單細(xì)胞分選通過細(xì)胞識別、細(xì)胞挑取和細(xì)胞轉(zhuǎn)移、跟蹤實(shí)時(shí)分析四個(gè)步驟可以實(shí)現(xiàn)對懸浮體系中任何單一類型細(xì)胞或稀有細(xì)胞(如循環(huán)腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞以及血液、骨髓中相關(guān)細(xì)胞等)的抓取分離、分析,細(xì)胞可以轉(zhuǎn)移到PCR管等后續(xù)實(shí)驗(yàn)裝置。
利用流式細(xì)胞分選技術(shù)進(jìn)行的單細(xì)胞分選,具有精度高、通量大、分選參數(shù)多,成本相對低等優(yōu)點(diǎn),通過流式分選出足夠多的符合要求的單細(xì)胞進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)并沒有那么容易。
一、下面三方面是要考慮的問題:
1、活性
細(xì)胞活性狀態(tài)對后續(xù)實(shí)驗(yàn)而言很重要,就拿轉(zhuǎn)錄組分析為例,無論是RNA-Seq還是高通量表達(dá)譜芯片技術(shù),都需要高質(zhì)量的RNA樣本,細(xì)胞活性不好或死細(xì)胞會(huì)直接導(dǎo)致RNA降解,實(shí)驗(yàn)無法繼續(xù)。
2、精度
流式分選是精密度高的儀器,稍稍不同的參數(shù)(激光、液流等)的設(shè)置都會(huì)直接造成結(jié)果偏差;另外既然是想研究單細(xì)胞,那么就得確保分選得到的確為單個(gè)細(xì)胞,否則同樣沒有意義。
3、效率
自動(dòng)化替代人工無疑是提高效率、節(jié)省成本的舉措;當(dāng)你需要分選超低含量的細(xì)胞時(shí),務(wù)必是個(gè)長時(shí)間工程,鞘液用光時(shí),其更換繁瑣度、耗時(shí)、連續(xù)性等都是需要考慮的。
二、單細(xì)胞分選優(yōu)勢:
1、可直接從培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞分選。
2、分離粘結(jié)活細(xì)胞的細(xì)胞亞群,分離熒光或者冷光標(biāo)記。
3、無標(biāo)記的和熒光的細(xì)胞都可通過軟件進(jìn)行自動(dòng)識別。
4、可確保細(xì)胞分離后活力,并且可培養(yǎng)。
5、分選熒光分子探針標(biāo)記的特定細(xì)胞。
6、單細(xì)胞收集進(jìn)行進(jìn)一步培養(yǎng)、克隆,RNA或者蛋白質(zhì)制備。
7、免疫制備,進(jìn)行目標(biāo)細(xì)胞分類。
8、可對各種粘結(jié)細(xì)胞進(jìn)行分類。
9、細(xì)胞篩選前的細(xì)胞培養(yǎng)。
10、一般的分選過程只需幾分鐘就可完成。
11、使用安裝在顯微鏡上的熒光濾片可實(shí)現(xiàn)多通道監(jiān)測。