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目錄:上海牧榮生物科技有限公司>>實驗試劑>>試劑盒>> 土壤外切β1,4葡聚糖酶/纖維二糖水解酶(SC1)測試盒

土壤外切β1,4葡聚糖酶/纖維二糖水解酶(SC1)測試盒
  • 土壤外切β1,4葡聚糖酶/纖維二糖水解酶(SC1)測試盒
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更新時間:2024-05-07 11:56:40瀏覽次數:436評價

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土壤外切β1,4葡聚糖酶/纖維二糖水解酶(SC1)測試盒

微量法 100管/48樣

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

C1(EC3.2.1.91)存在于細菌、真菌和動物體內,是纖維素酶系的組份之一,C1催化多聚糖鏈的末端非還原端釋放出纖維二糖和葡萄糖。

測定原理:

采用3,5-二硝基水楊酸法測定S-C1催化微晶纖維素降解產生的還原糖的含量。

需自備的儀器和用品:

酶標儀/可見分光光度計、水浴鍋、離心機、可調式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;

試劑一:液體6mL×1瓶,4℃保存;

試劑二:液體25mL×1瓶,4℃保存;

樣品測定的準備: 

稱取約0.1g新鮮土樣或風干土樣,加入1mL提取液,進行冰浴勻漿,室溫振蕩提取30min,然后10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

測定步驟:

  1. 分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至540nm,蒸餾水調零。

2、加樣表(在EP管中依次加入下列試劑):

試劑名稱(μL)

測定管

對照管

  樣本

10

10

試劑一

100


蒸餾水


100

混勻,37℃準確水浴2h

試劑二

200

200

混勻, 90℃水浴10min(蓋緊,防止水分散失),冷卻后,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,測540nm下吸光值A,計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需設一個對照管。

S-C1活性計算

  1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為y = 6.4078x - 0.0673;x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值。

單位的定義:每g土樣每分鐘催化產生1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

S-C1活力(μg /min /g鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T

=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W

1000:1mg/mL=1000ug/mL;V反總:反應體系總體積,0.11mL; V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,120 min; W:樣本質量,g;

 b.96孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為y = 3.2039x - 0.0673;x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值。

單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1μg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。

S-C1活力(μg /min /g鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T

=28.61×(ΔA+0.0673) ÷W

1000:1mg/mL=1000ug/mL;V反總:反應體系總體積,0.11mL; V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,120 min; W:樣本質量,g。


上海牧榮生物科技有限公司

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