詳細介紹
人EB病毒IgM(EBv-IgM)Elisa試劑盒是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗方法。由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。
實驗原理:
上海雅吉生物試劑盒檢測方法有:雙抗體夾心法、間接法、競爭法
標本要求
1.血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
2.血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成應再次離心。
3.尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4.細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
5.培養細胞:
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
6.組織標本:
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
7.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
8.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
標準品的稀釋:人EB病毒IgM(EBv-IgM)Elisa試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2000pg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
1000pg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
500pg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
250pg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
125pg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
溫育:操作同3。
洗滌:操作同5。
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
操作程序總結:
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
人EB病毒IgM(EBv-IgM)Elisa試劑盒注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間很好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
請每次測定的同時做標準曲線,很好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月
本說明書48T同樣適用
上海雅吉生物ELISA試劑盒特點體現:
一、高效、靈敏、特異---采用全進口材料和抗體
二、穩定的重復性和可靠性---的科技水平
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體---嚴格的生產流程和規范操作
ELISA試劑盒適用范圍:
一.適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型;
二.可檢測動物類型豐富:人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、兔、豬、犬、牛、綿羊、雞、蝦、魚等
三.可檢測指標齊全:白介素,干擾素,血管緊張素,肺炎衣原體,趨化因子、生長因子基質金屬蛋白酶、炎癥因子、血管生成素 等等 指標
人EB病毒IgM(EBv-IgM)Elisa試劑盒免費代測服務:
1.每個指標需提供100微升樣品,如做復孔則200微升
2、標本離心處理后請使用泡沫箱加冰袋郵寄至我司;
2、樣本在一周內使用,保存條件2-8度;
3、代測服務只反饋實驗結果原數據信息,不再提供相應試劑盒;
4、需支付相應試劑盒費用,代測不產生任何費用;
上海雅吉生物科技有限公司坐落于上海松江科技技園區,現擁有來自人、小鼠、大鼠、兔、豬等種屬的試劑盒5000余種,還可根據客戶要求定做試劑盒,提供免費代測服務。質量好,使我們擁有*的客戶;價格低,薄利多銷是我們生存的優勢?;服務好,讓我們在業界擁有很好的口碑。我們將一如既往堅持質量*,誠信為本的理念。?感謝新老客戶的博愛!!
上海雅吉生物科技有限公司鄭重承諾
凡購買本公司試劑盒有非人為質量問題,收貨后十五個工作日內包退換
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