谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GST）是一種多功能酶，在細胞解毒過程中發(fā)揮重要作用。GST通過催化谷胱甘肽（GSH）與外源化合物（如致癌物和藥物）的親電和/或疏水位點結(jié)合，保護細胞免受這些有害物質(zhì)的損害。

BioAssay Systems的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶試劑盒基于GSH與GST底物CDNB 之間的酶促反應(yīng)。GST催化形成的GS-DNB產(chǎn)生了一個二硝基苯硫醚，該產(chǎn)物可以在340 nm處通過光譜光度法檢測。340 nm處吸光度的增加速率與樣本中的GST活性成正比。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品谷胱甘肽s-轉(zhuǎn)移酶試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點

- 快速靈敏。線性檢測范圍（20 uL樣本）：在25°C下10分鐘反應(yīng)，檢測范圍為2至80 U/L。

- 方便高效。均質(zhì)“混合-孵育-測量"型檢測?？稍诟咄亢Y選液體處理系統(tǒng)上自動化操作，每天可處理數(shù)千個樣本。

應(yīng)用

用于測定生物樣本（如細胞裂解液、組織等）中的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性。

試劑盒組成（96孔板，100次檢測）

- 檢測緩沖液：25 mL

- 谷胱甘肽：粉末

- CDNB：120 uL

儲存條件

試劑盒在室溫下運輸。收到后將所有組分儲存于4°C。有效期：收到后6個月。

注意事項

- 試劑僅供研究使用。使用試劑時需遵循實驗室試劑的常規(guī)注意事項。詳細信息請參閱材料安全數(shù)據(jù)表。

操作步驟

本檢測基于動力學(xué)反應(yīng)。為確保孵育時間一致，加入工作試劑時需迅速，混合需短暫但充分。建議使用多通道移液器。檢測可在任何所需溫度下進行（例如25°C或37°C）。

樣本準備

- 組織：解剖前，用磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）沖洗組織以去除血液。將50 mg組織在含有2 mM EDTA的冷100 mM磷酸鉀緩沖液（pH 7.0）中用Dounce勻漿器勻漿。將勻漿后的組織在-80°C下冷凍以裂解細胞。解凍后，在4°C下以10,000 × g離心15分鐘。取上清液用于檢測。

- 細胞裂解液：通過在4°C下以2,000 × g離心5分鐘收集細胞（約400萬細胞）。對于貼壁細胞，不要使用蛋白酶酶收獲細胞，而是使用橡膠刮刀。在含有100 mM磷酸鉀（pH 7.0）和2 mM EDTA的冷緩沖液中適當體積中勻漿或超聲處理細胞。在4°C下以10,000 × g離心15分鐘。取上清液用于檢測。

- 所有樣本可在-20°C至-80°C下保存至少一個月。

檢測步驟

1. 試劑準備：在檢測前將所有試劑平衡至所需反應(yīng)溫度（例如25°C）。使用前短暫離心試管。用120 uL去離子水溶解谷胱甘肽，渦旋混合。未使用的谷胱甘肽試劑在-20°C下冷凍可穩(wěn)定保存三周。

2. 將每個樣本的20 uL分別加入不同的孔中。

3. 按每孔計算，將184 uL檢測緩沖液、1 uL溶解后的谷胱甘肽和1 uL CDNB混合，制備足夠所有反應(yīng)孔的工作試劑（WR）。向所有樣本孔中加入180 uL WR，輕輕敲擊孔板以混合。

4. 在0分鐘時讀取340 nm處的吸光度（OD???nm），并在0至10分鐘之間至少再讀取四個時間點的吸光度。如果條件允許，建議使用能夠進行動力學(xué)測量的酶標儀，并設(shè)置為每分鐘讀取一次340 nm處的吸光度，持續(xù)10分鐘。

所需材料（但未提供）

移液裝置、離心管、透明平底96孔板（如VWR貨號82050-760）和酶標儀。

實驗示例

文獻：

1. Csiszár, Jolán, et al. (2014). Glutathione transferase supergene family in tomato: Salt stress-regulated expression of representative genes from distinct GST classes in plants primed with salicylic acid. Plant Physiology and Biochemistry 78: 15-26.

2. Smeyne, Michelle, and Richard Jay Smeyne. (2013). Glutathione metabolism and Parkinson's disease. Free Radical Biology and Medicine 62: 13-25.

3. Watson, Mary A., et al. (1998). Human glutathione S-transferase P1 polymorphisms: relationship to lung tissue enzyme activity and population frequency distribution. Carcinogenesis 19.2: 275-280.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

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