二酰基甘油（DAG）是許多細胞脂質生物合成的關鍵中間體，在生化信號傳導中發揮著基礎性作用。

從結構上看，二酰基甘油是一種甘油酯，由2條脂肪酸鏈通過中心的甘油骨架連接而成。二酰基甘油是許多脂質（例如，甘油三酯、磷脂）的前體；然而，DAG還作為一種第二信使信號脂質發揮作用，它是通過磷脂酶C水解PIP?產生的，能夠引發細胞內Ca??的釋放和蛋白激酶C（PKC）的激活。最終，PKC酶參與了許多對正常細胞生理的修飾，影響了數百種底物。

Cell Biolabs的DAG檢測試劑盒通過耦聯酶反應系統測量樣本中的二酰基甘油含量。

首先，使用激酶對DAG樣本進行磷酸化，生成磷酸肌醇。接下來，使用脂肪酶將磷酸肌醇水解為甘油-3-磷酸。最后，甘油-3-磷酸在甘油-3-磷酸氧化酶（GPO）的作用下被氧化，產生過氧化氫，過氧化氫與試劑盒中的熒光探針（激發波長530-560 nm/發射波長585-595 nm）發生反應。

DAG檢測試劑盒是一種簡單的熒光法測定方法，采用96孔微孔板格式定量測量細胞裂解液中的總DAG（二酰基甘油）。

每套試劑盒提供的試劑足以進行多達100次測定，包括空白、標準品和未知樣本。試劑盒包含DAG標準品，檢測靈敏度限約為15 ?M。

*注意：每個樣本重復需要2次測定，一次加入激酶混合液（+Kin），一次不加（-Kin）。DAG的含量通過兩個孔的熒光讀數差異計算得出。

作為Cell Biolabs全國總代理，艾美捷科技強烈推薦Cell Biolabs熱銷產品DAG(二酰基甘油)檢測試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

DAG(二酰基甘油)檢測試劑盒組成（干冰運輸）：

DAG標準品（部件號50281D）：一瓶1 mL的2 mM 1,2-二油酰-sn-甘油。

10X測定緩沖液（部件號50192D）：一瓶1.5 mL。

激酶混合液（部件號50282D）：兩瓶1 mL，含有ATP。

脂肪酶溶液（部件號50193D）：三瓶1.4 mL。

酶混合液（部件號50194D）：三瓶1.75 mL。

熒光探針（部件號261901）：一瓶110 ?L的琥珀色瓶。

未提供材料：

標準96孔熒光黑色微孔板

含鎂和鈣的PBS

細胞脂質提取試劑（甲醇、氯仿、1M氯化鈉）

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儲存：

將整個試劑盒儲存于-80℃。通過分裝避免多次凍融。熒光探針對光敏感，應保存在琥珀色試管中。

文獻參考：

1. Yang, C. and Kazanietz, M.G. (2003) Trends Pharmacol. Sci. 24, 602-608.

2. Brose, N. et al. (2004) Curr. Opin. Neurobiol. 14, 328-340.

3. Athenstaedt, K. and Daum, G. (1999) Eur. J. Biochem. 266, 1-16.

4. Kanoh, H. et al. (2002). J. Biochem. (Tokyo) 131, 629-633.

5. Corbalan-Garcia, S. and Gomez-Fernandez, J.C. (2006) Biochim. Biophys. Acta 1761, 633-654

6. Wang, Q.J. (2006). Trends Pharmacol. Sci. 27, 317-323.

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