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內標摻入 SILAC 法用于小量組織 的蛋白質組及磷酸化蛋白質組定量

閱讀:684      發布時間:2019-08-30
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非靶向蛋白質組學中有多種定量方法用于研究蛋白質表 達以及翻譯后修飾的調控,總體來說分為三類 : 非標記定 量(label free),體內代謝標記和體外化學標記。穩定 同位素氨基酸培養摻入標記(Stable Isotope Labeling by Amino acid in Cell culture, SILAC)是使用為廣泛的一種 體內代謝標記方法[1],除了能都實現對細胞系樣品實的定 量研究外,SILAC 方法還可以用于組織樣品的定量蛋白質 組學研究。通過使用合適的 SILAC 標記的細胞系樣品作為 內標,我們可以對組織樣本的全蛋白質組[2],乃至翻譯后 修飾[3] 進行系統的定量研究。

 

液相色譜儀: Easy nLC 1200(ThermoFisher Scientific) 分析柱:自制 C18 納升級噴針柱,長度 20 cm,內徑 75 µm, 粒徑 3 µm 流動相:A,0.1% 甲酸/水;B,0.1% 甲酸/80% 乙腈 梯度:0-2 min,4-8% B;2-125 min,8-28% B; 125-140 min,28-40% B;140-142 min,40-99% B; 142-150 min,99%B 流速:300 nL/min

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