microRNA實時定量PCR檢測服務

microRNA實時定量PCR/miRNA實時熒光定量PCR/實時熒光定量PCR/QPCR

實時熒光定量PCR技術(shù)是在普通PCR反應體系中加入熒光試劑，利用熒光信號實時檢測PCR進程，zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR能夠?qū)Ｒ弧㈧`敏、快速、高重復性地精確定量起始模板濃度。成熟miRNA是由21-25個核苷酸組成的小RNA，由于長度太短，不能通過傳統(tǒng)的實時定量PCR進行檢測。本公司通過特殊設(shè)計的莖環(huán)結(jié)構(gòu)的反轉(zhuǎn)錄引物，配合實時定量PCR引物及探針可以精確檢測微量樣品中miRNA表達水平，也可以用終點PCR法定性檢測。

服務流程：
1.引物設(shè)計、合成
設(shè)計并合成目的miRNA的莖環(huán)RT引物、PCR引物和檢測用熒光探針，并合成該miRNA相應的DNA寡核苷酸作為標準。
2.樣品RNA抽提
a．組織樣品：取適量（50～100mg）新鮮組織或正確保存的組織樣品，勻漿后用PURELINK^TM試劑抽提RNA。
b．細胞樣品：取1×10⁶～1×10⁷細胞，PBS清洗細胞，吸去PBS后用PURELINK^TM試劑抽提RNA。
3.RNA質(zhì)量檢測
a．紫外吸收測定法測定RNA在波長260nm和280nm的吸收值，獲得RNA的濃度并通過A260/280及A260/230的吸收比值判斷RNA的純度。
b．甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA純度和完整性。
注：用于miRNA實時定量PCR檢測的RNA樣品，必須高純度、完整，沒有RNase 污染（降解的樣品不能用于實時定量PCR檢測），同時提取方法必須保證所得樣品包含完整的小RNA部分。
4.逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA
利用莖環(huán)引物逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA*鏈。
5.實時定量PCR
以合成的cDNA作為模板進行實時定量PCR擴增，梯度稀釋的標準同時進行實時定量PCR擴增，根據(jù)Ct值制備標準曲線。以同樣的方法測定每個樣品中U6 snRNA含量作為內(nèi)參.
6.分析結(jié)果、提供實驗報告
分析實時定量PCR結(jié)果，根據(jù)標準曲線定量樣品中的目的miRNA。提供實驗報告，包括詳細的實驗方法，實時定量PCR實驗數(shù)據(jù)和圖表。

收費標準/服務周期/提供結(jié)果：
詳談，我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務協(xié)議。

【本公司合作項目】
慢病毒，腺病毒，RNAi類，分子生物實驗，病理實驗，免疫學實驗，細胞實驗，動物實驗，蛋白組學實驗等，能夠進行藥效學評價、毒理學評價、細胞藥篩、動物建模、病理檢測、蛋白組學、代謝組學、高通量測序、ChIP、CO-IP、生物信息學分析服務！

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