小鼠膽管類器官擴增培養試劑盒
MCE 國際站：Mouse Liver Ductal Organoid (expansion) Kit
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：Basal Medium A : 4℃, 1 year. Shipping with blue ice.Supplement B (50x) & Supplement C (250x) : -20°C, 1 year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. Shipping with dry ice.
簡介：MCE 小鼠膽管類器官擴增培養試劑盒包含膽管類器官基礎培養基 A，培養添加物 B (50x) 以及培養添加物 C (250x)。該產品可有效構建小鼠膽管類器官。
概述：MCE 小鼠膽管類器官擴增培養試劑盒包含膽管類器官基礎培養基 A、培養添加物 B (50x)以及培養添加物 C (250x)。該產品可用于有效構建小鼠膽管類器官。小鼠膽管類器官可以為相關疾病的研究、藥物篩選、毒理檢測等提供有用的模型，成為推動再生醫學發展的重要工具。
描述：
• MCE 小鼠肝導管類器官試劑盒包含小鼠肝導管類器官（擴增）基礎培養基 A、小鼠肝導管類器官（擴增）補充物 B（50 倍）、小鼠肝導管類器官（擴增）補充物 C（250 倍），本產品可用于高效構建小鼠肝導管類器官。
• 小鼠肝導管類器官可用于疾病模型、器官發育、藥物篩選、個性化醫療、毒理學等多種應用，并具有在再生生物學中的應用潛力。
操作說明：1. 配制小鼠膽管類器官擴增培養基冰上結凍小鼠膽管類器官培養添加物 B、小鼠膽管類器官培養添加物 C，按下列組分配制小鼠膽管類器官培養基，充分混勻后置于冰上備用。2. 提取原代組織細胞a. 使用預冷的原代組織儲存液浸泡新鮮提取的原代小鼠肝臟組織，并置于 4°C 冰箱中暫時保存。b. 在保證無菌條件下，使用小鼠膽管類器官基礎培養基 A 或者 PBS 沖洗干凈去除脂肪或肌肉等非上皮組織成分后的原代小鼠肝臟組織，直到上清澄清。然后在細胞培養皿中用無菌剪刀將其切成盡可能小的直徑約為約 2 mm 的碎片，隨后轉移至含有 10 mL 預冷 1% FBS 小鼠膽管類器官基礎培養基 A 的 15 mL 錐形管中。c. 取適量小鼠膽管類器官基礎培養基 A 加入 FBS 制備 10% FBS 培養基，在后續步驟中，使用 10% FBS 培養基潤洗 10 mL 移液管的內表面以避免組織粘在移液管壁上。d. 用 10 mL 移液管清洗組織碎片樣品至少 10 次，靜置錐形管使樣品沉淀在底部，用 10 mL 移液管吸去上清。e. 加入適量組織消化液，消化液體積不超過錐形管體積的三分之二。在 37°C 下搖床低速孵育一定時間，一般不超過 30 分鐘，密切關注消化情況。f. 一旦導管結構出現，往組織消化混合液中加入適量 FBS 以終止消化，FBS 終濃度為 2%，然后輕輕地吹打混勻。靜置 2 分鐘，收集上清液。g. 靜置 2 分鐘，收集上清液。h. 加入 10 mL 小鼠膽管類器官基礎培養基 A，再次靜置 1-2 分鐘，收集上清液。重復該步驟 1-2 次。i. 收集到的細胞沉淀置于冰上備用。2. 構建類器官a. 在冰上將收集的原代組織細胞重懸于基質膠中，推薦重懸密度為每 50 μL 含有 200-500 個導管。建議使用基質膠原液重懸腫瘤細胞，如需稀釋，請確?；|膠體積與稀釋所用的類器官培養基體積的比例高于 2:1。b. 將混懸液迅速注入 24 孔細胞培養板的底部，盡量避免產生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細胞培養板放入 37°C，5% CO2 的培養箱中孵育 15-25 分鐘進行固化。c. 待基質膠凝固后，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 提前制備好的小鼠膽管類器官擴增培養基，避免破壞已有的凝膠結構，然后將細胞培養板放回 37°C，5% CO2 的培養箱中。d. 密切關注類器官生長狀態，每隔 3 天更換一次培養基。一般情況下，5-8 天可觀察到小鼠膽管類器官生成，并進行第一次傳代。4. 類器官傳代a. 吸去上層培養基，向孔中加入 500 μL 預冷小鼠膽管類器官基礎培養基 A，使用細胞刮刀或 1 mL 移液槍槍頭吹打從而將細胞培養孔內容物剝離出培養板并轉移至 1.5 mL EP 管內。b. 使用移液槍充分吹打混勻至類器官與基質膠分離，在室溫下以 200-250 g 離心 3 分鐘收集沉淀。隨后加入 1 mL 小鼠膽管類器官基礎培養基 A 重懸并輕柔地進行充分吹打，使類器官分散為碎片。如類器官難以吹打成碎片可使用 0.2-0. 5 mL 類器官消化液置于 37°C 培養箱中充分消化，一般不超過 3 分鐘，隨后加入 5 倍消化液體積的小鼠膽管類器官基礎培養基 A 終止消化。c. 在室溫下以 200-250 g 離心 3 分鐘。離心完畢，棄上清，用小鼠膽管類器官基礎培養基 A 或 PBS 清洗 1-2 次后備用。d. 在冰上將收集的細胞重懸于基質膠中，推薦重懸密度為每 50 μL 含有 200-500 個導管。建議使用基質膠原液重懸腫瘤細胞，如需稀釋，請確?；|膠體積與稀釋所用的類器官培養基體積的比例高于 2:1。e. 將混懸液迅速注入 24 孔細胞培養板的底部，盡量避免產生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細胞培養板放入 37°C，5% CO2 的培養箱中孵育 15-25 分鐘進行固化。f. 待基質膠凝固后，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 預熱的小鼠膽管類器官擴增培養基，避免破壞已有的凝膠結構，然后將細胞培養板放回 37°C，5% CO2 的培養箱中。g. 密切關注類器官的生長狀態，記錄多個視野中的膽管類器官的形態和分布。
注意事項：1. 配制后的培養基不建議在 4°C 冰箱中放置超過 2 周。2. 提取原代組織細胞時需保持全程無菌，避免造成后續實驗污染。3. 類器官傳代消化時需時刻觀察碎片狀態，出現小細胞團（10-50 個細胞）時應終止消化，避免時間過長影響類器官后續生長活力。4. 基質膠操作需全程保持低溫避免凝膠，與細胞重懸后應將其迅速注入細胞培養孔內，盡量避免產生氣泡。5. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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