Cas14a檢測(cè)系統(tǒng)用DNA熒光-淬滅標(biāo)記熒光探針上?；菡\(chéng)生物現(xiàn)貨供應(yīng)

Cas14a核酸酶是一種內(nèi)切核酸酶，其在tracrRNA:crRNA（或sgRNA）的引導(dǎo)下，特異結(jié)合并切割靶標(biāo)ssDNA，且無(wú)需PAM位點(diǎn)。相比于其他的Cas蛋白，Cas14蛋白的分子量普遍較?。?00-700aa）；與Cas12類似，Cas14a也可以結(jié)合靶標(biāo)核酸并激活其ssDNA反式切割活性，從而被應(yīng)用于靶標(biāo)核酸的分子檢測(cè)；與Cas12不同的是，Cas14a只能結(jié)合ssDNA靶標(biāo)，因此經(jīng)過(guò)擴(kuò)增富集的靶標(biāo)核酸需使用T7核酸外切酶進(jìn)行處理，且其中一條擴(kuò)增引物需要使用磷硫?；揎椧源_保T7核酸外切酶僅切割其中一條鏈，從而留下ssDNA靶標(biāo)鏈以用于Cas14a介導(dǎo)的分子檢測(cè)。

Cas14a酶的附加DNA酶切功能，可以切割特定單鏈DNA探針（熒光和淬滅標(biāo)記），使用5'端帶有熒光物質(zhì)（如：FAM等)，3'端帶有淬滅物質(zhì)（如:BHQ1等）的雙標(biāo)記熒光探針進(jìn)行熒光檢測(cè)的方法。當(dāng)探針完整時(shí)，5'端的熒光物質(zhì)受到3'端的淬滅物質(zhì)的制約，不能發(fā)出熒光。而當(dāng)雙標(biāo)記熒光探針被分解后，5'端的熒光物質(zhì)便會(huì)游離出來(lái)，發(fā)出熒光，實(shí)現(xiàn)核酸檢測(cè)。RPA擴(kuò)增的雙鏈DNA，在crRNA的引導(dǎo)下Cas12a可以切割雙鏈模板DNA和熒光標(biāo)記探針，探針被水解后釋放出熒光信號(hào)，通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)便可知道是否有DNA模板。

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