp引物長度一般為15-30bp，常用的為18-27bp，但不應(yīng)大于38bp，因為過長會導(dǎo)致其延伸溫度大于74°C，不適于TaqDNA聚合酶進行反應(yīng)；2、引物GC含量一般為40%-60%引物GC含量一般為40%-60%，以45-55%為宜，GC含量為高或過低都不利于引發(fā)反應(yīng)。上下游引物GC含量過高或過低都不利于引發(fā)反應(yīng)。上下游引物GC含量和Tm值要保持接近；3、引物所對應(yīng)的模版序列的Tm值最好在72°C左右Tm值在72°C左右可使復(fù)性條件最佳，至少要在55-80°C之

配膠注意事項！SDS-PAGE電泳2024/05/23

1、留意配膠試劑的有效期和清澈度，一旦發(fā)現(xiàn)沉淀或結(jié)晶，要及時更換。2、pH8.8Tris-HCL和pH6.8Tris-HCL可能會產(chǎn)生沉淀，根據(jù)需要選擇1.0M或1.5M的濃度。3、在4度下存放的10%SDS易結(jié)晶。30%丙烯酰胺需在避光的情況下存放在4度以下。APS容易失效，建議配制后分裝并冷凍保存在-20度。4、TEMED有刺鼻的氣味和揮發(fā)性，對神經(jīng)有毒，使用時請在通風(fēng)良好的環(huán)境下，并避免暴露在空氣中。5、插梳子時，可斜著插，以避免有氣泡的產(chǎn)生。6、注意防止膠條老化和干燥，注意電泳結(jié)束后，將

父親腸菌失調(diào)，或?qū)е绿荷L受限，早亡風(fēng)險大增2024/05/20

人們常言，父愛如山。父親對孩子的愛猶如高山般深沉偉岸，他的性格品質(zhì)、做事風(fēng)格與思想觀念，潛移默化地影響后代，給予其滋養(yǎng)和勇氣。傳統(tǒng)觀念里，孩子出生前，母親與胎兒因心跳相連、呼吸共通，較之父親會更加親密，對孩子的生理影響似乎更加深入。然而，大量研究顯示，父親對于胎兒的影響超乎想象，其精子以遺傳（DNA序列）和表觀遺傳（非DNA序列）物質(zhì)的形式將遺傳信息傳遞給下一代。父親攜帶的表觀遺傳信息，包括染色質(zhì)狀態(tài)、小RNA和大分子等，均有可能被孕前環(huán)境改變，并影響后代的表現(xiàn)，也就是說精子里不僅有遺傳密碼，還