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重組酶聚合酶擴增技術(RPA)凍干簡介

閱讀:77      發布時間:2025-3-31
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重組酶聚合酶擴增技術(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)能夠在 恒溫條件下(37℃-42℃)實現對核酸的快速特異性擴增,且在20min內可將核酸擴增至可檢 測水平,具有良好的可操作性,能夠在非實驗室條件下完成核酸檢測,被稱為是具有可替代PCR潛力的核酸檢測技術,且可以和瓊脂糖凝膠檢測、熒光檢測技術結合實現實時、快速甚至定量檢測。常溫等溫,是指維持在某一特定的溫度,溫度為22-42℃,接近常溫,溫度保持恒定,因為這種反應對設備的要求比較低,更適合應用于POCT或者即時診斷

常規的RPA檢測試劑需低溫保存、運輸,并且反復凍融會影響性能的穩定。因此,開發常溫下穩定保存、便于運輸的試RPA劑至關重要。將RPA檢測試劑制備成為凍干試劑是解決上述問題的可行思路。然而,RPA與CRISPR檢測試劑是一種成分復雜的組合物,特別是凍干的RPA試劑與凍干的CRISPR試劑再反應過程中會混合為一個體系,其成分進一步復雜化,包含DNA、RNA和酶、凍干成分等物質。因而,在開發具體的檢測試劑過程中,如何改進凍干試劑的組成,特別是如何設置凍干保護劑的組成,進而保證檢測試劑的穩定性,避免其性能降低,這是一個重要的問題。

RPA試劑包含緩沖液,重組酶、DNA 聚合酶、逆轉錄酶、dNTP 、ATP和PEG 35000等。在常溫下實現反應。

   1. 緩沖液:緩沖液是RPA試劑中常見的成分之一,它有助于維持反應體系的pH值穩定,從而確保反應的準確性和可靠性。

2. 酶:酶是RPA試劑中的關鍵成分,包含重組酶,DNA聚合酶、逆轉錄酶等,它們負責催化特定的化學反應。

3. 引物:引物是用于PCR(聚合酶鏈式反應)等反應的特異性DNA片段,它們幫助擴增目標DNA序列。包括一對或者多對引物。

4. 熒光染料:用于實時PCR等需要熒光檢測的技術中,幫助實時監測反應進程。

由于RPA試劑包含多重成分,成分復雜,如各種酶,相互耐受溫度,環境都不一樣,保存條件很苛刻,而凍干成為解決保存的方法之一。凍干法是采用低溫升華的方法,這種情況下不改變物質的特性,降低到很低的含水量,鎖住物質本身的活性,復溶后恢復活性,獲得液體狀態下或者物質本身的新鮮狀態。而RPA試劑凍干不同于常規的PCR試劑,由于其成分復雜,因此凍干保護劑和凍干曲線需要摸索。我公司在開發過程中建立了各種試劑的凍干保護體系和凍干曲線,購買任意一款硅油循環凍干機,我公司都可以提供免費的凍干技術協助。歡迎資料RPA凍干試劑凍干設備,凍干微球成型儀,微球分裝機。


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