臨床質譜近年來發展迅猛，許多診斷標志物都是小分子代謝物，表明代謝組學從研究到臨床轉化的路徑更快；與此同時，代謝組學近年來在生命醫學、植物學、暴露組學等研究中發揮了越來越重要的作用，幾乎每一項多組學研究的卓越成果都離不開代謝組學。在成為熱點的同時，代謝組學研究目前還存在數據庫不夠豐富、代謝流方法不夠完善、難以動態追蹤代謝過程等難點。我們就此些難點，邀請了清華大學代謝與脂質組學平臺主管劉曉蕙博士，給大家分享課題組建立的代謝流、代謝組學的獨特方法，對質譜儀器如何促進平臺建設亦分享了她的經驗，希望對廣大網友有幫助。
清華大學代謝與脂質組學平臺主管 劉曉蕙博士（采訪視頻）
代謝流研究：追本溯源 探索機理
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傳統上，通過代謝組學觀察到的信息是代謝產物的靜態含量，無法追蹤其來源。比如觀察到脂肪酸含量增加，其原因既可能是脂肪酸合成增加，也可能是其降解減慢，而研究者真正想去探究的是其過程，代謝流的研究可以很好地解決這一問題。
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總體來說，代謝流分析一般針對特定的代謝通路去研究動態變化，信息量比較受限；而生物體本身是一個非常復雜的網絡，有些信息是無法提前預估判斷的，靶向方法因此受限。基于該難點，劉曉蕙團隊發揮Thermo Scientific™ Orbitrap™高分辨質譜儀的特性，建立了一種代謝流的非靶向分析方法，從而大幅提升了分子覆蓋度。同時嘗試將Orbitrap上建立的非靶向方法轉移到Thermo Scientific™ TSQ™三重四極桿質譜系統，利用TSQ的高靈敏度特性覆蓋低豐度代謝產物。
用TSQ三重四極桿覆蓋低豐度產物，補充非靶向結果
該方法不僅實現了廣譜的代謝產物分子覆蓋度，而且兼顧了靈敏度，可覆蓋近300個低豐度代謝產物，如實現NADPH這種低豐度代謝物的分析。
賽默飛Orbitrap高分辨質譜儀和TSQ三重四極桿質譜系統
質譜核心平臺 助力科學發現
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質譜是代謝與脂質組學平臺的核心技術，平臺的工作就是結合不同的色譜和質譜技術，完成代謝與脂質組學中各種小分子的定性定量分析。平臺自建立后，參與發表或支撐的文章達200余篇，由Orbitrap和TSQ作為主力質譜為平臺發展提供了最有力的技術支撐，Orbitrap的高質量分辨率、高質量精確度為鑒定提供了很大幫助。
清華大學代謝與脂質組學平臺
2022年，清華大學與多單位合作在《科學》（Science）雜志上發表兩篇研究論文[1,2]，發現了植物中廣泛存在的兩類新型植物免疫信號分子pRib-ADP/AMP和ADPr-ATP/ADPR，可作為通用的天然免疫分子來抵御多種植物病害，劉曉蕙團隊對上述兩類小分子的鑒定作出了重要貢獻。劉曉蕙團隊與清華大學生命學院王一國實驗室合作，利用Orbitrap質譜的高分辨特性，開發了基于穩定同位素的高胰島素-正葡萄糖鉗夾實驗新方法，其成果發表于Cell Discovery上 [3]。
與賽默飛合作 探索無限可能
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代謝組學平臺已成功運行10年，劉曉蕙亦分享了平臺運行的經驗心得。首先，需要重視人員的建設和發展。對于前沿的代謝組學分析平臺，尚難以形成規范化的SOP流程，更需要個性化的方法開發，因此對于人員的依賴性較大，對于技術人員的要求較高。
其次，平臺的成功運行離不開儀器廠商的技術支持，平臺的主要儀器包括高分辨質譜儀Orbitrap IQ-X，Orbitrap Exploris 240， Q Exactive /HF/HF-X，transmit-Orbitrap質譜成像系統, 以及TSQ Altis plus /Quantiva三重四極桿液質聯用儀等。
展望平臺的未來時劉曉蕙表示：
“當前的代謝組學方法尚不夠完善，希望在現有代謝數據庫基礎上，進一步擴大數據庫；此外將發展深度學習算法來輔助建立一些未知代謝產物的數據庫，拓展組學研究深度。平臺還將開展質譜成像、單細胞組學的前沿應用。單細胞的代謝組研究前景廣闊，希望平臺可以盡早開發出一套成熟的單細胞代謝組解決方案。"
最后，劉曉蕙表達了對雙方合作的期待：
“未來，我們與賽默飛將有更大的合作空間，期望雙方能夠攜手并進，共同推進科學前沿領域的探索、推進中國科研的發展。"
劉曉蕙博士與賽默飛Orbitrap質譜儀
人物簡介
從中國科學技術大學畢業后，劉曉蕙赴美獲得印第安納大學博士學位，期間主要從事基于質譜的蛋白質組學方法開發研究，后在哈佛醫學院/布萊根醫院博士后期間，主要從事質譜影像在臨床中的應用工作。2013年，清華大學建立代謝與脂質組學平臺，劉曉蕙回國并深入參與了平臺的建設過程。
參考文獻：
1. Identification and receptor mechanism of TIR-catalyzed small molecules in plant immunity. Science. 2022 Jul 29;377(6605):eabq3297. doi: 10.1126/science.abq3297.
2. TIR-catalyzed ADP-ribosylation reactions produce signaling molecules for plant immunity. Science. 2022 Jul 29;377(6605):eabq8180. doi: 10.1126/science.abq8180.
3. Evaluation of insulin sensitivity by hyperinsulinemic-euglycemic clamps using stable isotope-labeled glucose. Yuanyuan Zhang, Lina Xu, Xiaohui Liu & Yiguo Wang, Cell Discovery volume 4, Article number: 17 (2018)
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