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06
2013年
08月 -
一、原理非顯帶染色體除可根據形態分辨部分染色體，其他多數染色體難以確認，而顯帶技術則可使染色體縱向長度上出現不同帶紋，以辨認全部染色體。GTG即G帶，Trypsin（胰酶），Giemsa的簡寫。Giemsa染料是噻嗪——曙紅染料，染色體的著色有賴于在原位形成噻嗪--曙紅（2∶1）的沉淀物。著色首先取決于二個噻嗪分子同DNA結合，在此基礎上再結合一個曙紅分子，其次取決于一個疏水環境，以利于染料沉淀而著色。通過胰酶的顯帶預處理可除去陰性G帶區的疏水蛋白，或使它們的結構變成更疏水狀態。由此可知，在G顯【查看全文】
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06
2013年
08月 -
1．確定抗生素作用的*濃度：不同的細胞株對各種抗生素有不同的敏感性，因此在篩選前要做預試驗，確定抗生素對所選擇細胞的zui低作用濃度。①提前24小時在96孔板或24孔板中接種細胞8孔，接種量以第二天長成25%單層為宜，置CO2孵箱中37℃培養。②將培養液換成含抗生素的培養基，抗生素濃度按梯度遞增0,（50,100,200,400,600,800和1000μg/ml）。③培養10-14天以絕大部分細胞死亡濃度為準,一般為400-800μg/ml，篩選穩定表達克隆時可比該濃度適當提高一個級別維持時使【查看全文】
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06
2013年
08月 -
1.加入1/10體積的乙酸鈉（3mol/L，PH=5.2）于DNA溶液中充分混勻，使其zui終濃度為0.3mol/L；2.加入2倍體積用冰預冷的乙醇混合后再次充分混勻置于-20℃中15~30分鐘；3.12,000g離心10分鐘，小心移出上清液，吸去管壁上所有的液滴；4.加入1/2離心管容量的70％乙醇，12000g離心2分鐘，小心移出上清液，吸去管壁上所有的液滴；5.于室溫下將開蓋的EP管的置于實驗桌上以使殘留的液體揮發至干；6.加適量的ddH2O溶解DNA沉淀。【查看全文】
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06
2013年
08月 -
實驗題目：目的基因的亞克隆一、實驗目的1、掌握細菌基因組提取的方法和原理。2、掌握限制性核酸內切酶處理基因組及其結果分析。3、掌握基因片段回收的方法。二、實驗原理細菌基因組的提取：通過堿法或者酶法裂解細菌之后，可以將胞內的核酸和蛋白質全釋放出來。DNA溶于1mol/L的NaCl中，不溶于0.14mol/L的NaCl，而RNA溶于0.14mol/L的NaCl不溶于1mol/L的NaCl中，通過溶液中鹽濃度的變化可以將DNA和RNA分開。氯仿－異戊醇法除去蛋白，2倍體積乙醇將DNA沉淀出來。限制性核【查看全文】
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06
2013年
08月 -
方法一A液：1M，MnCl2：B液：1M，HEPES，pH=6.2-6.8，用無菌水配，配后不需滅菌；C液稱取CaCl20.10g，KCl1.18g，全部轉入細口試劑瓶，然后加入46ml三蒸水，輕輕振蕩使所有組分充分溶解。將瓶塞蓋上并用牛皮紙、棉線包扎，然后放入滅菌鍋121℃高壓滅菌備用。取1管B液（0.6ml），全部加入C液（46ml）中，混勻后，再用1ml移液器加入3.3mlA液，混勻冰浴即可使用。劃線得到單菌落，37℃培養箱培養約17小時，挑取2-4個形態飽滿的單菌落接種于裝有100mlS【查看全文】
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06
2013年
08月 -
DNA實驗技術：質粒是攜帶外源基因進入細菌中擴增或表達的主要載體，它在基因操作中具有重要作用。質粒的分離與提取是Z常用、Z基本的實驗技術。
測定DNA的核苷酸序列是分析基因結構與功能關系的前提。從小片段重疊法到加減法、雙脫氧鏈終止法、化學降解法、自動測序，DNA測序技術發展很快。目前在實驗室手工測序常用Sanger雙脫氧鏈終止法。Sanger法就是使用DNA聚合酶和雙脫氧鏈終止物測定DNA核苷酸序列的方法。它要求使用一種單鏈的DNA模板或經變性的雙鏈DNA模板和一種恰當的DNA合成引物。其基本原理是DNA聚合酶利用單鏈的DNA模板，合成出準確互補鏈，在合成時，某種dNTP換成了ddNTP，這時，DNA聚合酶利用2’，3’-雙脫氧核苷【查看全文】
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06
2013年
08月 -
質粒是攜帶外源基因進入細菌中擴增或表達的主要載體，它在基因操作中具有重要作用。質粒的分離與提取是zui常用、zui基本的實驗技術。質粒的提取方法很多，大多包括3個主要步驟：細菌的培養、細菌的收集和裂解、質粒DNA的分離和純化。本實驗以堿裂解法為例，介紹質粒的抽提過程。實驗目的：掌握堿裂解法抽提質粒的原理、步驟及各試劑的作用。實驗材料：含有質粒pUC18載體的大腸桿菌菌液，克隆有水稻外源片段的BAC的大腸桿菌菌液。實驗原理：在pH12.0~12.6堿性環境中，細菌的線性大分子量染色體DNA變性分開【查看全文】
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02
2013年
08月 -
標簽：DNA重組限制性內切酶酶切連接連接酶利用限制性核酸內切酶切割DNA和利用DNA連接酶連接DNA是DNA重組過程中的關鍵步驟之一。成功的酶切和有效的連接為后續的外源基因進入宿主細胞進行表達提供了有效的實驗材料。實驗方法質粒DNA酶切DNA段連接實驗方法原理限制性內切酶能夠特異性地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異性位點上，并切割雙鏈DNA。實驗材料標準pUC19（2686bp）試劑、試劑盒EcoRI及其配套的酶切緩沖液0.5×TBE電泳緩沖液6×LoadingBu【查看全文】
