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堿性磷酸酶染色

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更新時間:2017-08-02 16:51:01瀏覽次數:2787次

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堿性磷酸酶染色
測定中性粒細胞內堿性磷酸酶活性。當粒細胞內有堿性磷酸酶存在時,在緩沖液(pH9.0-9.8)中,可將溫育液中的底物(β甘油磷酸酶)水解為磷酸根和甘油,磷酸根再與硝酸鈣中的Ca2+結合為磷酸鈣沉淀,此沉淀物再與硝酸鈷、硫酸銨等起一系列化學反應,Z后生成不溶性的黑色硫化鈷(CoS),定位于酶活性所在部位。

堿性磷酸酶染色

服務原理:

測定中性粒細胞內堿性磷酸酶活性。當粒細胞內有堿性磷酸酶存在時,在緩沖液(pH9.0-9.8)中,可將溫育液中的底物(β甘油磷酸酶)水解為磷酸根和甘油,磷酸根再與硝酸鈣中的Ca2+結合為磷酸鈣沉淀,此沉淀物再與硝酸鈷、硫酸銨等起一系列化學反應,zui后生成不溶性的黑色硫化鈷(CoS),定位于酶活性所在部位。
服務試劑:
1、固定液,包含甲醇90ml,甲醛10ml。
2、溫育液,3.2%β甘油磷酸鈉6ml,0.1M硫酸鎂溶液6ml,2%硝酸鈣9ml,加水至50ml(pH9.8)。固定液及溫育液均放在4℃冰箱保存。
3、2%硝酸鈷溶液。
4、1:80稀釋硫酸銨溶液。
5、2%沙黃溶液。
服務操作:
1、涂片置固定液(4℃,30s)。
2、水洗數秒。
3、放入新鮮溫育液,37℃2h。
4、取出后,用水(含有數滴2%硝酸鈣溶液)沖洗數秒。
5、侵入2%硝酸鈷5min,然后用水沖洗。
6、侵入新鮮配制的1:80硫酸銨中10s,水洗。
7、2%沙黃水溶液中10s復染、水洗。待干(也可用瑞氏染液復染)。
結果:陽性反應呈灰黑色至深黑色顆粒狀或片塊狀沉淀,定位于胞漿中。成熟中性粒細胞有此顆粒。

 

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