乙醇脫氫酶（ADH）是一種氧化還原酶，能夠催化醇類與醛類或酮類之間的相互轉化。 在人類和其他生物體中，ADH對于分解可能具有毒性的醇類物質非常重要。在酵母菌和某些細菌中，ADH催化相反的反應，并在發酵過程中產生酒精。BioAssay Systems的非放射性、比色法ADH檢測基于NADH偶聯的酶促反應，將四氮唑鹽MTT還原為一種在565 nm處具有最大吸收峰的還原型MTT。在565 nm處的吸光度增加與酶活性成正比。

作為BioAssay Systems在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BioAssay Systems熱銷產品醇脫氫酶測定試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

主要特點

- 快速且靈敏。線性檢測范圍（20 ?L樣本）：30分鐘反應時間為0.4至80 U/L，120分鐘反應時間的檢測限為0.1 U/L。

- 便捷且高通量。均質“混合-孵育-測量"型檢測。可輕松在高通量篩選液體處理系統上自動化操作，每天可處理數千個樣本。

應用

- 生物樣本（如血漿、血清、尿液、組織和培養基）中乙醇脫氫酶活性的測定。

試劑盒組成（96孔板，100次檢測）

- 檢測緩沖液：10 mL

- 二氫硫辛酸：120 ?L

- NAD溶液：1 mL

- 校準液：1.5 mL

- MTT溶液：1.5 mL

- 底物：1 mL（10%乙醇）

儲存條件

- 試劑盒在室溫下運輸。收到后將所有組分存于-20°C。

- 保質期：收到后6個月。

注意事項

- 試劑僅供研究使用。使用試劑時應遵循實驗室試劑的常規預防措施。請參閱材料安全數據表以獲取詳細信息。

操作程序

- 本檢測基于動力學反應。為確保孵育時間一致，向樣本中加入工作試劑應迅速，混合應簡短但充分。建議使用多通道移液器。檢測可在任何所需溫度（例如25°C或37°C）下進行。

樣本準備

- 血清和血漿可直接檢測。

- 組織：解剖前，用磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）沖洗組織以去除血液。將組織（50 mg）在約200 ?L含有50 mM磷酸鉀（pH 7.5）的緩沖液中勻漿。在4°C下以10,000 x g離心15分鐘。取上清液進行檢測。

- 細胞裂解液：通過在4°C下以2,000 x g離心5分鐘收集細胞。對于貼壁細胞，不要使用蛋白酶收獲細胞，而是使用橡膠刮刀。在適當體積的冷緩沖液中勻漿或超聲細胞，緩沖液中含有50 mM磷酸鉀（pH 7.5）。在4°C下以10,000 x g離心15分鐘。取上清液進行檢測。

- 所有樣本可在-20至-80°C下至少保存一個月。

試劑準備

- 將試劑平衡至所需反應溫度（例如25°C或37°C）。使用前短暫離心試管。

- 工作試劑（WR）的配制：對于每次96孔檢測，將5 ?L底物、14 ?L MTT溶液、9 ?L NAD溶液、1 ?L二氫硫辛酸和55 ?L檢測緩沖液混合。

- 空白工作試劑（BWR）的配制：對于每次96孔檢測，將14 ?L MTT溶液、9 ?L NAD溶液、1 ?L二氫硫辛酸和60 ?L檢測緩沖液混合（即不加底物）。建議每次檢測前新鮮配制工作試劑。

所需材料（但未提供）

- 移液裝置及配件（例如多通道移液器）、透明平底96孔板（例如Corning Costar）、離心管和酶標儀。

示例：

在室溫下，使用200 uM腺苷檢測了牛小腸來源的不同量的腺苷脫氨酶（ADA），檢測時間為30分鐘。

文獻參考：

1. Kato, S et. al. (1984). Improved assay for alcohol dehydrogenase activity in serum by centrifugal analysis. Clin. Chem. 30:1817-20.

2. Yoshida, A et. al. (1981). Enzymatic and Structural Differences between Usual and Atypical Human Liver Alcohol Dehydrogenases. J. Biol.Chem. 256: 12430-6.

3. Theorell, H et. al. (1969). On the effects of some heterocyclic compounds on the enzymic activity of liver alcohol dehydrogenase.Acta Chem. Scand. 23: 255-60.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區的高新技術生物技術公司，專注于研發、生產和銷售高品質的生化檢測試劑盒，產品種類齊全，主要用于科學研究和生物醫藥開發，以滿足生命科學行業日益增長的需求。BioAssay Systems在現代藥物發現領域擁有超過50年的豐富經驗，已經開發了超過250種用于藥物發現和生命科學研究的檢測試劑盒。產品主要包括：1.血液尿液化學；2.酶活性測定；3.能量代謝；4.氧化應激；5.高通量HTS試劑；6.陰陽離子檢測。

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