人膽管類器官擴增培養(yǎng)試劑盒
MCE 國際站：Human Liver Ductal Organoid (expansion) Kit
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：Basal Medium A : 4℃, 1 year. Shipping with blue ice.Supplement B (50x) & Supplement C (250x) : -20°C, 1 year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. Shipping with dry ice.
簡介：MCE 人膽管類器官擴增培養(yǎng)試劑盒包含膽管類器官基礎培養(yǎng)基 A 以及培養(yǎng)添加物 B (50x) 和培養(yǎng)添加物 C (250x)。該產品可有效構建人膽管類器官。
概述：MCE 人膽管類器官擴增培養(yǎng)試劑盒包含人膽管類器官基礎培養(yǎng)基 A、培養(yǎng)添加物 B (50x) 和培養(yǎng)添加物 C (250x)。該產品可用于從膽管細胞有效構建人肝膽管類器官。構建人膽管類器官可以為相關疾病的研究、藥物篩選、毒理檢測等提供有用的模型，成為推動再生醫(yī)學發(fā)展的重要工具。
描述：
• MCE 人肝導管類器官試劑盒包含人肝導管類器官基礎培養(yǎng)基 A、人肝導管類器官補充劑 B (50x)、人肝導管類器官補充劑 C (250x)。本產品可用于高效構建人肝導管類器官。
• 人肝導管類器官可用于疾病建模、器官發(fā)育、藥物篩選、個性化醫(yī)療、毒理學等各種應用，并具有在再生生物學中的應用潛力。
操作說明：1. 配制人膽管類器官擴增培養(yǎng)基冰上解凍人膽管類器官培養(yǎng)添加物 B、人膽管類器官培養(yǎng)添加物 C，按下列組分配制人膽管類器官培養(yǎng)基，充分混勻后置于冰上備用。2. 提取原代組織細胞a. 使用預冷的原代組織儲存液浸泡新鮮提取的原代人肝臟組織，并置于 4°C 冰箱中暫時保存。b. 在保證無菌條件下，使用人膽管類器官基礎培養(yǎng)基 A 或者 PBS 沖洗干凈去除脂肪或肌肉等非上皮組織成分后的原代人肝臟組織，直到上清澄清。然后在細胞培養(yǎng)皿中用無菌剪刀將其切成盡可能小的直徑約為約 2 mm 的碎片，隨后轉移至含有 10 mL 預冷 1% FBS 人膽管類器官基礎培養(yǎng)基 A 的 15 mL 錐形管中。c. 取適量人膽管類器官基礎培養(yǎng)基 A 加入 FBS 制備 10% FBS 培養(yǎng)基，在后續(xù)步驟中，使用 10% FBS 培養(yǎng)基潤洗 10 mL 移液管的內表面以避免組織粘在移液管壁上。d. 用 10 mL 移液管清洗組織碎片樣品至少 10 次，靜置錐形管使樣品沉淀在底部，用 10 mL 移液管吸去上清。e. 加入適量組織消化液，消化液體積不超過錐形管體積的三分之二。在 37°C 下搖床低速孵育一段規(guī)定的時間，一般不超過 30 分鐘，密切關注消化情況。f. 一旦導管結構出現，加入終濃度為 2% 的 FBS 停止消化，然后輕輕地吹打混勻。靜置 2 分鐘，收集上清液。g. 加入 10 mL 人膽管類器官基礎培養(yǎng)基 A，再次靜置 1-2 分鐘，收集上清液。h. 使用低溫離心機將收集到的上清液在 4°C 溫度下以 300 g 離心 3 分鐘后收集細胞沉淀。加入 10 mL 人膽管類器官基礎培養(yǎng)基A重懸，重復該離心步驟 1-2 次，收集細胞沉淀。2. 構建類器官a. 在冰上將收集的原代組織細胞重懸于基質膠中，推薦重懸密度為每 50 μL 含有 200-500 個導管。建議使用基質膠原液重懸腫瘤細胞，如需稀釋，請確保基質膠體積與稀釋所用的類器官培養(yǎng)基體積的比例高于 2:1。b. 將混懸液迅速注入 24 孔細胞培養(yǎng)板的底部，盡量避免產生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細胞培養(yǎng)板放入 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中孵育 15-25 分鐘進行固化。c. 待基質膠凝固后，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 提前制備好的人膽管類器官擴增培養(yǎng)基，避免破壞已有的凝膠結構，然后將細胞培養(yǎng)板放回 37°C，5% CO2的培養(yǎng)箱中。d. 密切關注類器官生長狀態(tài)，每隔 3 天更換一次培養(yǎng)基。一般情況下，5-8 天可觀察到人膽管類器官生成，并進行第一次傳代。4. 類器官傳代a. 吸去上層培養(yǎng)基，向孔中加入 500 μL 預冷人膽管類器官基礎培養(yǎng)基 A，使用細胞刮刀或 1 mL 移液槍槍頭吹打從而將細胞培養(yǎng)孔內容物剝離出培養(yǎng)板并轉移至 1.5 mL EP 管內。b. 使用移液槍充分吹打混勻至類器官與基質膠分離，200-250 g 離心 3 分鐘收集沉淀。隨后加入 1 mL 人膽管類器官基礎培養(yǎng)基 A 重懸并輕柔地進行充分吹打，使類器官分散為碎片。如類器官難以吹打成碎片可使用 0.2-0.5 mL 類器官消化液置于 37°C 培養(yǎng)箱中充分消化，一般不超過 3 分鐘，隨后加入 5 倍消化液體積的人膽管類器官基礎培養(yǎng)基 A 終止消化。 c. 在室溫下以 200-250 g 離心 3 分鐘。離心完畢，棄上清，用人膽管類器官基礎培養(yǎng)基 A 或 PBS 清洗 1-2 次后備用。d. 在冰上將收集的細胞重懸于基質膠中，推薦重懸密度為每 50 μL 含有 200-500 個導管。建議使用基質膠原液重懸腫瘤細胞，如需稀釋，請確保基質膠體積與稀釋所用的類器官培養(yǎng)基體積的比例高于 2:1。e. 將混懸液迅速注入 24 孔細胞培養(yǎng)板的底部，盡量避免產生氣泡，每孔注入 25-35 μL 混懸液。隨后將細胞培養(yǎng)板放入 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中孵育 15-25 分鐘進行固化。f. 待基質膠凝固后，在每個孔邊緣緩慢注入 500 μL 預熱的人膽管類器官擴增培養(yǎng)基，避免破壞已有的凝膠結構，然后將細胞培養(yǎng)板放回 37°C，5% CO2 的培養(yǎng)箱中。g. 密切關注類器官的生長狀態(tài)，記錄多個視野中的膽管類器官的形態(tài)和分布。
注意事項：1. 配制后的培養(yǎng)基不建議在 4°C 冰箱中放置超過 2 周。2. 提取原代組織細胞時需保持全程無菌，避免造成后續(xù)實驗污染。3. 類器官傳代消化時需時刻觀察碎片狀態(tài)，出現小細胞團（10-50 個細胞）時應終止消化，避免時間過長影響類器官后續(xù)生長活力。4. 基質膠操作需全程保持低溫避免凝膠，與細胞重懸后應將其迅速注入細胞培養(yǎng)孔內，盡量避免產生氣泡。5. 本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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