當前位置:南京億迅生物科技有限公司>>技術文章>>你知道單克隆抗體和多克隆抗體的區別嗎?
一、什么是抗體?
機體受抗原刺激后,由淋巴系統的細胞(主要是B淋巴細胞分化后的漿細胞)產生具有特異性免疫功能球蛋白,即抗體。抗體蛋白是一個由四條多肽鏈(兩條重鏈,兩條輕鏈)而組成的Y型分子。該Y型結構的兩個頂端處各含有一個抗體結合部位(paratope, 可以理解成是一把“鎖“)。每一種抗體結合部位可以特定地結合一種抗原表位(epitope, 可以理解成針對某一把“鎖"的 “鑰匙")。抗體結合表位與抗原表位這種特異對應關系是抗體與抗原高特異性結合的基礎。抗體在醫藥研發中有非常廣泛的應用。目前主要有兩大類的抗體:單克隆抗體(monoclonal antibody, Mabs)和多克隆抗體(polyclonal antibody, Pabs)
二、單克隆抗體和多克隆抗體有什么區別?
1.定義的區別:
克隆:指無性繁殖,即由同一個祖先細胞分裂繁殖而形成的純細胞系,該細胞系中每個細胞的基因彼此相同。
單克隆抗體(monoclonal antibody,mAb):是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體,稱為單克隆抗體。
多克隆抗體(polyclonal antibody, pAb):顧名思義,由多種抗原決定簇刺激機體,相應地就產生各種各樣的單克隆抗體,這些單克隆抗體混在一起就是多克隆抗體。簡言之,多克隆抗體就是用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動物,刺激機體多個B細胞克隆產生針對多種抗原表位的不同抗體的混合物。
2.性質上的區別:
特異性:
多克隆抗體猶如許多單克隆抗體的集合,它們有的特異性高,有的特異性低,總體特異性符合正態分布曲線的形式,而其特異性的總體表現也應處于統計學正態曲線中位線(MID)的水平。而單抗制備后續的篩選過程,可去除大部分的非特異抗體,保留幾株特異性較好的單克隆抗體。
一般而言,單克隆抗體具有更高的特異性。多抗特異性可通過生產環節比如使用高純度的免疫原,以及使用提純的靶點蛋白對多抗進行免疫親和層析純化等方法得以改進。經過免疫親和層析的多抗其總體特異性將大大提升,與單抗相比已相差無幾。
交叉反應:
抗原與抗體結合的特異性,是指某一抗原表位與相應抗體結合的特異性。這種結合的分子機制是抗原表位的空間結構與抗體分子超變區互補的結果。而交叉反應是指兩種抗原分子表面存在有相同或相似的抗原表位時,與同一種抗體結合的現象。因此,交叉反應實質上也是抗原與抗體的特異性結合。
單克隆抗體僅針對目標抗原某一特定抗原表位,特異性高,存在有相同或相似的抗原表位幾率低,出現交叉反應的幾率也就低。
多克隆抗體針對目標抗原多個抗原表位,特異性低,具有生物物理多樣性,存在有相同或相似的抗原表位幾率高,出現交叉反應的幾率也就較高。
假陽性:
根據抗體最核心的表位結合區域—互補決定區(Complementarity Determining Region,CDR)的結構,抗體通常可以緊密結合的抗原表面區域或表位面積很小,對于變性的肽段約在4-8個Aa以內,以及5-7個單糖的糖鏈或6-8個核苷酸的核酸。通過肽段BLAST可以得知,小肽段序列相同的情況將在很多不同蛋白上發生。這意味著單抗識別的這個表位可能并不僅僅屬于靶標蛋白本身,也即意味著,即使利用純化抗原蛋白進行了特異性篩選的單克隆抗體,當用其檢測復雜樣本時,也將面臨交叉反應或假陽性問題。
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