PEI 轉染試劑
MCE 國際站：PEI Transfection Reagent
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件： -20°C，12個月避免反復凍融
簡介：MCE PEI 轉染試劑是一款基于 25 kDa PEI 改造的 DNA 轉染試劑。可廣泛應用于多種細胞系的 DNA 轉染，包括 HEK-293、HEK-293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2 和 HeLa 細胞等，也可應用于大規模重組蛋白表達和病毒生產等領域。
概述：PEI 是基因轉染中常用的高分子載體。PEI 是一種帶正電荷的陽離子聚合物，極易與帶負電的核酸分子結合形成復合物，該復合物再與細胞表面帶負電荷的蛋白多糖相互作用，通過胞吞作用進入細胞。MCE PEI Transfection Reagent 是一種基于分子量 25 kDa PEI 的 DNA 轉染試劑，通過引入可特異性結合 DNA 的功能基因對 PEI 進行改性，顯著增強了 PEI 和 DNA 的結合能力，并且降低了細胞毒性。另外，通過功能性優化顯著增強了 PEI 的細胞攝取、內涵體逃逸等功能。MCE PEI Transfection Reagent 具有細胞毒性小、轉染效率高、穩定性強及操作簡便等優點，在多種細胞系中都能實現高效、低毒的 DNA 轉染，包括 HEK-293、HEK-293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2 和 HeLa 等細胞。高性價比使其可廣泛用于大規模重組蛋白表達和病毒生產等工業領域。
描述：
聚乙烯亞胺是基因轉染中常用的聚合物載體，由陽離子聚合物組成，可將核酸導入真核細胞。在聚合物轉染中，外源DNA與陽離子聚合物形成復合物，通過內吞作用進入宿主細胞。
MCE PEI轉染試劑是在25kDa PEI的基礎上設計而成，通過引入功能基因進行修飾，增強DNA的結合能力，降低細胞毒性，同時修飾后的PEI的細胞攝取和內體逃逸功能明顯增強。
MCE PEI轉染試劑高效、低毒、穩定性強，適用于HEK-293、HEK-293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和HeLa等多種細胞，甚至適用于一些難以轉染的細胞。還可應用于大規模重組蛋白表達和病毒生產。
操作說明：1. 準備待轉染細胞1.1 貼壁細胞：轉染前一天，將胰酶消化后的細胞進行鋪板 (0.3-2 × 105 個細胞/孔)，至細胞密度達到 60-70% 進行細胞轉染1.2 懸浮細胞：轉染當天，配制轉染試劑-DNA 復合物之前，先進行細胞鋪板，每 500 μL 生長培養基中加入 2-5 × 105 個細胞。注：為提高轉染效率，建議使用生長狀態良好且生長處于指數期、存活率 >90% 的細胞進行轉染。2. 準備轉染試劑-核酸復合物2.1 取 1 μg 質粒 DNA 至 1.5 mL EP 管中，加入 50 μL 無血清培養基（與培養體系一致，無血清無雙抗），輕柔混勻。2.2 取 2.5 μL PEI Transfection Reagent 轉染試劑加入到另一個 1.5 mL EP 管中，加入 50 μL 無血清培養基（與培養體系一致，無血清無雙抗）輕柔混勻。注：a) 通常情況下，DNA (μg) 和 PEI Transfection Reagent (μL) 的用量比例為 1:2.5。為提高轉染效果，可在 1:1-1:5 范圍內調整以優化轉染效果。b) 最佳轉染條件因細胞類型和培養條件不同而有所區別，可做預實驗摸索最佳轉染比例。2.3 將 2.1 轉移至 2.2 中，輕柔混勻（總體積為 100 μL），室溫孵育 30 min，即形成轉染試劑-核酸復合物。注：該轉染試劑-核酸復合物在室溫下 4 h 內仍保持穩定。注： 細胞轉染時，可根據實際情況參考上表進行等倍放大。3. 細胞轉染將上述轉染試劑-核酸復合物 (100 μL) 加入每孔細胞，輕柔混勻，將細胞放回培養箱中繼續培養。4. 分析轉染細胞轉染細胞培養 36-48 h 后，可使用熒光檢測法、Western Blot、ELISA、RT-PCR、流式細胞術、報告基因等檢測轉染效果，或加入篩選藥物進行穩定細胞株的篩選。
注意事項：1. 轉染時，建議選用高純度、無菌、無污染、無內毒素的優質的質粒 DNA。質粒中內毒素會導致轉染效率顯著下降，推薦配合選用 MCE 質粒大量抽提試劑盒 ，提取質粒純度更高，柱上去除內毒素，操作簡便。2. 細胞狀態會極大影響轉染效率，為提高轉染效率，建議使用生長狀態良好且生長處于指數期、存活率 >90% 的細胞進行轉染。3. 轉染過程中，抗生素的存在可能導致轉染效率降低及細胞毒性，不建議在轉染培養基中添加抗生素。4. 影響轉染效率的因素有很多，如細胞類型、細胞狀態及密度、核酸質量及濃度、轉染試劑與核酸比例等，建議先做預實驗摸索最佳轉染條件。5. 血清會對轉染效果產生一定程度的干擾，為提高轉染效率，轉染過程中，建議使用無血清培養基。6. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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