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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
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產品介紹
產品簡介
NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一種比較溫和的細胞組織裂解液。含有sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制劑，可以有效抑制蛋白降解。NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(Co-IP)和ELISA等實驗。
產品信息
貨號 | 20121ES60 |
規格 | 100 mL |
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期1年。盡量避免反復凍融，建議分裝后使用。
使用說明
(一) 細胞樣品
1. 融解NP-40裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM。
2. 貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液清洗細胞一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸動物細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。植物細胞宜在冰上裂解2-10分鐘。
懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成5×105-1×106個細胞/管，然后再裂解。因為大團的細胞較難裂解充分，而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。
充分裂解后，10000-14000 g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入150 μL裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200 μL 或250 μL。每100萬動物細胞用100 μL本產品裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為2-4 mg/ml，不同細胞有所不同。
（二）組織樣品：
1. 把 切成細小的碎片。
2. 融解NP-40裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM。
3. 按照每20 mg組織加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。）
4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000 g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得充分。
注意事項
需自備PMSF(Cat#20104ES)，裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。
用NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定其蛋白濃度（Cat#20201ES/20200ES）。 由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
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本產品僅作科研用途。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
