慢病毒轉染試劑
MCE 國際站：Lentivirus Transfection Reagent
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：20°C，1 年避免反復凍融
簡介：MCE Lentivirus Transfection Reagent 是一種基于陽離子高分子聚合物的新型轉染試劑，適用于慢病毒的包裝、轉染，能顯著提高包裝、轉染效率，并能產生更多的重組慢病毒。
概述：慢病毒載體是以 HIV-1 為基礎的基因治療載體，能使外源基因穩定整合至宿主細胞基因組中，具有感染譜廣泛、有效感染分裂期和靜止期細胞、長期穩定表達外源基因等優點，因此成為導入外源基因的有力工具，廣泛應用于各種細胞系的基因過表達、RNA 干擾、microRNA 研究及活體動物實驗等。MCE Lentivirus Transfection Reagent 是一種基于陽離子高分子聚合物的新型轉染試劑，適用于慢病毒的包裝、轉染，能顯著提高包裝、轉染效率，并能產生更多的重組慢病毒。經轉染包裝獲得的對照質粒病毒滴度可達 108 TU/mL，具有感染效率高、感染譜廣、重復性高及操作簡便等優點。
描述：
慢病毒載體是基于HIV-1的基因治療載體，可將外源基因穩定整合到宿主細胞基因組中，具有感染譜廣、有效感染及分裂期長、細胞靜止、外源基因長期穩定表達等優點，已成為導入外源基因的有力工具，廣泛應用于各類細胞系基因過表達、RNA干擾、microRNA研究及動物體內實驗等。
MCE慢病毒轉染試劑是一種基于陽離子聚合物的新型轉染試劑，適用于慢病毒的包裝轉染，顯著提高包裝轉染效率，從而產生更多的重組慢病毒，轉染包裝得到的對照質粒病毒滴度可達108 TU/mL，具有感染效率高、感染譜廣、重復性好、操作簡便等優點。
操作說明：以 10 cm 細胞培養皿為例，其它培養體系加樣體積參照表 1。1.準備待轉染細胞轉染前一天，將 4-6 × 106 個細胞 (293、293T等) 接種至 10 cm 細胞培養皿中培養，使其在包裝時密度為 70%-80%。注：為提高病毒包裝效率，建議使用生長狀態良好且生長處于指數期、存活率 > 90% 的細胞進行慢病毒包裝。2.慢病毒包裝(1)取 4 μL 慢病毒包裝輔助質粒混合物至 2 mL 離心管中，加入 4 μg 含有目的基因的慢病毒載體質粒，輕柔混勻，加入 40 μL MCE Lentivirus Transfection Reagent 與質粒混合，室溫孵育 3 min。(2)加入 1.8 mL 無血清基礎培養基，輕柔混勻，室溫孵育 30 min，即形成轉染試劑-核酸復合物。注：轉染試劑-核酸復核物在室溫下 4 h 內保持穩定。(3)將轉染試劑-核酸復合物 (1.8 mL) 逐滴均勻加入細胞中，輕柔混勻，置于 37°C 5% CO2 培養箱中培養。注：注意在滴加時緩慢，避免將細胞沖起，需輕柔混合均勻。3.收獲病毒(1)轉染 24 h 后，棄去初始病毒上清液，加入 10-15 mL 新鮮的培養基（含血清），置于 37°C 5% CO2 培養箱中繼續培養。(2)轉染 48 h 后，收集病毒上清液，再加入 10-15 mL 新鮮的培養基（含血清），置于 37°C 5% CO2 培養箱中繼續培養。(3)轉染 72 h 后，觀察細胞狀態并拍照，并收集病毒上清液，與 48 h 收集的上清液混合，800 × g 離心 10 min 以去除細胞碎片，使用 0.45 μm 濾器過濾，過濾后的上清液可直接感染目的細胞，或對其濃縮以獲得更高滴度的慢病毒濃縮液。注：凍融一次的病毒滴度將降低 10%-20%，慢病毒建議分裝后保存于 -80°C，并于半年內使用，切忌反復凍融。注：細胞轉染時，可根據實際情況參考上表進行等倍放大。4.慢病毒滴度檢測分析使用梯度稀釋法感染細胞，采用 PCR、qPCR 等方法測定病毒滴度
注意事項：1.轉染時，建議選用無內毒素、純度高、無污染、無菌的優質質粒。質粒中的內毒素會導致轉染效率顯著下降，特別是內毒素敏感的細胞（如原代細胞、懸浮細胞、造血細胞等），推薦使用無內毒素質粒抽提試劑盒進行質粒提取，保證質粒 A260/A280 比值在 1.8-2.0 之間，濃度不低于 500 ng/μL。2.需合理計算質粒用量，轉染過量的質粒可能會導致細胞死亡。3.細胞狀態會影響轉染效率，從而影響慢病毒質量，建議使用生長處于指數期、存活率大于 90% 的細胞進行慢病毒包裝。避免細胞培養基有細菌、真菌或支原體的污染，盡量使用傳代次數較少的細胞，如果細胞是剛復蘇的話，最好傳兩代之后再包裝。4.建議細胞傳代后 12-24 h 內、細胞密度在 70%-80% 時進行慢病毒包裝。在實驗過程中保證相同的接種條件，確保實驗數據的可重復性。5.MCE Lentivirus Transfection Reagent 可用于含有血清培養基的轉染，并且轉染前后不需要更換培養基。6.由于血清會影響-轉染試劑復合物的形成，因此在準備轉染復合物時需用無血清培養基稀釋 DNA 及轉染試劑。7.所有慢病毒操作均需在 BSL2 級生物安全柜中進行，慢病毒轉染操作中涉及的槍頭、培養基等廢棄物，必須處理后才能丟棄。8.本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作
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