在分析基質復雜的樣品時,萃取過程中干擾物質容易同目標化合物一起萃取出來,這些共萃取物干擾分析。通常需采用額外的凈化步驟來對萃取液進行處理,如柱層析法、固相萃取法(SPE)、凝膠色譜法(GPC)等,以減少共萃取物的干擾。復方中藥黃連上清丸基體組成復雜,主要組成藥物17種,《中國藥典(2010版)》對黃連上清丸中的小檗堿提取采用水浴,超聲提取,濃縮提取液后過層析柱去除雜質,該方法操作復雜,耗時耗力。本方法采用In-cell cleanup ASE提取技術對復方中藥黃連上清丸進行提取凈化,取得了滿意的效果。
儀器:ASE 350, 表5-13 ASE萃取條件ASE條件 參數溶劑 甲醇溫度 140℃加熱時間 7 min靜態萃取時間 5 min循環次數 2吹掃體積 60%吹掃時間 90 s總體積 40 mL總時間 20 min前處理方法:取黃連上清丸水丸1 g,精密稱定,加入硅藻土(DE)適量,研磨,混合均勻。在萃取池(22 mL)中墊入纖維素膜,加入5 g堿性氧化鋁,填平;將混合均勻的樣品加入萃取池中,加速溶劑萃取條件參見表5-13,萃取液定容,濾過,待HPLC分析。
HPLC條件 儀器: Ultimate 3000 HPLC 分析柱:Acclaim 120 C18,5 µm,4.6×250 mm , P/N:059149;流動相:乙腈-33 mmol/L磷酸二氫鉀溶液(35:65)柱溫:30℃檢測波長:270 nm進樣量:10 µL
結果與討論In-cell cleanup凈化過程參考2010版藥典,采用堿性氧化鋁作為在線凈化吸附劑。取1 g黃連上清丸樣品,分別于萃取池底部添加不同量的堿性氧化鋁,考察堿性氧化鋁的量對凈化效果的影響。實驗結果表明:當不添加堿性氧化鋁萃取時,HPLC分析小檗堿時,小檗堿色譜峰被雜質峰覆蓋,干擾嚴重(見圖5-7、圖5-8)。當堿性氧化鋁添加量達到5 g時,樣品中小檗堿色譜峰未見干擾,采用DAD檢測器進行紫外光譜圖掃描,±50%和100%處三張光譜圖重疊良好,光譜純度因子PPI大于999.0,小檗堿色譜峰沒有雜質干擾。比較未凈化樣品和凈化樣品色譜圖,凈化樣品雜質峰明顯減少(見圖5-9,紅線圈出部分)
ASE和藥典方法比較分別采用ASE在線凈化技術和《中國藥典(2010版)》方法對同一樣品進行萃取,經HPLC分析得出結果(表5-14)。采用ASE在線凈化萃取技術提取的樣品中小檗堿含量為0.497 mg/g,標準偏差為2.6%(n=3);采用《中國藥典(2010版)》方法提取的樣品中小檗堿含量為0.474 mg/g,標準偏差為3.5%(n=3)。采用在線凈化-ASE萃取法和《中國藥典(2010版)》方法對小檗堿的萃取率接近,但在線凈化-ASE萃取法省去了藥典方法中過層析柱,濃縮等步驟,大大簡化了實驗過程,實現了萃取凈化一步到位的目的
結果討論采用In-cell cleanup ASE提取中藥復方黃連上清丸中的小檗堿,和《中國藥典(2010版)》推薦方法對小檗堿的萃取率接近,能夠去除干擾小檗堿測定的雜質,能夠達到萃取凈化一步到位,同時具有操作簡單、快速、高效等特點
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