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羊布氏桿菌抗體elisa檢測試劑（酶聯免疫）

羊布氏桿菌抗體elisa檢測試劑（酶聯免疫）

【包裝規格】 96T×1/盒、96T×2/盒

【預期用途】 布魯氏菌病是由布魯氏菌（Brucella）引起的人、畜共患傳染病，其特征是生殖器官和胎膜炎，引起流產、不育和各種組織的局部病灶。

本試劑用于檢測羊血清中布魯氏桿菌抗體，可用于布魯氏菌疫苗免疫效果評價。

【原    理】

    本試劑盒系由預包被布魯氏菌抗原的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯免疫法（ELISA）原理檢測羊血清、血漿樣本中布魯氏菌抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本，經溫育后若樣品中含有布魯氏菌抗體，則將與酶標板上抗原結合，經洗滌除去未結合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有布魯氏菌抗體。

【試劑盒組成】

【儲存及有效期】 于2～8℃避光保存，有效期為12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。

【樣品準備】

1.取動物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻，置37℃反應30分鐘。

5.扣去孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，拍干。

6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值），無參比波長用空白孔調零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。

【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照≤0.15，陽性對照≥0.6。

【檢驗結果的解釋】

1. 樣品A值≥0.38為陽性；樣品A值＜0.38為陰性。

2.本實驗結果為陰性時表明羊只抗體水平不足，建議補打相應疫苗。

【試驗方法的局限性】

    該試驗僅作為定性檢測羊血清、血漿中布魯氏菌抗體，根據A值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。