谷氨酸脫氫酶（GLDH）是一種能夠催化谷氨酸和α-酮戊二酸相互轉(zhuǎn)化的酶。血液中GLDH水平升高表明肝臟受損，因此GLDH在肝病的診斷中發(fā)揮重要作用，尤其是與轉(zhuǎn)氨酶聯(lián)合使用時。表達微生物GLDH的轉(zhuǎn)基因植物在耐除草劑、耐干旱和抗病原體感染方面表現(xiàn)出更好的耐受性。BioAssay Systems的非放射性比色法GLDH檢測基于NADH偶聯(lián)的酶促反應(yīng)，將四氮唑鹽MTT還原為在565 nm處具有最大吸收峰的還原型MTT。565 nm處吸光度的增加與酶活性成正比。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品谷氨酸脫氫酶測定試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點

- 快速靈敏。線性檢測范圍（20 uL樣本）：30分鐘反應(yīng)為0.4至80 U/L，120分鐘反應(yīng)的檢測下限為0.1 U/L。

- 方便高效。均質(zhì)“混合-孵育-測量"型檢測。可在高通量篩選液體處理系統(tǒng)上自動化操作，每天可處理數(shù)千個樣本。

應(yīng)用

用于測定生物樣本（如血漿、血清、尿液、組織和培養(yǎng)基）中的GLDH活性。

試劑盒組成（96孔板，100次檢測）

- 檢測緩沖液：10 mL

- 二氫硫色素：120 uL

- NAD溶液：1 mL

- 校準液：1.5 mL

- MTT溶液：1.5 mL

- 底物：1.5 mL（1 M谷氨酸）

儲存條件

試劑盒在室溫下運輸。收到后將所有組分儲存于-20°C。有效期：收到后6個月。

注意事項

- 試劑僅供研究使用。使用試劑時需遵循實驗室試劑的常規(guī)注意事項。詳細信息請參閱材料安全數(shù)據(jù)表。

操作步驟

本檢測基于動力學(xué)反應(yīng)。為確保孵育時間一致，加入工作試劑時需迅速，混合需短暫但充分。建議使用多通道移液器。檢測可在任何所需溫度下進行（例如25°C或37°C）。

樣本準備

- 血清和血漿可直接檢測。

- 組織：解剖前，用磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）沖洗組織以去除血液。將50 mg組織在含有50 mM磷酸鉀（pH 7.5）的緩沖液中勻漿。在4°C下以10,000 x g離心15分鐘。取上清液用于檢測。

- 細胞裂解液：通過在4°C下以2,000 x g離心5分鐘收集細胞。對于貼壁細胞，不要使用蛋白酶酶收獲細胞，而是使用橡膠刮刀。在含有50 mM磷酸鉀（pH 7.5）的冷緩沖液中適當(dāng)體積中勻漿或超聲處理細胞。在4°C下以10,000 x g離心15分鐘。取上清液用于檢測。

- 所有樣本可在-20°C至-80°C下保存至少一個月。

試劑準備

將試劑平衡至所需反應(yīng)溫度（例如25°C或37°C）。使用前短暫離心試管。工作試劑（WR）的配制：對于每次96孔檢測，將10 uL底物、14 uL MTT溶液、9 uL NAD溶液、1 uL二氫硫色素和50 uL檢測緩沖液混合。空白工作試劑（BWR）的配制：對于每次96孔檢測，將14 uL MTT溶液、9 uL NAD溶液、1 uL二氫硫色素和60 uL檢測緩沖液混合（即不加底物）。建議現(xiàn)配現(xiàn)用工作試劑。

反應(yīng)準備

1. 將100 uL H?O（ODH?O）和100 uL校準液（ODCAL）溶液分別加入透明平底96孔板的孔中。

2. 將20 uL樣本分別加入兩個孔中。向一個樣本孔中加入80 uL WR，向另一個樣本孔中加入80 uL BWR。輕輕敲擊孔板以混合。

3. 在酶標儀上讀取565 nm處的吸光度（OD?），30分鐘后再次讀取（OD??）。

所需材料（但未提供）

移液裝置及配件（如多通道移液器）、透明平底96孔板（如Corning Costar）、離心管和酶標儀。

文獻：

1. Chou, KH and WE Splittstoesser, WE (1972) Glutamate dehydrogenase from pumpkin cotyledons characterization and

isoenzymes. Plant Physiol. 49: 550-4.

2. Yamaya, T et. al. (1984). Characteristics of glutamate dehydrogenase in mitochondria prepared from corn shoots. Plant Physiol. 76: 1009-13.

3. Cho, SW et. al. (1995). Two soluble forms of glutamate dehydrogenase isoproteins from bovine brain. Eru. J. Biochem. 233:340-6.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā)，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測試劑盒。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

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