使用奧林巴斯進口顯微鏡 CKX53 觀察組織切片一般有以下步驟:
前期準備
熟悉顯微鏡操作:了解 CKX53 顯微鏡的各個部件及其功能,如光源調節旋鈕、粗細準焦螺旋、物鏡轉換器、載物臺調節旋鈕等。
檢查顯微鏡:確保顯微鏡的光源工作正常,亮度可調節。檢查物鏡和目鏡是否干凈,如有灰塵或污漬,需用專用的擦鏡紙輕輕擦拭干凈。
準備切片:從切片盒中取出需要觀察的組織切片,檢查切片是否完整、無破損,切片上的組織是否有脫落等情況。確保切片已經過合適的染色處理,如常用的 HE 染色,以便于觀察細胞和組織的形態結構。
顯微鏡操作與觀察
放置切片:打開顯微鏡載物臺的壓片夾,將組織切片平穩地放置在載物臺上,使切片上的組織部位正對著通光孔中心,然后輕輕合上壓片夾,固定切片。
低倍鏡觀察
調節光源:打開光源開關,通過調節亮度旋鈕,使光線強度適中。一般來說,開始觀察時,光線不宜過強,以免影響對組織形態的整體判斷。
粗調焦距:轉動粗準焦螺旋,使載物臺上升,同時從側面觀察物鏡與切片的距離,直到物鏡接近切片,但不要接觸到切片,避免壓碎切片或損壞物鏡。然后通過目鏡觀察,反向轉動粗準焦螺旋,使載物臺緩慢下降,直到能看到組織切片的大致圖像。
微調焦距:使用細準焦螺旋進行微調,使圖像更加清晰。在低倍鏡下對整個組織切片進行全面觀察,了解組織的整體結構、形狀、大小,以及病變組織在整個切片中的大致位置和范圍,確定需要進一步觀察的區域。
中倍鏡觀察
轉換物鏡:在低倍鏡下找到感興趣的區域后,將其移至視野中央,然后輕輕轉動物鏡轉換器,將低倍物鏡轉換為中倍物鏡,通常為 20 倍物鏡。
重新調焦:轉換物鏡后,由于不同物鏡的焦距略有差異,可能需要再次微調細準焦螺旋,使圖像清晰。在中倍鏡下可以更清楚地觀察組織的層次結構、細胞的排列方式、組織與組織之間的關系等,進一步確定病變的具體部位和特征。
高倍鏡觀察
再次轉換物鏡:將中倍鏡下觀察到的重點區域移至視野中央,轉動物鏡轉換器,換用高倍物鏡,一般為 40 倍或更高倍數的物鏡。
精細調焦:高倍鏡下視野變小,圖像放大倍數更高,此時只需輕微轉動細準焦螺旋,就能使圖像達到最佳清晰狀態。在高倍鏡下仔細觀察細胞的形態、大小、細胞核的形態、染色質的分布、細胞質的顏色和質地等細節,分析細胞是否存在異常變化,如細胞形態的改變、細胞核的增大或縮小、核仁的明顯程度等,判斷組織是否存在病變以及病變的類型和程度。
觀察記錄與結束工作
記錄觀察結果:可以使用顯微鏡自帶的圖像采集系統對典型的觀察圖像進行拍攝保存,也可以通過手繪的方式,繪制出觀察到的組織細胞形態和病變特征,并標注出關鍵結構和病變部位。同時,在實驗記錄本上記錄下觀察到的主要現象、病變特征、切片編號等信息,以便后續的分析和總結。
整理顯微鏡:觀察結束后,關閉顯微鏡光源開關,將物鏡轉回到低倍鏡位置,松開壓片夾,取下切片,將切片放回切片盒中妥善保存。用擦鏡紙將物鏡和目鏡擦拭干凈,如有必要,可使用少量的二甲苯等有機溶劑擦拭沾有油漬或污漬的鏡頭,但要注意擦拭后及時用干凈的擦鏡紙擦干,防止溶劑殘留損壞鏡頭。
清理臺面:清理顯微鏡載物臺和周圍的雜物,保持實驗臺面整潔干凈。
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