Cas13a檢測系統用RNA Biotin和FAM標記探針上海惠誠生物現貨供應

CRISPR_Cas核酸酶主要包括兩類：一類是RNA引導下可以切割RNA鏈的Cas13a和Cas13b；另一類是RNA引導下可以切割DNA鏈的Cas12a和Cas14。Cas12a和Cas13都有一個共同特點，除了切割靶向DNA或RNA序列之外，還可以切割其他DNA或RNA序列，但是Cas13酶的這種附加切割能力比Cas12a要強。

Cas13a與Cas9最大的區別在于Cas13a結合并切割RNA，而Cas9切割DNA。從結構上來看，Cas13a含有兩個HEPN結構域，而Cas9用HNH和RuvC結構域來切割DNA目標。HEPN結構域對Cas13a切割RNA目標是必需的。另外，與Cas9類似，Cas13a分子中關鍵殘基的突變可以形成核酸酶活性缺失的Cas13a（dCas13a），它能夠結合RNA目標但無法切割。

Crispr Cas13a核酸酶（又名 C2c2）是依賴于RNA介導的RNA內切核酸酶。在靶標單鏈 RNA 存在 PFS序 列的情況下，可特異地切割靶標 RNA。此外，Cas13a還具有依賴于靶標單鏈RNA的反式切割活性 （即，旁路切割活性），可用于開發靶標核酸的快速檢測試劑盒。例如，MIT 的張鋒團隊便利用Cas13a 蛋白開發了名為“SHERLOCK"的下一代分子診斷系統。SHERLOCK 所使用的 Cas13a 蛋白識別靶標RNA并反式切割 RNA報告探針。

RNA標記是將標記物（如放射性同位素、熒光素或酶）共價地連接到RNA，通過檢測標記物，進而實現對RNA鑒別和檢測的目的。RNA標記在分子探針領域應用廣泛，在疾病診斷方面也很有前景。用生物(空格)素標記RNA的方法常見的是用生物(空格)素與UTP結合形成Biotin-UTP，以Biotin-UTPATP、CTP、GTP為底物通過RNA聚合酶SP6、T7等經體外轉錄合成標記RNA。FAM是常用的熒光基團，連接在Taqman探針的5’末端。

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