羥脯氨酸是一種d特的修飾氨基酸，僅存在于幾種動物蛋白中，其中最常見的是膠原蛋白。膠原蛋白是細胞外基質的關鍵結構蛋白，因其驚人的強度而廣泛存在于結締組織中。由于膠原蛋白在動物中作為關鍵結構蛋白的作用，它在許多醫學應用中至關重要，例如組織移植和復雜細胞培養的支架。膠原蛋白也用于美容行業，因為它可以補充以增加組織的硬度，從而使皮膚看起來更年輕。

BioAssay Systems的羥脯氨酸檢測試劑盒提供了一種安全、簡單且靈敏的方法，用于定量檢測樣本中的羥脯氨酸。在此方法的第一步中，樣本中的羥脯氨酸被氧化為吡咯環。然后該化合物與染料試劑反應，產生一種可在560 nm處測量的粉紅色產物。羥脯氨酸幾乎僅存在于膠原蛋白中，因此羥脯氨酸含量可以用作膠原蛋白含量的替代指標。

作為BioAssay Systems在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品羥脯氨酸測定試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點

- 安全。本羥脯氨酸檢測采用改進的無高氯酸化學方法。

- 靈敏且準確。使用20 uL樣本。96孔板檢測的線性檢測范圍為0.5 ug/mL至50 ug/mL羥脯氨酸。

- 方便。膠原蛋白可以在Eppendorf管中水解，最終孵育可在37°C進行。

應用

- 直接檢測：生物和化妝品樣本中的羥脯氨酸和膠原蛋白。

試劑盒組成（96孔板，100次檢測）

- 試劑A：1 mL

- 氧化緩沖液：10 mL

- 試劑B：10 mL

- 羥脯氨酸標準品：200 uL

儲存條件

試劑盒在室溫下運輸。收到后將試劑盒組分儲存于4°C。有效期：收到后12個月。

注意事項

- 試劑僅供研究使用。打開前短暫離心試管。檢測前將所有組分平衡至室溫。使用試劑時需遵循實驗室試劑的常規注意事項。詳細信息請參閱材料安全數據表。

操作步驟

膠原蛋白樣本水解：本試劑盒檢測游離羥脯氨酸，因此任何含有膠原蛋白的樣本在檢測前必須進行水解。為了水解樣本，將50 uL樣本與50 uL 10N NaOH在Eppendorf管中混合。將管置于100?C加熱1小時（注意：固體樣本可能需要更長時間的水解）。讓管冷卻，然后用50 uL 10N HCl中和。用150 uL去離子水將樣本按1:1稀釋。離心管2分鐘，將所有液體收集到管中并沉淀雜質。

生物液體樣本（例如血清、細胞、尿液、組織裂解液）：首先離心以去除任何顆粒物。可能需要進行系列稀釋，以確保樣本在試劑盒的檢測范圍內。

96孔板操作步驟

1. 標準品準備：通過將20 uL 1 mg/mL羥脯氨酸標準品與380 uL去離子水混合，制備50 ug/mL羥脯氨酸標準品。然后按照下表描述，在1.5-mL離心管中制備標準品。

2. 將20 uL標準品和樣本分別加入透明平底96孔板的不同孔中。

3. 每孔將8 uL試劑A與90 uL氧化緩沖液混合。向每孔加入90 uL該混合液。輕拍孔板以混合，并在室溫下孵育10分鐘。

4. 向所有孔中加入90 uL試劑B。加入試劑B后，孔會變得渾濁，您必須上下移液，直到渾濁消散。

5. 在37°C的酶標儀或孵育箱中孵育90分鐘。

6. 在λ = 560 nm處讀取吸光度（OD）。使用90分鐘時間點的OD值進行分析。

所需材料（但未提供）

移液裝置、離心管、10 N NaOH和HCl、透明平底96孔板、酶標儀、加熱塊或熱水浴、孵育箱。

實驗示例

96孔板中的羥脯氨酸和膠原蛋白檢測

文獻：

1. Parenteau-Bareil, R., Gauvin, R., & Berthod, F. (2010). Collagenbased biomaterials for tissue engineering applications. Materials, 3(3),1863-1887.

2. Chattopadhyay, S., & Raines, R. T. (2014). Collagen-Based Biomaterials for Wound Healing. Biopolymers, 101(8), 821.

3. Lee, A., et al (2019). 3D bioprinting of collagen to rebuild components of the human heart. Science, 365(6452), 482-487.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區的高新技術生物技術公司，專注于研發、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫藥開發，以滿足生命科學行業日益增長的需求。BioAssay Systems在現代藥物發現領域擁有超過50年的豐富經驗，已經開發了超過250種用于藥物發現和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

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