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中級(jí)會(huì)員 | 第6年

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奧林巴斯CKX53正置生物教學(xué)顯微鏡的使用技巧

時(shí)間:2025/2/11閱讀:134
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以下是奧林巴斯 CKX53 正置生物教學(xué)顯微鏡的一些使用技巧:


奧林巴斯CKX53顯微鏡樣品準(zhǔn)備技巧

切片制作:如果觀察的是組織切片,切片要盡量切得薄而均勻,厚度一般在 5-10 微米左右,這樣光線更容易透過(guò),圖像更清晰。例如觀察植物葉片的葉肉細(xì)胞,切片過(guò)厚會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞重疊,難以看清細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)。

樣品固定與染色:對(duì)于細(xì)胞等樣品,固定可以防止細(xì)胞變形或移動(dòng),便于觀察。染色時(shí)要根據(jù)觀察對(duì)象選擇合適的染色劑和染色時(shí)間。如觀察細(xì)胞核時(shí),可用甲基綠 - 吡羅紅染液,染色 5-10 分鐘,能使細(xì)胞核呈綠色,細(xì)胞質(zhì)呈紅色,便于區(qū)分。


奧林巴斯CKX53顯微鏡光源調(diào)節(jié)技巧

根據(jù)樣品特性調(diào)節(jié):如果樣品本身顏色較淺或透明度較高,如透明的微生物或細(xì)胞,光源亮度應(yīng)適當(dāng)調(diào)低,避免光線過(guò)強(qiáng)導(dǎo)致圖像發(fā)白,失去細(xì)節(jié);對(duì)于顏色較深或不透明的樣品,則需要適當(dāng)增加光源亮度。

調(diào)節(jié)色溫:可根據(jù)觀察需求調(diào)整色溫,一般來(lái)說(shuō),觀察活細(xì)胞等需要真實(shí)色彩還原的樣品時(shí),選擇接近自然光的色溫;觀察熒光樣品時(shí),可根據(jù)熒光顏色選擇合適的色溫來(lái)增強(qiáng)對(duì)比度。


奧林巴斯CKX53顯微鏡聚焦與成像技巧

低倍鏡找視野:先用低倍物鏡(如 4X 或 10X)找到樣品的大致位置和輪廓,將感興趣的區(qū)域移至視野中央,低倍鏡下視野范圍大,更容易找到目標(biāo)。

高倍鏡調(diào)清晰:轉(zhuǎn)換到高倍物鏡(如 40X 或 100X)后,使用細(xì)調(diào)焦旋鈕緩慢調(diào)節(jié)焦距,使圖像達(dá)到最佳清晰度。在高倍鏡下,微小的焦距變化都會(huì)對(duì)圖像清晰度產(chǎn)生很大影響,所以調(diào)節(jié)要格外小心。

利用景深:對(duì)于有一定厚度的樣品,可以通過(guò)微調(diào)焦距,觀察樣品不同層面的結(jié)構(gòu),利用景深來(lái)獲取更多信息。


奧林巴斯CKX53顯微鏡觀察方法選擇技巧

明場(chǎng)觀察:適用于觀察具有明顯顏色和形態(tài)差異的樣品,如染色后的細(xì)胞、組織切片等。調(diào)整孔徑光闌可改變圖像對(duì)比度,縮小光闌可增加對(duì)比度,但會(huì)降低亮度。

相襯觀察:對(duì)于透明或折射率差異小的樣品,如活細(xì)胞,相襯觀察能將細(xì)胞的厚度、折射率等差異轉(zhuǎn)化為可見(jiàn)的明暗對(duì)比,更清晰地觀察細(xì)胞的形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)。使用時(shí)要將相襯環(huán)準(zhǔn)確轉(zhuǎn)入光路,并調(diào)節(jié)聚光鏡和孔徑光闌。

熒光觀察:如果樣品進(jìn)行了熒光標(biāo)記,選擇合適的熒光激發(fā)塊和濾光片,根據(jù)熒光強(qiáng)度調(diào)節(jié) ND 濾鏡,避免熒光過(guò)強(qiáng)或過(guò)弱影響觀察效果。同時(shí),要注意熒光的淬滅問(wèn)題,盡量縮短觀察時(shí)間。


奧林巴斯CKX53顯微鏡圖像記錄與分析技巧

拍照參數(shù)設(shè)置:如果使用相機(jī)連接顯微鏡進(jìn)行拍照,要根據(jù)樣品的亮度、顏色等設(shè)置合適的曝光時(shí)間、增益、白平衡等參數(shù),以獲得高質(zhì)量的圖像。

圖像測(cè)量與分析:利用顯微鏡配套軟件中的測(cè)量工具,可對(duì)樣品的長(zhǎng)度、面積、角度等進(jìn)行測(cè)量。還可以進(jìn)行圖像拼接、對(duì)比度調(diào)整、色彩平衡等處理,以便更好地展示和分析樣品特征。


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